知母总皂苷与二甲双胍联用在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物化学技术领域，具体涉及知母总皂苷与二甲双胍联用在制备治疗 糖尿病或高血脂症的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 中药知母，知母为百合科植物知母(Anemarrhena asphodeloides Bge)的干燥根 茎，味苦，性寒，归肺、胃、肾经，具有清热泻火、滋阴润燥、止渴除烦等功效，主治温热病，高 热烦渴，咳嗽气喘，燥咳，便秘，骨蒸潮热，虚烦不眠，消渴淋浊等症，是常用的苦寒清热药， 有悠久的降血糖应用历史。数十年来，国内外学者已对知母的化学成分进行了广泛深入的 研究，发现知母中富含留体皂苷类、双苯吡酮类、黄酮类、木脂素类、多糖类、谷留醇、脂肪 油、鞣酸、泛酸、胆碱、大量粘液质及微量元素等。现代研究表明知母具有降血糖、降低转氨 酶等多种药理活性，可用于治疗非胰岛素依赖型糖尿病；同时对白内障、高血脂等糖尿病并 发症有防治作用。
[0003] 目前糖尿病已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题；随着人民生活水平 的提高，我国已成为世界上糖尿病患者最多的国家之一。糖尿病是由人体内胰岛素缺乏或 抵抗所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症，中药治疗糖尿病有着安全性 高，副作用小，廉价易得的优势，而且其往往为多组分，多靶点的综合运用，因此从中药中筛 选开发糖尿病治疗药物有着极大的研究价值。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是，为了克服现有技术中的上述不足，提供一种知母 总皂苷与二甲双胍联用在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物中的应用。
[0005] 本发明所要解决的技术问题，通过以下技术方案予以实现：
[0006] 本发明提供一种知母总皂苷与二甲双胍联用在制备治疗糖尿病或高血脂症的药 物中的应用。
[0007] 优选地，所述的治疗糖尿病的药物为具有胰岛素增敏作用的药物。
[0008] 优选地，所述的知母总皂苷中含有质量分数为40%以上的皂苷成分。所述的皂苷 成分可以为 50%、60%、70%、80%、90%、100%。
[0009] 优选地，所述的知母总皂苷中主要含有如下皂苷成分为：知母皂苷ΒΠ、知母皂苷B m、以及知母皂苷Bm异构体。所述知母皂苷B π、知母皂苷Bm、以及知母皂苷Bm异构体的 结构式如下：
[0010]
[0011] 优选地，知母皂苷B Π占知母有效部位总质量的15~20%，知母皂苷Bm占知母有 效部位总质量的5~10%，知母皂苷Bm异构体占知母有效部位总质量的5~10%。
[0012] 更优选地，知母皂苷ΒΠ占知母有效部位总质量的15~20%，知母皂苷Bm占知母 有效部位总质量的8~10%，知母皂苷Bm异构体占知母有效部位总质量的8~10%。
[0013]所述的知母总皂苷通过如下方法制备得到：
[0014] SI.将知母用乙醇回流提取，滤过，将滤液浓缩至无乙醇味，得知母提取物；
[0015] S2.将得到的知母提取物上大孔树脂吸附，上样完毕后用3~6BV的水洗脱除杂，再 用4~8BV体积分数为40~80%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥后即得知母总皂苷。
[0016] 优选地，步骤Sl所用的乙醇为体积分数为10~100%的乙醇；乙醇的用量与原料知 母的用量比为6~IOmL: Ig;回流提取的次数为1~3次，每次0.5~2h。
