菌混合发酵方法，具体步骤如下： SI.乳酸杆菌种子制备：将嗜酸乳酸杆菌接种于MRS基础液体培养基(配方见表3)， 37°C培养23h，作为种子备用。
[0026] S2.醋酸杆菌种子制备：将醋酸杆菌接种于醋酸杆菌基础液体培养基(配方见表 4)，29°C摇床培养23h，作为种子备用。
[0027] S3.乳酸杆菌和醋酸杆菌混合发酵：在表3的MRS基础培养基中加入2. 9%葡萄 糖、1. 9%可溶性淀粉和0. 5%低聚果糖，按4. 9%的接种量接种步骤Sl的乳杆菌种子，37°C厌 氧发酵16h，向发酵液中加入3. 4%无水乙醇，并按9%的接种量接种步骤S2的醋酸杆菌种 子，29°C厌氧混合发酵46h，终止发酵。
[0028] 表3.乳酸杆菌MRS基础液体培养基
表4.醋酸杆菌基础液体培养基 LlN 丄Λ 、" ^ 0/O JA 实施例3
一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵方法，具体步骤如下： SI.乳酸杆菌种子制备：将嗜酸乳酸杆菌接种于MRS基础液体培养基(配方见表5)， 38°C培养24h，作为种子备用。
[0029] S2.醋酸杆菌种子制备：将醋酸杆菌接种于醋酸杆菌基础液体培养基(配方见表 6)，30°C摇床培养24h，作为种子备用。
[0030] S3.乳酸杆菌和醋酸杆菌混合发酵：在表5的MRS基础培养基中加入3. 0%葡萄 糖、2. 0%可溶性淀粉和0. 6%低聚果糖，按5. 0%的接种量接种步骤Sl的乳杆菌种子，38°C厌 氧发酵17h，向发酵液中加入3. 5%无水乙醇，并按10%的接种量接种步骤S2的醋酸杆菌种 子，30°C厌氧混合发酵47h，终止发酵。
[0031] 表5.乳酸杆菌MRS基础液体培养基
表6.醋酸杆菌基础液体培养基 CN 105176858 A 说明书 6/8 页 实施例4
一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵方法，具体步骤如下： SI.乳酸杆菌种子制备：将嗜酸乳酸杆菌接种于MRS基础液体培养基(表7)，39°C培养 25h，作为种子备用。
[0032] S2.醋酸杆菌种子制备：将醋酸杆菌接种于醋酸杆菌基础液体培养基(表8)，31°C 摇床培养25h，作为种子备用。
[0033] S3.乳酸杆菌和醋酸杆菌混合发酵：在表7的MRS基础培养基中加入3. 1%葡萄糖、 2. 1%可溶性淀粉和0. 7%低聚果糖，按5. 1%的接种量接种步骤Sl的乳杆菌种子，39°C厌氧 发酵18h，向发酵液中加入3. 6%无水乙醇，并按11%的接种量接种步骤S2的醋酸杆菌种子， 31°C厌氧混合发酵48h，终止发酵。
[0034] 表7.乳酸杆菌MRS基础液体培养基
表8.醋酸杆菌基础液体培养基 CN 105176858 A 说明书 7/8 页 实施例5
产品品质测定 1、活菌量：分别采用本发明实施例1~4所述方法和常规方法进行单独发酵嗜酸乳酸 杆菌（CGMCC1. 2467)与醋酸杆菌（CGMCC1. 2033)，发酵后的产品采用稀释平板计数方法测 定产品活菌含量，测定结果见表9 (结果是3次实验的平均值)。
[0035] 表9单独和混合发酵的活菌对比
从表9可知，经本发明发酵方法处理的产品，活菌含量大幅度提高，其活菌含量可以达 到3.8\1011~2.4父1012。卩1]/1111〇
[0036] 2、产品的酸度：按步骤1的方法，再检测同样发酵时间64h，单独发酵和混合发酵 的成品酸度、醋酸和乳酸含量，见表10。按常规方法单独发酵所得成品乳酸和醋酸含量均远 低于实施例1~4。这是由于常规醋酸发酵时间要数周之久，才能达到一定的醋酸含量和风 味，但设备的利用率极低。而乳酸杆菌和醋酸杆菌混合发酵，不但提高设备的利用率，而且 活菌含量也大幅度升高，产品风味和质量也有保证。
[0037] 表10单独和混合发酵的成品对比 CN 105176858 A 说明书 8/8 页
综上所述，利用本发明技术能大幅度提高设备利用率，相应也提高了产品的有效成份 浓度及活菌含量，这将极有利于降低发酵企业的成本，也能提高单位体积发酵罐的利用率。
【主权项】
