104. 4, 96. 4, 86. 5, 76. 5, 73. 7, 72. I, 70. 5, 70.1 , 69. 5, 69. 3, 65. 4, 62. 8, 54. 3, 52. 2, 47. I, 45. 8, 45. 5, 44. 0, 41. 4, 40. 9, 38. 9, 37. 3, 33. 5, 32. 9, 32. 4, 32. 2, 3 0. 5, 28. I, 25. 7, 23. 5, 23. 2, 22. 7, 17. 8, 17. 7, 16. 9, 16. 3. MS(HRMS) :m/z [M+Na]+calcd for C40H64O12Na: 759. 4290 ;found:759. 4259。
[0052] 实施例2 :
[0053]2a，30-二-0-(0-D-吡喃半乳糖苷）-(1 - 4)-(0-D-吡喃葡萄糖苷）_乌苏 烷-28-酸的合成，具体合成步骤同实施例1。
[0054] 熔点：291-293cC。
[0055] 谱图数据 jHNMRGOOMHz，DMS0-d6) : S 5. 10 (s，1H)，4. 47 (d，J = 7. 5Hz, 1H), 4. 36 (d, J = 7. 0Hz, 1H), 4. 18-4. 15 (m, 2H), 3. 90-3. 88 (m, 1H), 3. 76-3. 7 4 (m, 2H), 3. 62-3. 59 (m, 4H), 3. 58-3. 54 (m, 4H), 3. 53-3. 50 (m, 4H), 3. 49-3. 42 (m, 8H) ,3. 33-3. 28 (m, 9H), 3. 27-3. 21 (m, 6H), 3. 12-3. 06 (m, 2H), 2. 13-2. 12 (m, 2H), I. 91-1. 83 (m, 4H), I. 73 (s, 2H), I. 55-1. 39 (m, 8H), I. 26-1. 21 (m, 5H), I. 05 (s, 3H) ,1.01( s, 3H)，0? 88 (s, 6H)，0? 79 (s, 3H)，0? 76 (s, 3H)，0? 74 (s, 3H) ? 13C匪R (100MHz, DMS0-d6) :8 176. 2, 138. 8, 124. 0, 104. I, 103. 3, 98. 3, 87. 2, 81. 4, 80. 9, 79. 2, 75. 6, 75. 2, 75. 0, 74 .8, 74. 7, 74. I, 73. 3, 72. 8, 71. 5, 70. 7, 70. 6, 68. 2, 60. 9, 60. 8, 60. 5, 54. 8, 52. 7, 47. I, 4 7. 0, 43. 7, 41. 8, 40. 2, 38. 7, 37. 0, 36. 6, 32. 8, 30. 5, 28. 7, 27. 7, 24. I, 23. 7, 23. 2, 23. I, 21.3,18.1, 18. 0, 17. 2, 16. 3. MS(HRMS) :m/z[M+Na]+calcd for C54H88O24Na: 1143. 5558 ； found:. 1143. 5508。
[0056] 实施例3 :
[0057] 对实施例1和2中所合成的多糖苷化五环三萜-28-酸进行a -葡萄糖苷酶抑制 活性测试并评价其抗糖尿病活性。
[0058] a -葡萄糖苷酶抑制模型。
[0059] 反应体系总体积250 yL，空白反应体系：10yL lU/mLa-葡萄糖苷酶，220 yL 67mmol/L KH2PO4-K2HPO4缓冲液和 20 y L 5. 8mmol/L对硝基苯-a-D-葡萄糖吡喃苷（PNPG) 溶液。
[0060]配制好一系列浓度梯度的2 a，3 P -二-(0- P -D-吡喃葡萄糖苷）-齐墩果 烷-28-酸，加到含有IOyL lU/mL a-葡萄糖苷酶和一定量的缓冲液中，在37°C，pH = 6.8 的条件下孵化l〇min，最后将20 y L的PNPG溶液作为底物快速加入到反应体系中，反应10min后放入酶标仪进行精确读数，得到相应的吸光度值，4次平行实验。
[0061] 抑制率=[(A-(A1-A2))A] X 100%，A为空白反应体系所测吸光度值，A1S添加了 a-葡萄糖苷酶抑制剂的反应体系所测吸光度值，^为a -葡萄糖苷酶抑制剂的空白吸光 度值。
[0062] 利用SPSS软件，对抑制率-浓度关系进行分析，求得相应的IC5。值。
[0063] 表1实施例1，实施例2所合成产物以及阿卡波糖（作为阳性对照）抑制a -葡萄 糖苷酶活性数据比较，将所得数据汇总于表1中。
[0064] 表 1
[0065]
[0066] 实施例4 :
[0067]用本技术领域公知的方法，以乳糖和2 a，3 P -二羟基-齐墩果烷-28-酸为原料 制成2 a，30 -二-0-(0 -D-吡喃半乳糖苷）_(1 - 4)-(0 -D-吡喃葡萄糖苷）_齐墩果 烧-28-酸口服液，用于治疗糖尿病。
[0068] 实施例5 :
[0069] 用本技术领域公知的方法，以乳糖和2 a，3 P-二羟基-乌苏烷-28-酸为原料制 成2 a，3 P-二-0-(P -D-吡喃半乳糖苷）-(1 - 4) - ( P -D-吡喃葡萄糖苷）-乌苏烷-28-酸 口服液，用于治疗糖尿病。
【主权项】
