筛整粒，加入10g交联聚维酮及3g 硬脂酸镁混匀后，制成1000片。
[0030] 以实施例2制备得到的黑老虎提取液来制备黑老虎保肝片，制备方法同上。
[0031] 以实施例3制备得到的黑老虎提取液来制备黑老虎保肝胶囊，制备方法为：称取 250g实施例3的黑老虎提取物，加入250g硫酸钙、10g交联聚维酮混匀。以适量80%乙醇 作润湿剂制成软材，以14目筛制粒，于60°C温度下干燥后过12目筛整粒，填入空胶囊中，即 得。
[0032] 实施例5 研究实施例4制备的黑老虎保肝胶囊对大鼠非酒精性脂肪肝的治疗作用，具体步骤如 下： 高脂高糖乳剂的制备：取猪油25g，加热溶解，加入胆固醇10g，搅拌至完全溶解；再加 入丙硫氧啼啶lg和7mL聚山梨酯-80,充分搅勾。在另一烧杯中加入鹿糖20g于适量的蒸 馏水中溶解，再加入脱氧胆酸钠2g，适当加热并充分搅拌直至溶解。将两种溶液充分混匀， 最后加水稀释至100mL即制成尚脂尚糖乳剂。
[0033] 分组、造模、给药：SD大鼠60只（SD大鼠，SPF级，体质量180~200g)，实验开 始前禁食不禁水12,将大鼠随机分成6组，每组10只：对照组、模型组、辛伐他汀阳性对照 组(给药量4mg/kg)、HLH高剂量组(生药给药6.Og/kg)、HLH中剂量组(生药给药3. 0g/ kg)、HLH低剂量组(生药给药1. 5g/kg)。除对照组给予普通饲料外，其他组灌胃高脂高糖乳 剂(大鼠非酒精性脂肪肝模型）且自由饮水，造模同时4个给药组灌胃给予相应药物(剂量 10mL/kg)，对照组及模型组给予等量生理盐水，连续8周。
[0034] 标本采集：在实验结束时即第8周末，大鼠用3. 3%水合氯醛lmL/kg麻醉，剖开腹 部，分离腹主动脉，取血约5mL，离心分离血清，-20°C保存备用。大鼠脱颈椎处死，立即摘取 肝脏，生理盐水涤洗，滤纸吸干，称质量，取肝左外侧叶部位的肝组织多块，每块约0. 5g，精 密称定，分别置于1. 5mL的EP管中，于-20°C冰箱保存备用。
[0035] 指标检测：用相应试剂盒检测血清！'(：、了6、1101-(：、？?4、431'、41^水平，〇^-(：水平 根据Friedwald公式（LDL-C=TC-HDL-C-TG/ 2. 2)计算。取肝组织，计算肝指数。
[0036] 另取0.5g肝左外侧叶部位组织用氯仿-甲醇提取液(二者的体积比为1 : 1)制 成勾衆，提取液定容至5mL，混勾。经24h震荡抽提，3000r/min离心5min得上清液，分别采 用氧化酶法、磷酸甘油酶法测定肝脏中TC、TG。用生理盐水制成10%的肝组织匀浆以测定 S0D、MDA〇
[0037] 统计学方法：采用SPSS13.0统计软件对数据进行分析，数据均用x±s表示， 各组均数间比较采用方差分析。
[0038] 试验结果： 对非酒精性脂肪肝大鼠血脂水平和FFA的影响：与对照组比较，模型组大鼠血清TC、LDL-C、FFA显著升高（P<0. 01)，HDL-C显著降低（P<0. 01)，表明造模成功。给药8周 后，辛伐他汀、HLH均能显著降低血清TC、LDL-C、FFA水平（P< 0. 05、0. 01)，显著升高HDL-C 水平（P< 0. 05、0. 01)，而TG与模型组比较无显著差异（P> 0. 05)。结果见表1。
[0039] 表1 .HLH对非酒精性脂肪肝大鼠血脂和FFA水平的影响n=\Q)
注明：与对照组比较〈〇? 〇5TT尸〈0? 01 ;与模型组比较：*尸〈0? 05**尸〈0? 01 ;下表同。
[0040] 对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数及肝脂质水平的影响：与对照组比较，模型组肝指 数及肝脏中TC、TG水平均明显升高（P< 0. 01)。与模型组比较，辛伐他汀、HLH高剂量和中 剂量均能显著降低肝指数（P< 0. 05);辛伐他汀和HLH各剂量还能显著降低肝脏TC、TG水 平（P< 0. 01)，表明HLH能够显著减少脂质在肝脏中的积聚，从而减轻肝脂质变化程度。结 果见表2。
