的培养
幼胚的培养基为DKW(Driver and Kuniyuki，1984)培养基，附加植物生长调节剂6-BA(6-苄氨基嘌呤)1.0mg/L，IBA(吲哚丁酸)0.01mg/L。首先在4°C冰箱中放3周，然后在25°C条件下暗培养3周。这时幼胚已经萌发，长出胚根和嫩茎，将胚根切去，仅留嫩茎，放培养室光照下培养，每天光照时间16小时，温度25°C ;
(4)胚培苗的继代
将高约3_4cm的胚培苗，截成1.5-2.0cm长的茎段，进行继代，继代培养基以DKW为基本培养基，附加植物生长调节剂BA 2.0mg/L，IBA 0.0lmg/L。培养条件:光照下培养，每天光照时间16小时，温度25°C。
[0012](5)胚培苗的生根诱导
将高约5-6cm的继代胚培苗，插入生根诱导培养基中。生根诱导培养基为DKW培养基，附加植物生长调节剂IBA 10mg/L，培养条件:暗培养一周，温度25°C。
[0013](6)胚培苗的生根和炼苗
将生根诱导后的嫩茎，移栽到生根基质中。基质配比如下，泥炭:珍珠岩:蛭石为3:1:1。将移栽好的苗盘，放入湿度100%的迷雾小棚中，保持2周直到嫩茎生根，且根长3cm以上，每个苗至少有3条根以上。将达到这一标准的幼苗移栽到湿度为85%的迷雾小棚中继续炼苗I周，然后逐渐降低湿度，直到可以适应普通大棚中的环境。
[0014](7)胚培苗的移栽
将炼好苗的胚培苗移栽到营养钵中，正常管理，当胚培苗长高到50cm以上，移栽到大田。并按大田日常管理程序进行即可。
[0015]特别注意的是，步骤(I)中杂交幼果的获取时间很重要，过早幼胚培养不容易成功;过晚，幼果容易脱落。幼果消毒后，在超净工作台上准备取出幼胚前，一定要在5%的次氯酸钠中浸泡，不能只用无菌水，以确保幼果无菌。步骤(3)中获得的幼胚必须在4°C冰箱中放3周，否则胚萌发很慢，且萌发不一致，畸形苗多。步骤(5)中，胚培苗茎段在生根诱导阶段，必须暗培养一周，这是诱发根原基的基本条件，否则很难发根。
[0016]上述方法将幼胚培养技术同常规育种程序相结合，借助幼胚培养技术可以克服远缘杂交中胚败育，能够缩短育种周期的特性，迅速选育出抗性强的核桃砧木新品种，是一种高效的核桃砧木种间杂交新技术，同时实现了核桃杂交种的快速繁殖及缩短杂交育种的周期，克服了传统核桃种间远缘杂交后杂种胚的败育问题，提供了新的有效育种途径。
[0017]最后应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照本发明实施例进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，都不脱离本发明的技术方案的精神和范围，其均应涵盖本发明的权利要求保护范围中。
【主权项】
1.一种核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法，其特征在于:包括以下步骤: (1)、杂交果的获得及其无菌化处理 以优良核桃为父本，核桃楸为母本，进行杂交，杂交60天后取幼果，并进行无菌化处理； (2)幼胚的获得 在超净工作台上，将幼果用无菌纸包裹，然后打开果核后，看到置于核桃顶端、夹在两片子叶间的幼胚，将幼胚取出放入有培养基的试管中，进行培养； (3)幼胚的培养 幼胚的培养基为DKW培养基，附加植物生长调节剂6-BA 1.0mg/L,IBA 0.0lmg/ L;培养条件:首先在4°C冰箱中放3周，然后在25°C条件下暗培养3周；待幼胚萌发，长出胚根和嫩莖，将胚根切去，仅留嫩莖，放培养室光照下培养，每天光照时间16小时，温度25°C ； (4)胚培苗的继代 将高为3-4cm的胚培苗截成1.5-2.0cm长的茎段，进行继代，继代培养基以DKW为基本培养基，附加植物生长调节剂BA 2.0mg/ L和IBA 0.0 lmg/ L;培养条件:光照下培养，每天光照时间16小时，温度25°C; (5)胚培苗的生根诱导 将高为5_6cm继代胚培苗，插入生根诱导培养基中；生根诱导培养基以DKW为基本培养基，附加植物生长调节剂IBA 10mg/L，培养条件:暗培养一周，温度25°C ; (6)胚培苗的生根和炼苗 将生根诱导后的嫩茎，移栽到生根基质中；将移栽好的苗盘，放入湿度100%的环境中，直到嫩茎生根，且根长3cm以上，每个苗至少有3条根以上;将达到这一标准的幼苗移栽到湿度为85%的环境中继续炼苗I周，然后逐渐降低湿度，直到可以适应普通大棚中的环境； (7)胚培苗的移栽 将炼好苗的胚培苗移栽到营养钵中，正常管理，当胚培苗长高到50cm以上，移栽到大田，并按大田日常管理程序进行即可。2.根据权利要求1所述的核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法，其特征在于:步骤(I)中，无菌化步骤为:将幼果用流水冲洗干净；用70%酒精浸泡30秒，在20%次氯酸钠溶液中浸泡20分钟，然后浸泡在5%的次氯酸钠溶液中，放在超净工作台上备用。3.根据权利要求1所述的核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法，其特征在于:步骤(6)中，生根基质配比如下，泥炭:珍珠岩:蛭石为3:1:1。
【专利摘要】本发明为一种核桃与核桃楸种间杂交幼胚培养的方法，解决了核桃杂交种的快速繁殖及缩短杂交育种的周期，并为克服核桃种间远缘杂交后杂种胚的败育提供了新的有效育种途径。具体步骤如下：1）杂交果的获得及其无菌化处理；2）幼胚的获得；3）幼胚的培养；4）胚培苗的继代；5）胚培苗的生根诱导；6）胚培苗的生根和炼苗；7）胚培苗的移栽。本发明方法是将幼胚培养技术同常规育种程序相结合，借助幼胚培养技术可以克服远缘杂交中胚败育，能够缩短育种周期的特性，迅速选育出抗性强的核桃砧木新品种，是一种高效的核桃砧木种间杂交新技术。
【IPC分类】A01H1/02, A01H4/00
【公开号】CN105638482
【申请号】
【发明人】王国平, 陈秋芳, 史华平, 乔永胜, 张拥兵, 樊新萍, 田鑫, 茹慧玲
【申请人】山西省农业科学院果树研究所
【公开日】2016年6月8日
【申请日】2016年3月25日