[0017] 更优选地，步骤Sl所用的乙醇为体积分数为50~80%的乙醇；乙醇的用量与原料 知母的用量比为8~IOmL: Ig;回流提取的次数为2~3次，每次1~2h。
[0018] 优选地，步骤S2中的具体方法为:将得到的知母提取物上大孔树脂吸附，上样完毕 后用3~6BV的水洗脱除杂，再用4~8BV体积分数为60~70%的乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液， 浓缩干燥后即得知母总皂苷。
[0019]更优选地，步骤S2中的具体方法为:将得到的知母提取物加水溶解，调节至相对密 度1.045~1.055，上大孔树脂吸附，上样流速为0.5~1.5BV/h;上样完毕后用3~6BV的水洗 脱除杂，流速为0.5~1.5BV/h;再用4~8BV体积分数为60~70%的乙醇洗脱，流速为0.5~ lBV/h;收集乙醇洗脱液，浓缩干燥后即得知母总皂苷。
[0020] 最优选地，步骤S2中的具体方法为:将得到的知母提取物加水溶解，调节至相对密 度1.045~1.055,上大孔树脂吸附，上样流速为lBV/h;上样完毕后用3~6BV的水洗脱除杂， 流速为lBV/h;再用4~8BV体积分数为60 %的乙醇洗脱，流速为0.5BV/h;收集乙醇洗脱液， 浓缩干燥后即得知母总皂苷。
[0021] 所述的IBV是指1倍大孔树脂柱的柱体积。
[0022] 优选地，步骤S2中大孔树脂的用量为每0.2~0.4kg步骤Sl制备得到的知母提取物 的干浸膏用IL大孔树脂。
[0023]最优选地，步骤S2中大孔树脂的用量为每0.3kg步骤Sl制备得到的知母提取物的 干浸膏用IL大孔树脂。
[0024] -种治疗治疗糖尿病或高血脂的药物组合物，其有效成分为上述知母总皂苷和二 甲双胍。
[0025] 优选地，知母总皂苷和二甲双胍的质量比为1~10:1~10。
[0026] 进一步优选地，知母总皂苷和二甲双胍的质量比为1~10:1。
[0027] 最优选地，知母总皂苷和二甲双胍的质量比为1~5:1。
[0028] 优选地，所述的药物组合物，还含有药学上可接受的载体。
[0029] 优选地，所述的药物组合物的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、缓释剂、散剂、丸剂、注 射剂或口服液。
[0030] 有益效果：（1)本发明所述的知母总皂苷与二甲双胍联用具有非常优异的降血糖 作用以及能明显改善糖尿病大鼠的胰岛素敏感性;实验数据表明，二甲双胍联用知母总皂 苷具有非常好的协同降血糖作用，其联用效果强于一线降糖用药二甲双胍联用吡格列酮； (2)此外，本发明所述的知母总皂苷与二甲双胍联用还能明显改善了 Π型糖尿病大鼠的高 血脂状态，且其作用强于所有阳性对照药二甲双胍。
【具体实施方式】
[0031] 以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限 定。
[0032] 实施例1
[0033] 知母总的制备：
[0034] Sl.将知母粉碎用乙醇体积分数为80 %的乙醇回流提取2次，每次Ih，乙醇的用量 与原料知母的用量比为8mL: Ig;滤过，将滤液浓缩至无乙醇味，得知母提取物；
[0035] S2.加水溶解，调节至知母提取物的相对密度为1.045~1.055(40~45°C)，上大孔 树脂吸附，上样流速为lBV/h;上样完毕后用5BV的水洗脱除杂，流速为lBV/h;再用6BV体积 分数为60 %的乙醇洗脱，流速为0.5BV/h;收集乙醇洗脱液，浓缩干燥后即得知母总皂苷； [0036]大孔树脂的用量为每0.3kg步骤Sl制备得到的知母提取物的干浸膏用IL大孔树 脂。
[0037]结果测得知母总皂苷中皂苷类成分的总含量为47.59%。所述皂苷类成分主要为： 母皂苷ΒΠ、知母皂苷ΒΙΠ、以及知母皂苷Bm异构体。其中，知母皂苷ΒΠ占知母有效部位总 质量的17.12%，知母皂苷ΒΙΠ占知母有效部位总质量的9.36%，知母皂苷ΒΙΠ异构体占知母 有效部位总质量的8.05 %。
