专利名称：一种用于器官移植的灌洗保存液的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种器官移植技术，尤其是指一种对器官进行灌洗，以便于保存，并提高存活率的灌洗液。
背景技术：
器官移植被称为“21世纪医学之巅”。在跨入新世纪之际，器官移植又进入了一个蓬勃发展的新时期。据全球移植中心名录(WTCD)的统计，迄今已有60余万名身患不治之症者，通过器官移植获得了第二次生命。他们在移植器官后，全身健康，过着与正常人一样的生活；心理健康，工作精力充沛；育龄妇女能怀孕生育，少年儿童能健康成长。为了使器官移植有更好的前景，各国科学工作者们正孜孜不倦地在探索新的领域。为开拓器官来源，正在开展利用动物器官的异种移植研究；创制各种新的器官保存液。
我国自70年代开展临床器官移植以来，技术队伍不断扩大，水平亦逐年提高，在肾移植、肝移植、脾移植等多个方面都取得了骄人的成绩，并且逐渐形成了自己的特色。因此，引起了国际学术界的广泛关注。
自从1983年多伦多肺移植组成功进行人类单肺移植，1986年成功进行双肺移植以来，全世界应用肺移植技术治疗终末期肺部疾病的病例迅速增加，据国际心肺移植协会登记2000年全世界单肺移植7420，双肺移植5420例。平均一年存活率超过87％，三年存活率超过60％，五年存活率超过45％，七年存活率超过35％。
亚洲地区肺移植相对落后。肺移植在国内开展时间不长，仅北京安贞医院报告2例长期生存。目前除安贞医院的病例外，国内尚无存活的肺移植病例。我国肺移植工作落后于国际水平的因素很多，其中选择适当的灌注液以及肺灌注保存技术一直是实验及临床研究的焦点，它是减少肺再灌注损伤(Ischemia-reperfusion injury)的关键。
肺移植术后影响早期肺功能的因素很多。在临床实验中应用很多不同的肺保存技术，有的已经成功，但没有一个是理想的技术。应用改良Euro-Collins液或UW(威斯康辛大学)液体进行肺动脉灌注，目前也仅能保存4-6h，即缺血时间最长不得超过6h，因此不甚理想。近年研究并试用的灌洗液还有LPD(低钾右旋糖酐)，有多家报道其肺保存作用较Euro-Collins液、UW(威斯康辛大学)液更好，认为它能更好地保护肺泡毛细血管内皮细胞，但即便如此，仍然不是一种可以在临床上广泛应用的理想的灌洗液，这些因素导致供肺的运转、手术的安排乃至手术操作都受到严重限制，成为肺移植发展的重要障碍。
发明内容
本发明的目的在于寻求一种用于器官移植的灌洗保存液，这种灌洗液能有效提高移植器官的存活率。
其主要技术方案是在灌洗液中含有钾3.5～6(毫摩尔/升)，钠130～168(毫摩尔/升)，镁0.8～2.5(毫摩尔/升)，氯100～110(毫摩尔/升)，磷酸盐30～40(毫摩尔/升)，硫酸盐3.5～5.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 100～150(毫克/升)，棉子糖30～50(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 20～40(克/升)。
为进一步提高灌洗液的效果还可在灌洗液中添加谷光甘肽3～5(毫摩尔/升)；腺苷5～8(毫摩尔/升)；别嘌呤醇1～3(毫摩尔/升)；地塞米松5～10(毫克/升)。
其中钾、钠、镁、氯、磷酸盐及硫酸盐主要用于模拟细胞外液的环境，调整Ph值，以便更好地保护供体器官；前列腺素E1用于扩张肺动脉；棉子糖用来取代葡萄糖作为附加的渗透支持；谷光甘肽、腺苷、别嘌呤醇为氧自由基，对肺缺血灌注损伤的发生起到重要的作用，谷光甘肽与别嘌呤醇均可明显减少肺缺血灌注损伤；地塞米松用于抗炎症，减少器官排斥；低分子右旋糖酐40用于改善循环。
我们在大量动物实验上研究并试用WXC液，该技术在动物实验上已显示出较好的肺保存效果，实验研究显示肺安全保存时间超过24小时，较之EURO-COLLINS溶液在90分钟的缺血猪模型中有更好的表面物质活性。目前临床应用于肺移植，显示优于Eurolollins液，体现在WXC增强最初的气体交换，减少术后机械通气时间，术后死亡率减少，增强了术后肺功能(PO2/FiO2比)，预防缺血再灌注损伤的发生。
