脂蛋白(a)定量测定试剂盒及其使用方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医学检测和诊断领域。具体地说，本发明涉及定量测定人血清或血浆 中脂蛋白（a)的试剂盒以及所述试剂盒的使用方法和应用。
【背景技术】
[0002] 脂蛋白（a) (Lp(a))是人血浆中的一类特别的脂蛋白颗粒，最早由merg于 1963年发现，主要由低密度脂蛋白颗粒和富含糖链的高度亲水的apo(a)组成；其中每个 apo(a)分子通过一个二硫键和一分子的apoB-100共价交联。Apo(a)由三个完全不同的结 构组成：未激活的蛋白酶区域、一个拷贝的K5环饼和多拷贝的K4环饼区。
[0003] 研究表明，人血浆中Lp (a)浓度的升高与心血管功能的紊乱及脑血管疾病相关， 血浆中Lp(a)浓度的升高通常预示着早期的冠状动脉和梗阻风险的增加，同时由于Lp(a) 基本浓度具有高度的遗传性，因此，Lp(a)是早期冠心病（CHD)的重要预示因子，对其进行 检测对于心血管疾病的预测具有重要意义。
[0004] 目前，已知的检测脂蛋白（a)浓度的方法有酶联免疫法、放射免疫法、荧光免疫测 定法等检测方法，但上述测定方法的操作比较复杂，检测用时长，过度浪费资源的缺点，不 适合做常规检测。例如，CN103149370A公开了一种脂蛋白（a)定量测定试剂盒，该试剂盒 利用脂蛋白（a)的多克隆抗体包被乳胶颗粒并且在试剂R2中利用阿斯巴甜减轻血清中类 风湿因子对于检测的干扰，但该试剂盒以及目前市场上的脂蛋白（a)定量测定试剂盒大都 采用脂蛋白（a)多克隆抗体；CN102749459A公开了一种脂蛋白（a)的检测试剂盒，其利用 结合有脂蛋白（a)单克隆抗体的乳胶颗粒；CN103604930A公开了一种脂蛋白（a)的检测试 剂盒，其利用脂蛋白（a)单抗乳胶微球，能够解决与纤溶酶原有交叉反应以及类风湿因子 对于检测的干扰的问题；CN103454193A公开了利用包被有脂蛋白（a)单克隆抗体的乳胶悬 液的脂蛋白（a)的检测试剂盒。但这些申请均并公开采用的是何种单克隆抗体，而且这些 试剂盒无法同时确保高灵敏度和低值区域的重复性。
[0005] 因此，本领域急需稳定性好、检测方便、同时具备高灵敏度和低值区域重复性的脂 蛋白（a)定量测定试剂盒。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于提供一种人脂蛋白（a)的单克隆抗体标记的颗粒，以及包含所 述颗粒的检测试剂盒，所述人脂蛋白（a)的单克隆抗体标记的颗粒以及检测试剂盒的稳定 性好、检测方便、同时具备高灵敏度和低值区域重复性。
[0007] 在第一方面，本发明提供一种鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒，所述鼠 抗人脂蛋白（a)单克隆抗体是美国ABGENT公司生产的单克隆抗体（克隆号为A01237a)。
[0008] 在优选的实施方式中，所述鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒在37°C保存 3天后，定标稳定性良好。在具体的实施方式中，本发明的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标 记的颗粒在37°C保存3天后，测试20mg/L样本的吸光度差值（ΛΑ)彡0. 04A。
[0009] 在第二方面，本发明提供一种鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒的组合， 所述鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体是美国ABGENT公司生产的单克隆抗体（克隆号为 A01237a);并且所述颗粒是具有不同粒径的两种或多种颗粒。
[0010] 在优选的实施方式中，所述颗粒包括但不限于乳胶颗粒、磁珠；优选乳胶颗粒；更 优选表面带羧基的聚苯乙烯胶乳颗粒。
[0011] 在优选的实施方式中，所述颗粒的粒径选自60-300nm。
[0012] 在优选的实施方式中，所述颗粒是具有不同粒径的两种颗粒。
[0013] 在优选的实施方式中，所述颗粒的粒径分别选自60-150nm和150-280nm。
[0014] 在优选的实施方式中，所述颗粒的粒径分别是105nm和200nm。
[0015] 在优选的实施方式中，所述具有不同粒径的两种颗粒的比例为40:60 - 60:40。
[0016] 在优选的实施方式中，所述具有不同粒径的两种颗粒的比例为50:50。
[0017] 在第三方面，本发明提供一种脂蛋白（a)定量测定试剂盒，所述试剂盒包含：