[0038] 母总皂苷中皂苷类成分的总含量的测定方法如下：
[0039] 以菝葜皂苷元为对照品，按如下方法配置对照品溶液和供试品溶液并绘制标准曲 线，利用标准曲线法测定知母总皂苷中皂苷类成分类成分的含量。
[0040] 精密称取菝葜皂苷元对照品加甲醇配成浓度为0.4161mg/mL的对照品溶液。
[00411称取知母总皂苷置于50ml的容量瓶中，加入乙醇超声溶解，用乙醇定容至刻度，精 密量取ImL，蒸干，加水IOml，浓盐酸Iml，加热回流2小时，取出，冷却至室温，边振摇边滴加 40%氢氧化钠溶液至溶液颜色由橙黄色突变为橙红色，用三氯甲烷振摇提取2次，每次 30mL，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至IOml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀， 既得供试品溶液。
[0042]分别精密吸取菝葜皂苷元标准品溶液2，8，10，12，16，20，24yL，注入液相色谱仪， 测定记录峰面积，以菝葜皂苷元进样量(C)和峰面积(A)取对数后，进行线性回归，得线性方 程为，结果表明菝葜皂苷元进样量在线性范围0.8322-9.9864yg范围内线性范围良好。 [0043]色谱系统为：高效液相色谱仪(Waters2695/2420，四元双栗，蒸发光测器）；色谱 柱:Waters SunFire C18柱(4.6X 150mm，5ym);流动相：甲醇-水(95:5);漂移管温度:45°C ; 气体流量:30psi ;流速：1.0 mL/min;柱温:30°C ;分别精密吸取菝葜皂苷元对照品和知母总 皂苷供试品溶液，依法测定。
[0044] 实施例2
[0045] Sl.将知母粉碎用乙醇体积分数为60 %的乙醇回流提取3次，每次Ih，乙醇的用量 与原料知母的用量比为IOmL: Ig;滤过，将滤液浓缩至无乙醇味，得知母提取物；
[0046] S2.加水溶解，调节至知母提取物的相对密度为1.045~1.055(40~45°C)，上大孔 树脂吸附，上样流速为〇 . 5BV/h;上样完毕后用3BV的水洗脱除杂，流速为lBV/h;再用5BV体 积分数为50%的乙醇洗脱，流速为0.5BV/h;收集乙醇洗脱液，浓缩干燥后即得知母总皂苷； [0047]大孔树脂的用量为每0.2kg步骤Sl制备得到的知母提取物的干浸膏用IL大孔树 脂。
[0048]结果测得知母总皂苷中皂苷类成分的总含量为44.77%。所述皂苷类成分主要为： 母皂苷B π、知母皂苷Bm、以及知母皂苷Bm异构体。
[0049] 实施例2
[0050] Sl.将知母粉碎用乙醇体积分数为60 %的乙醇回流提取3次，每次Ih，乙醇的用量 与原料知母的用量比为6mL: Ig;滤过，将滤液浓缩至无乙醇味，得知母提取物；
[0051 ] S2.加水溶解，调节至知母提取物的相对密度为1.045~1.055(40~45°C)，上大孔 树脂吸附，上样流速为1.5BV/h;上样完毕后用5BV的水洗脱除杂，流速为lBV/h;再用8BV体 积分数为80%的乙醇洗脱，流速为0.5BV/h;收集乙醇洗脱液，浓缩干燥后即得知母总皂苷； [0052]大孔树脂的用量为每0.4kg步骤Sl制备得到的知母提取物的干浸膏用IL大孔树 脂。
[0053]结果测得知母总皂苷中皂苷类成分的总含量为40.16%。所述皂苷类成分主要为： 母皂苷B π、知母皂苷Bm、以及知母皂苷Bm异构体。
[0054] 实施例4知母总皂苷干预Π型糖尿病大鼠的药效学研究
[0055] 本实施例使用的主要仪器和试剂如下：罗氏整合型血糖仪（罗氏公司），DU8000核 酸蛋白分析仪(Beckman coulter公