过去十年间，移植肺的匮乏是临床肺移植的主要限制性因素。大多数供体肺由于水肿、人工吸引和由于脑死亡、供者的维持性通气导致的肺炎而出现低氧和肺部浸润。近来的研究证明，部分先前认为“不合适移植”的肺也可被成功移植。然而，大多数此类肺仍不能被成功获取并移植。因而采用挽救这些移植物的手段或使用在移植后能减轻缺血——再灌注损伤的新方法来改善目前困扰临床肺移植供体来源缺乏的问题，还有很长的一段路要走。肺保存技术已成为肺移植的限制因素，因此WXC灌注液对在我国开展肺移植有非常重要的意义。
国外三种灌洗液成分与WXC灌洗液比较
注1、ECEuro-Collins液；2、UW威斯康星大学液；3、LPD低钾右旋糖酐液；4、WXC中国无锡液，即本发明的灌洗液。
与国外三种保存液比较，WXC能预防细胞水肿，保存液的成功之处与其它灌注液的区别在于①不含葡萄糖，而用一种大分子量的Raffinose棉子糖作为附加的渗透支持；②含有前列腺素E1扩张肺动脉；③氧自由基对肺缺血灌注损伤的发生起到重要的作用，谷胱甘肽(GSH)和别嘌呤醇均可明显减少肺缺血灌注损伤。
器官保存液的质量可直接影响供体器官的质量与移植后的效果。WXC为一种成功的器官保存液，符合下述5条器官保存液的质量要求。
1、适当的pH值。有关保存液的pH值尚无统一标准，通常器官保存液的Ph值约在7.0～7.4，但要考虑低温的影响，因氢离子浓度随温度而变化。防止细胞内酸中毒是器官保存良好的先决条件，有研究证明，肝、胰用Ph值为7.9～8.3的保存液可明显改善保存效果，肺用Ph值为7.50～7.70的保存液可明显改善保存效果。
2、适宜的渗透浓度，高渗性可防止细胞水肿。
3、无杂质、无热原、无细菌污染，因为器官保存液是用于供体器官初期原位灌注和随后的冷保存，在质量上应同输液制剂一样无菌、无热原。然而在制备过程中，要经过许多步骤才能完成，这就要求生产过程中严格控制细菌的污染，所有容器及封装材料必须清理处理。
4、性能稳定，在已消毒条件下，有效期为1～2年，如出现浑浊、结晶析出应弃之不用。另外，有部分具有药理活性的成分、生物制剂应在灌注前临时加入，以便保证保存液质量。
5、实用性，配制方法简便，药源供应足，价格低廉，便于推广应用。
灌洗液的配制方法如下按配方称取药品，用适量蒸馏水搅拌溶解，再加水至足量，取少量液体测其pH值、渗透浓度及电解质浓度，再用垂熔玻璃滤器过滤(以滤孔大小分号，号码愈大，孔径越小，5号以上可除菌)，滤液经灌装，放薄膜，盖橡皮塞，压铝盖，最后高压消毒灭菌，成品抽样作细菌培养，对整批保存液逐瓶进行澄明度检查，凡发现异物，均剔出作废，合格品才能作保存液。
具体实施例方式
实施例一在灌洗液中含有钾3.5(毫摩尔/升)，钠140(毫摩尔/升)，镁1.2(毫摩尔/升)，氯100(毫摩尔/升)，磷酸盐30(毫摩尔/升)，硫酸盐3.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 110(毫克/升)，棉子糖30(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 30(克/升)，谷光甘肽4(毫摩尔/升)，腺苷6(毫摩尔/升)，别嘌呤醇2(毫摩尔/升)，地塞米松8(毫克/升)。
实施例二在灌洗液中含有钾5.0(毫摩尔/升)，钠130(毫摩尔/升)，镁1.2(毫摩尔/升)，氯110(毫摩尔/升)，磷酸盐40(毫摩尔/升)，硫酸盐4.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 150(毫克/升)，棉子糖50(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 20(克/升)，谷光甘肽5(毫摩尔/升)，腺苷8(毫摩尔/升)，别嘌呤醇3(毫摩尔/升)，地塞米松10(毫克/升)。