1. 一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵方法，其特征在于，包括如下步骤：51. 乳酸杆菌种子制备：将嗜酸乳酸杆菌接种于MRS基础液体培养基，36~39°C培养 22~25h，作为种子备用；52. 醋酸杆菌种子制备：将醋酸杆菌接种于醋酸杆菌基础液体培养基，28~31°C摇床 培养22~25h，作为种子备用；53. 乳酸杆菌和醋酸杆菌混合发酵：在Sl的MRS基础培养基中加入2. 8~3. 1%葡萄 糖、1. 8~2. 1%可溶性淀粉和0. 4~0. 7%低聚果糖，按4. 8~5. 1%的接种量接种步骤Sl 的乳杆菌种子，36~39°C厌氧发酵15~18h，向发酵液中加入3. 3~3. 6%无水乙醇，并按 8~11%的接种量接种步骤S2的醋酸杆菌种子，28~31°C厌氧混合发酵45~48h，终止发 酵； 所述MRS基础液体培养基配方为：蛋白胨5~20g/L，葡萄糖15~30g/L，酵母膏3~ 6g/L，醋酸钠4~7g/L，磷酸二氢钾2~5g/L，pH=6. 0~6. 3 ; 所述醋酸杆菌基础液体培养基配方为：葡萄糖20~50g/L，酵母膏9~12g/L，磷酸二 氢钠 2 ~5g/L，柠檬酸 0? 9 ~I. 2g/L，pH=6. 0 ~6. 3。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌来自中国 普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号分别为CGMCC1. 2467、CGMCC1. 2033。3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述MRS基础液体培养基配方为：蛋白胨 15g/L，葡萄糖25g/L，酵母膏5g/L，醋酸钠6g/L，磷酸二氢钾4g/L，pH=6. 2。4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醋酸杆菌基础液体培养基配方为：葡 萄糖40g/L，酵母膏llg/L，磷酸二氢钠4g/L，梓檬酸I.lg/L，pH=6. 2。5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，SI所述接种后培养条件为38°C培养24h。6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2所述接种后培养条件为30°C培养24h。7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中向MRS基础培养基中加入3%葡萄 糖、2%可溶性淀粉和0. 6%低聚果糖。8. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中按5%的接种量接种步骤Sl的乳杆 菌种子，38°C厌氧发酵17h。9. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中向发酵液中加入3. 5%无水乙醇。10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，按10%的接种量接种步骤S2的醋酸杆菌 种子，30°C厌氧混合发酵47h。
【专利摘要】本发明属于微生物发酵技术领域，具体公开了一种嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌混合发酵方法。本发明先制备乳酸杆菌种子和醋酸杆菌种子，然后在MRS基础培养基中加入2.8～3.1%葡萄糖、1.8～2.1%可溶性淀粉和0.4～0.7%低聚果糖，按4.8～5.1%的接种量接种乳杆菌种子，36～39℃厌氧发酵15～18h，向发酵液中加入3.3～3.6%无水乙醇，并按8～11%的接种量接种醋酸杆菌种子，28～31℃厌氧混合发酵45～48h，终止发酵。本发明混合发酵方法能够方便快捷地混合发酵嗜酸乳酸杆菌与醋酸杆菌，提高产品活菌的含量、保持菌体的高活性，解决了传统的乳酸杆菌与醋酸杆菌只能单独发酵的技术难题，同时也避免了传统的醋酸杆菌发酵周期很长，达数周之久，设备的利用率低的缺点。
【IPC分类】C12R1/23, C12N1/20, C12R1/02
【公开号】CN105176858
【申请号】
【发明人】张玲华, 马苗鹏, 杨军
【申请人】华南农业大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年6月17日