[0041] 表2.HLH对非酒精性脂肪肝大鼠肝指数及肝脂质水平的影响(imn=m
对非酒精性脂肪肝大鼠血清中肝功能指标的影响：与对照组比较，模型组大鼠血清AST、ALT水平均明显升高（P< 0. 01)。与模型组比较，辛伐他汀、HLH各剂量均能显著降低 AST、ALT水平（P< 0. 05、0. 01)，表明HLH对非酒精性脂肪肝大鼠具有明显的保肝作用。结 果见表3。
[0042] 表3.HLH对非酒精性脂肪肝大鼠肝功能的影响(系/?=10)
对非酒精性脂肪肝大鼠肝MDA和SOD的影响：与对照组比较，模型组SOD活性显著下 降、MDA的量明显增加（P< 0. 01)。与模型组比较，辛伐他汀组和HLH高、中剂量组S0D活 性显著增强（P< 0. 05、0. 01)，MDA的量明显下降（P< 0. 01);而HLH低剂量组的S0D活性 和MDA的量与模型组无显著差异。结果表明HLH具有增强S0D活力、抗脂质过氧化的作用。 结果见表4。
[0043] 表4.HLH对非酒精性脂肪肝大鼠肝中MDA和S0D的影响(il，/?=1〇)
【主权项】
1. 一种黑老虎提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：51. 黑老虎粉碎后，用6~12倍体积50~95%乙醇溶液提取1~3次，每次提取1~ 3h，放冷后过滤，合并滤液，浓缩得稠膏；52. 取稠膏悬浮于1~5倍体积的水中，用1~3倍体积石油醚-乙酸乙酯混合溶剂反 复萃取1~3次，合并有机溶剂萃取层，回收溶剂，干燥，粉碎得黑老虎提取物。2. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，50~95%乙醇溶液每次提取的时间 为2h。3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述石油醚-乙酸乙酯混合溶剂中乙 酸乙酯的体积百分比含量为30~100%。4. 根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，用8倍体积70%乙醇溶液提取2次。5. 根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，用2倍体积石油醚-乙酸乙酯混合溶 剂反复萃取2次。6. 黑老虎提取物在制备治疗或预防非酒精性脂肪肝药物中的应用。7. 权利要求1制备得到的黑老虎提取物在制备治疗或预防非酒精性脂肪肝药物中的 应用。8. 根据权利要求6或7所述的应用，其特征在于，非酒精性脂肪肝是指由于高脂饮食导 致的脂肪肝。
【专利摘要】本发明属于中草药提取技术领域，具体公开了一种黑老虎提取物的制备方法及在治疗非酒精性脂肪肝中的应用。所述制备方法的具体步骤为：S1.黑老虎粉碎后，用6～12倍体积50～95%乙醇溶液提取1～3次，每次提取1～3h，放冷后过滤，合并滤液，浓缩得稠膏；S2.取稠膏悬浮于1～5倍体积的水中，用1～3倍体积石油醚-乙酸乙酯混合溶剂反复萃取1～3次，合并有机溶剂萃取层，回收溶剂，干燥，粉碎得黑老虎提取物。本发明制备得到的黑老虎提取物中联苯环辛二烯型木脂素类成分总含量在50～100%之间。而且，本发明首次发现黑老虎提取物可用于治疗非酒精性脂肪肝，治疗效果显著。
【IPC分类】A61K36/57, A61K36/79, A61P1/16
【公开号】CN105168520
【申请号】
【发明人】王来友, 韩亮, 王凤云, 何琳
【申请人】广东药学院
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月24日