一种多糖苷化五环三萜-28-酸及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药及其制备和应用的技术领域，具体涉及一种多糖苷化五环三 萜-28-酸及其制备方法及在制备抗糖尿病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一种以慢性血糖水平增高为特征的代谢疾病，近年来，患病率及死亡率 都呈现出迅速上升的趋势，成为继肿瘤、心血管疾病之后的威胁人类健康的第三大疾患。目 前主要诊治方法为通过注射胰岛素和口服降糖药物来控制血糖浓度。目前较为常见的化学 药物主要有双胍类化合物、噻唑烷二酮类化合物（TZDs)以及磺酰脲类化合物等，这些合成 药物虽然见效快、疗效明显，但副作用也较大。因此，研究天然资源中作用温和、毒副作用小 的降糖成分是发展的趋势和方向。许多研究表明，多羟基五环三萜酸类化合物诸如科罗索 酸、山楂酸等具有一定的抗糖尿病活性。但其水溶性差和生物利用率低等问题严重制约了 它们在临床的应用。
【发明内容】
[0003] 本发明的第一个目的是提供一种通过引入糖基基团，使得具有一定降糖活性的 多羟基五环三萜-28-酸类化合物在保持或者提高其降糖活性的基础上改善其水溶性， 得到水溶性好、作用温和、毒副作用小的新型a-葡萄糖苷酶抑制剂：多糖苷化五环三 萜-28-酸，可应用于糖尿病的治疗。
[0004] 本发明的第二个目的是提供一种多糖苷化五环三萜-28-酸的制备方法，该多糖 苷化五环三萜-28-酸对a -葡萄糖苷酶体外抑制活性进行评价。
[0005] 本发明的第三个目的是提供多羟基五环三萜酸糖苷在制备抗糖尿病药物中的应 用。
[0006] 本发明的第一个目的是这样实现的：
[0007] -种多糖苷化五环三萜-28-酸，具有以下结构通式：
[0009]其中：其中：?,?= CH 3或 H ;R4= R3O或C = 0 ;R5= COOH 或 CH 3或CH2OR35R6 = 013或CH2OR35R3为醛糖作原料形成的基团，醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、 阿拉伯糖、木糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽 四糖、异麦芽四糖。
[0010] 本发明的第二个目的是这样实现的：
[0011] -种多糖苷化五环三萜-28-酸的制备方法，具体步骤如下：
[0012] (1)将卤化苄和多羟基五环三萜-28-酸按照摩尔比1-10:1混合，并加入相对于 多羟基五环三萜-28-酸1-5倍摩尔量的无机碱，最后加入有机溶剂（如二甲基亚砜）并混 匀；在50-150°C油浴条件下搅拌反应l_48h ;加入蒸馏水，待固体析出，过滤，烘干，得多羟 基五环三萜酸-28-苄酯；
[0013] (2)将多羟基五环三萜酸-28-苄酯与三氯乙酰亚胺糖酯按摩尔比1:1-10溶于二 氯甲烷中，加入分子筛，搅拌l_60min ;滴入20滴催化剂，室温搅拌l-24h ;过滤，减压浓缩， 再经柱层析分离后得到多全苯甲酰化糖苷-五环三萜酸-28-苄基酯；
[0014] (3)将多全苯甲酰化糖苷-五环三萜酸-28-苄基酯溶于乙酸乙酯中并加入钯碳 (Pd/C)，将H 2通入反应体系，搅拌反应l-12h ;过滤，减压蒸馏得多全苯甲酰化糖苷-五环三 萜-28-酸；
[0015] (4)将多全苯甲酰化糖苷-五环三萜-28-酸溶于甲醇中，并加入甲醇-甲醇钠溶 液，常温搅拌l_24h ;向体系中加入氢型酸性阳离子树脂，过滤，减压浓缩，再经柱层析分离 得到目标产物：多糖苷化五环三萜-28-酸。
[0016] 所述多羟基五环三萜-28-酸为：
[0018] 其中：?, R2= CH 3或 H ;R 4= OH 或 C = 0 ;R 5= C00H，CH 3或 CH 20H ;R6= CH 3或 CH2OH0
[0019]所述多羟基五环三萜酸-28-苄酯为：
[0020]
[0021] 其中：?,R2=CH3或H;R4=OH或C= 0;R5=COOBn，CH3或CH20H;R6=CH3或 CH2OH0
[0022] 所述三氯乙酰亚胺糖酯为具有醛糖结构的还原糖为原料形成的三氯乙酰亚胺糖 酯（下式实例为三氯乙酰亚胺葡萄糖酯）。醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、 阿拉伯糖、木糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽 四糖、异麦芽四糖。
[0023]
[0024] 所述多全苯甲酰化糖苷-五环三萜-28-酸苄基酯为：
[0026]其中：1^，1?2=013或11 ;1?4=1?3'0或〇=0;1?5=0)(?11，，01 3或01201?3';1?6=01 3 或CH2OIV;R3'为醛糖中羟基经苯甲酰基进行全保护，所得到的全苯甲酰化的糖基（上式 实例为全苯甲酰化葡萄糖基）。醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、木 糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽四糖、异麦 芽四糖。
[0027] 所述多全苯甲酰化糖苷-五环三萜-28-酸为：