实施例三在灌洗液中含有钾6.0(毫摩尔/升)，钠150(毫摩尔/升)，镁2.5(毫摩尔/升)，氯108(毫摩尔/升)，磷酸盐38(毫摩尔/升)，硫酸盐5.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 130(毫克/升)，棉子糖35(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 25(克/升)，谷光甘肽3.5(毫摩尔/升)，腺苷7(毫摩尔/升)，别嘌呤醇1.5(毫摩尔/升)，地塞米松9(毫克/升)。
实施例四在灌洗液中含有钾4.0(毫摩尔/升)，钠168(毫摩尔/升)，镁1.0(毫摩尔/升)，氯103(毫摩尔/升)，磷酸盐33(毫摩尔/升)，硫酸盐4.0(毫摩尔/升)，前列腺素E1 140(毫克/升)，棉子糖45(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 35(克/升)，谷光甘肽4.5(毫摩尔/升)，腺苷5.5(毫摩尔/升)，别嘌呤醇2.5(毫摩尔/升)，地塞米松6(毫克/升)。
实施例五在灌洗液中含有钾5.5(毫摩尔/升)，钠135(毫摩尔/升)，镁1.6(毫摩尔/升)，氯106(毫摩尔/升)，磷酸盐36(毫摩尔/升)，硫酸盐3.7(毫摩尔/升)，前列腺素E1 108(毫克/升)，棉子糖42(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 38(克/升)，谷光甘肽3.2(毫摩尔/升)，腺苷6.5(毫摩尔/升)，别嘌呤醇1.2(毫摩尔/升)，地塞米松7(毫克/升)。
实施例六在灌洗液中含有钾3.0(毫摩尔/升)，钠140(毫摩尔/升)，镁1.2(毫摩尔/升)，氯100(毫摩尔/升)，磷酸盐30(毫摩尔/升)，硫酸盐3.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 110(毫克/升)，棉子糖30(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 30(克/升)。
权利要求
1.一种用于器官移植的灌洗保存液，其特征是在灌洗液中含有钾3.5～6(毫摩尔/升)，钠130～168(毫摩尔/升)，镁0.8～2.5(毫摩尔/升)，氯100～110(毫摩尔/升)，磷酸盐30～40(毫摩尔/升)，硫酸盐3.5～5.5(毫摩尔/升)，前列腺素E1 100～150(毫克/升)，棉子糖30～50(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐40 20～40(克/升)。
2.根据权利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有谷光甘肽3～5(毫摩尔/升)。
3.根据权利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有腺苷5～8(毫摩尔/升)。
4.根据权利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有别嘌呤醇1～3(毫摩尔/升)。
5.根据权利要求1所述的灌洗液，其特征是在灌洗液中含有地塞米松5～10(毫克/升)。
全文摘要
本发明涉及一种器官移植技术，尤其是指一种对器官进行灌洗，以便于保存，并提高存活率的灌洗液。它模拟细胞外液的环境，其主要技术方案是在灌洗液中含有钾3.5～6(毫摩尔/升)，钠130～168(毫摩尔/升)，镁0.8～2.5(毫摩尔/升)，氯100～110(毫摩尔/升)，磷酸盐30～40(毫摩尔/升)，硫酸盐3.5～5.5(毫摩尔/升)，前列腺素El 100～150(毫克/升)，棉子糖 30～50(毫摩尔/升)，低分子右旋糖酐 4020～40(克/升)。这种灌洗液能延长移植器官的保存时间，提高移植器官的存活率，最大可能的保存移植器官的功能。
文档编号A01N1/02GK1415200SQ02138519
公开日2003年5月7日 申请日期2002年10月29日 优先权日2002年10月29日
发明者陈静瑜 申请人:陈静瑜