[0018] (1)样品预处理剂；
[0019] (2)检测剂；和
[0020] (3)任选的校准品；
[0021] 其中，所述检测剂包含本发明第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记 的颗粒，或本发明第二方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒的组合。
[0022] 在优选的实施方式中，所述样品预处理剂使得样品的抗原位点充分暴露。
[0023] 在优选的实施方式中，所述校准品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血浆、缓冲液、防 腐剂、稳定剂以及胰蛋白酶抑制剂。
[0024] 在优选的实施方式中，所述样品预处理剂含有50-100mmol/L缓冲液、2-4%增敏 剂、1-2%稳定剂、0. 1-0. 2%表面活性剂、200-500mmol/L电解质、0. 03-0. 1%防腐剂。
[0025] 在具体的实施方式中，所述校准品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血浆、缓冲液、防 腐剂、稳定剂以及胰蛋白酶抑制剂。
[0026] 在具体的实施方式中，所述颗粒的粒径选自60_300nm。
[0027] 在具体的实施方式中，所述颗粒是具有不同粒径的两种或多种颗粒；优选地，所述 颗粒是具有不同粒径的两种颗粒。
[0028] 在具体的实施方式中，所述颗粒的粒径分别选自80-150nm和150-280nm ;优选地， 所述颗粒的粒径分别是l〇5nm和200nm。
[0029] 在具体的实施方式中，所述具有不同粒径的两种颗粒的比例为40:60 - 60:40 ;优 选地，所述具有不同粒径的两种颗粒的比例为50:50。
[0030] 在优选的实施方式中，所述脂蛋白（a)定量测定试剂盒的检测灵敏度为> 0. 04A。
[0031] 在优选的实施方式中，所述检测剂含有50-100mmol/L缓冲液、0. 1-0. 5%鼠抗人 脂蛋白（a)单克隆抗体致敏的聚苯乙烯胶乳颗粒、1-2%稳定剂、0.03-0. 1%防腐剂。
[0032] 在第四方面，本发明提供本发明第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标 记的颗粒、本发明第二方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒的组合、或本 发明第三方面所述的试剂盒在定量测定脂蛋白（a)中的用途。
[0033] 在第五方面，本发明提供一种定量测定脂蛋白（a)的方法，所述方法利用本发明 第一方面所述的鼠抗人脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒、本发明第二方面所述的鼠抗人 脂蛋白（a)单克隆抗体标记的颗粒的组合、或本发明第三方面所述的试剂盒来定量测定待 测样品中的脂蛋白（a)。
[0034] 在第六方面，本发明提供一种校准品，所述校准品含有去脂脂蛋白（a)高值人血 血浆、缓冲液、防腐剂、稳定剂以及胰蛋白酶抑制剂。
[0035] 在优选的实施方式中，所述校准品含有去脂脂蛋白（a)高值人血血浆、蔗糖、赖氨 酸和胰蛋白酶抑制剂。
[0036] 在优选的实施方式中，所述校准品利用LP(A)高值大袋血浆配制，得到终浓度为 15%的鹿糖，18mg/mL的L-赖氨酸，0. 8mg/mL的胰蛋白酶抑制剂。
[0037] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文（如实施例）中具 体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附图说明】
[0038] 图1显示了各单抗与去脂人血浆样本反应的特异性，抗体可以达到1/8稀释倍数 的效价，符合相应灵敏度的要求。
【具体实施方式】
[0039] 发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现将特定的鼠抗人脂蛋白（a)单克 隆抗体标记在胶乳颗粒上，以及进一步采用具有特定粒径的胶乳颗粒，特别是具有特定比 例的不同粒径的胶乳颗粒得到的脂蛋白（a)定量测定试剂盒具有检测灵敏度高，低值区域 的重复性好，批间均一性和试剂储存稳定性良好，校准稳定性长等等优点，从而能够操作简 便、准确地定量测定脂蛋白（a)。在此基础上完成了本发明。
[0040] 术语定义
[0041] 颗粒
[0042] 本文所用的术语"颗粒"是指用于定量测定的脂蛋白（a)，具有一定粒径的粒子。 鉴