1. 一种多糖苷化五环三萜-28-酸，其特征在于：具有以下结构通式：其中：?, R2= CH3或 H ;R4= R3O 或 C = O ;R5= COOH 或 CH3或 CH20R3;R 6= CH3或 CH2OR3; R3为醛糖作为原料形成的基团，醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、木 糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽四糖、异麦芽 四糖。2. -种多糖苷化五环三萜-28-酸的制备方法，其特征在于：具体步骤如下： (1) 将卤化苄和多羟基五环三萜-28-酸按照摩尔比1-10:1混合，并加入相对于多羟 基五环三萜-28-酸1-5倍摩尔量的无机碱，最后加入有机溶剂（如二甲基亚砜）并混匀； 在50-150°C油浴条件下搅拌反应l_48h ;加入蒸馏水，待固体析出，过滤，烘干，得多羟基五 环三萜酸-28-苄酯； (2) 将多羟基五环三萜酸-28-苄酯与三氯乙酰亚胺糖酯按摩尔比1:1-10溶于二氯甲 烷中，加入分子筛，搅拌l_60min ;滴入20滴催化剂，室温搅拌l-24h ;过滤，减压浓缩，再经 柱层析分离后得到多全苯甲酰化糖苷-五环三萜酸-28-苄基酯； (3) 将多全苯甲酰化糖苷-五环三萜酸-28-苄基酯溶于乙酸乙酯中并加入钯碳（Pd/ C)，将H2通入反应体系，搅拌反应l-12h ;过滤，减压蒸馏得多全苯甲酰化糖苷-五环三 萜-28-酸； (4) 将多全苯甲酰化糖苷-五环三萜-28-酸溶于甲醇中，并加入甲醇-甲醇钠溶液，常 温搅拌l_24h ;向体系中加入氢型酸性阳离子树脂，过滤，减压浓缩，再经柱层析分离得到 目标产物：多糖苷化五环三萜-28-酸。3. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：所述多羟基五环三萜-28-酸为：其中：1^，1?2=013或!1;1? 4=0!1或0 = 0;1?5=0)0!1，013或(：!120!1 ;1?6=013或(：!120!1。4. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：所述多羟基五环三萜酸-28-苄酯 为：其中：1^，1?2=013或!1;1? 4=0!1或〇 = 0;1?5=0)(?11，013或(：!120!1 ;1?6=013或(：!120!1。5. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：所述三氯乙酰亚胺糖酯为具有醛糖 结构的还原糖为原料形成的三氯乙酰亚胺糖酯。醛糖为单糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露 糖、阿拉伯糖、木糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖：麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖： 麦芽四糖、异麦芽四糖。6. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：所述多全苯甲酰化糖苷-五环三 萜-28-酸苄基酯为：其中：?, R2= CH 3或 H ;R 4= R 3' O 或 C = O ;R5= COOBn,，CH 3或 CH 20R3' ；R6= CH 3或 CH2OIV ;R3'为醛糖中羟基经苯甲酰基进行全保护，所得到的全苯甲酰化的糖基。醛糖为单 糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖： 麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽四糖、异麦芽四糖。7. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：所述多全苯甲酰化糖苷-五环三 萜-28-酸为：其中=R1, R2= CH 3或 H ;R 4= R 3' O 或 C = O ;R5= COOH，，CH 3或 CH 20R3' ；R6= CH 3或 CH2OIV ;R3'为醛糖中羟基经苯甲酰基进行全保护，所得到的全苯甲酰化的糖基。醛糖为单 糖：葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、核糖，或双糖：乳糖，麦芽糖，或三糖： 麦芽三糖、异麦芽三糖，或四糖：麦芽四糖、异麦芽四糖。8. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：步骤（1)中所述卤化苄为溴化苄或 氯化苄；所述无机碱为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠或碳酸氢钾；步骤（1)中所述有机溶剂为 DMSO、DMF 或 1，4-二氧六环。9. 根据权利要求2所述制备的方法，其特征在于：步骤（2)中所述催化剂为三氟甲基 磺酸三甲基硅酯（TMSOTf)或三氟化硼乙醚。10. -种多糖苷化五环三萜-28-酸在制备抗糖尿病药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开一种多糖苷化五环三萜-28-酸及其制备方法与应用，它是在保持或提高多羟基五环三萜-28-酸降糖活性的基础上进一步增强其水溶性，通过在多羟基五环三萜-28-酸的羟基位置上引入多个强极性的糖基成苷，合成了系列水溶性好的多糖苷化五环三萜-28-酸。经研究表明，此类化合物具有较好的体外α-葡萄糖苷酶抑制活性。本发明提供筛选出水溶性好，抑制活性高，作用温和，毒副作用小的α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法，能为后续在抗糖尿病临床方面具有更广泛的应用。
【IPC分类】C07J63/00, A61P3/10, C07H15/256, C07H1/00
【公开号】CN105175477
【申请号】
【发明人】洪艳平, 徐健聪, 上官新晨, 聂旭亮, 蒋艳, 陈继光, 吴少福, 胡洁芳, 尹小莉
【申请人】江西农业大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月2日