[0029]其中：1^，1?2=013或11 ;1?4=1?3'0或〇=0;1?5=0)011，，01 3或01201?3'；1?6=01 3 或CH2OIV ;R3'为醛糖中羟基经苯甲酰基进行全保护，所得到的全苯甲酰化的糖基（上式 实例为全苯甲酰化葡萄糖基）。醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、木 糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽四糖、异麦芽 四糖。
[0030] 步骤（1)中所述卤化苄为溴化苄或氯化苄。
[0031] 步骤（1)中所述无机碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾。
[0032] 步骤（1)中所述有机溶剂为DMSO、DMF或1，4-二氧六环。
[0033] 步骤（2)中所述催化剂为三氟甲基磺酸三甲基硅酯（TMSOTf)或三氟化硼乙醚。
[0034] a _葡萄糖苷酶是依附在小肠上皮膜的结合酶，主要作用是催化二糖和寡糖糖苷 键的裂解作用，从而使得人体血糖浓度升高。本发明通过抑制a-葡萄糖苷酶的活性，能很 大程度的维持人体内血糖浓度，从而控制糖尿病症状并减少并发症的发生。因此，本发明通 过对所合成的多羟基五环三萜酸糖苷进行体外a _葡萄糖苷酶活性测试，来评价其抗糖尿 病的活性。
[0035] 本发明的优点在于：通过在多羟基五环三萜-28-酸的羟基位置上引入多个强极 性的糖基成苷，在保持或提高多多羟基五环三萜-28-酸降糖活性的基础上进一步增强其 水溶性，合成了一系列水溶性好，作用温和，毒副作用小的a -葡萄糖苷酶抑制剂，可更广 泛地进行抗糖尿病方面的临床应用。
【具体实施方式】
[0036] 下面结合实施例对本发明做进一步地详细说明，但本发明要求保护的范围并不局 限于实施例所表示的范围。
[0037] 实施例1
[0038] -种2 a，3 P -2- (0- P -D-吡喃葡萄糖苷）齐墩果烷-28-酸的合成，具体步骤如 下：
[0039] ⑴2 a，3 0 -二羟基-齐墩果烷-28-酸苄酯的合成：
[0041 ]将 2a_ 羟基齐壤果酸（10g，21. 2mmol)，碳酸钟（6g，43. 6mmol)溶于 50mL DMF 中， 并加入4. 2mL BnBr，在反应温度为50°C的条件下，搅拌反应24h。加入蒸馏水，待固体析出， 过滤，烘干得目标产物ll.Og，收率为92.0%，熔点为155-157°C ;
[0042] (2) 2 a，3 P-二-0- (2, 3, 4, 6-4-0-苯甲酰基-P -D-吡喃葡萄糖苷）-齐墩果 烷-28-酸苄酯的合成：
[0044] 将步骤⑴的产物（lg，I. 8mmol)与三氯乙酰亚胺葡萄糖酯（2. 94g, 3. 95mmol)溶 于二氯甲烷中，并加入5滴TMSOTf，室温搅拌24h。过滤，减压浓缩，粗产物以石油醚/乙酸 乙酯进行柱层析分离，得到I. 56g产物，收率为50. 5%。熔点143-144°C ;
[0045] (3) 2 a，3 P-二-0- (2, 3, 4, 6-3-0-苯甲酰基-P -D-吡喃葡萄糖苷）-齐墩果 烷-28-酸的合成：
[0046]
[0047] 将步骤（2)中产物（0. 99g，0. 58mmol)溶于30mL乙酸乙酯中，加入700mgPd/C并 通入氢气，搅拌反应24h。过滤，减压浓缩除去乙酸乙酯，得到产物0.83g，产率为88. 2%， 熔点 161-162°C;
[0048](4) 2 a，3 P-二-(0- P -D-呋喃葡萄糖苷）-齐墩果烷-28-酸的合成：
[0050] 将步骤（3)中产物（754mg，0. 46mmol)溶于20mL甲醇中，加入I.OmT,甲醇-甲醇 钠溶液（33%)，搅拌反应24h。加入DowexH+resin将反应体系pH调至中性，过滤，减压 浓缩，以氯仿/甲醇的展开剂体系对粗产物进行柱层析分离，得到目标产物498mg，产率为 88. 3%，熔点为 253-255°C。
[0051] 谱图数据jHNMRGOOMHz,DMS0-d6) :S5. 14 (s, 1H)，4. 46 (d,J= 4. 4Hz, 1H), 4. 30 (d,J= 7. 1Hz, 1H), 4. 02-4. 01 (m, 1H), 3. 71-3. 68 (m, 1H), 3. 65-3 .62 (m, 2H), 3. 54-3. 36 (m, 8H), 3. 32-3. 30 (m, 2H), 3. 28-3. 26 (m, 1H), 3. 23-3. 13 (m, 5H), 3. 09-3. 06 (m, 1H), 3. 05-3. 02 (m, 1H), 2. 99-2. 95 (m, 1H), 2. 74-2. 72 (m, 1H),I .97-1. 96 (m, 1H),I. 89-1. 82 (m, 3H),I. 86-1. 56 (m, 3H),I. 52-1. 45 (m, 3H),I. 42-1. 36 (m, 2H),I. 31-1. 26 (m, 2H),I. 23-1. 21 (m, 1H),I. 07 (s, 3H),I. 02 (s, 3H), 0. 87(s ，3H)，0? 86 (s, 3H)，0? 85 (s, 3H)，0? 79 (s, 3H)，0? 69 (s, 3H) ? 13C匪R(100MHz,DMS0-d6) :8 178. 8, 144. I, 121. 3,