专利名称：诱导海胆雌核发育二倍体的方法
技术领域：
本发明涉及一种海胆新品种的培育方法，尤其是一种诱导海胆雌核发育二倍体的方法。
背景技术：
海胆属棘皮动物门，有许多种类，其中光棘球海胆主要产于我国辽宁、山东等地沿海，虾夷马粪海胆又称中间球海胆，是从俄罗斯远东日本海或日本等沿海引进的品种。海胆的食用部分为生殖腺，有较高的营养和药用价值，不同性别的海胆在繁殖季节、生殖腺指数(决定出肉率)、营养成分及口味上有着较大差别。雄性海胆的繁殖期长，可在较长时间内满足市场供应，可是其性腺在口味和色泽上与雌性海胆有较大区别；雌性海胆性腺色深且口感好，在营养价值方面有一定的优势，但是雌性海胆繁殖期短，难以长时间满足市场供应；在国际市场上雄、雌海胆的价格差异较大。虽然目前人们对海胆营养价值的利用及养殖技术等均有研究，但是由于海胆胚胎的性别难以区分，迄今为止的公开出版物上还没有关于如何控制海胆性别的报道。
人工诱导雌核发育是指用物理或化学的方法使精子遗传失活，用遗传失活的精子与卵子结合生成受精卵，然后再用物理、化学方法等对受精卵或胚胎进行处理，使胚胎染色体二倍化，形成可以正常发育的胚胎。目前，人工诱导雌核发育已在泥鳅、鲤鱼、鲽与川鲽、草鱼、褐鳟、虹鳟、银大马哈鱼、大马哈鱼以及斑马鱼等10多种鱼类上获得成功。公知技术使精子遗传失活的方法基本上有两种一种是用γ射线、x射线对精子进行辐射处理，另一种就是用甲苯胺兰、乙烯脲以及二甲基硫酸盐等化学药物处理精子；使染色体二倍化的方法主要有三种方法一种是用静水压法或冷、热休克等物理方法处理受精卵；另一种是用化学药剂处理发育到不同时期的胚胎；还有一种就是用核融合、核移植等生物方法进行处理。可是海胆是与鱼类相隔较远的棘皮动物，不能将现有的人工诱导雌核发育技术直接应用在海胆上，以至于人们还不能按照自己的需求生产和养殖不同性别的海胆。
发明内容
本发明是为了解决现有技术所存在的不能按需求生产和养殖不同性别海胆的技术问题，提供一种诱导海胆雌核发育二倍体的方法，可按需求培育出性腺营养价值高、色泽及口感好的雌性海胆。
本发明的技术解决方案是一种诱导海胆雌核发育二倍体的方法，步骤依次如下a.用紫外线照射海胆精子使其遗传失活；b.用遗传失活的海胆精子与海胆卵子结合，生成受精卵；c.用静水压法处理受精卵，使海胆受精卵染色体二倍化。
所述的海胆精子为光棘球海胆精子。
所述的海胆卵子为虾夷马粪海胆卵子。
所述a步骤的紫外线照射剂量为30～330mJ/cm2。
所述b步骤的静水压力为60～80MPa，起始时间为90～120min，持续时间3～5min。
所述a步骤的紫外线照射剂量最好为180mJ/cm2。
所述b步骤的静水压力最好为80MPa，起始时间为120min，持续时间5min。
本发明是用紫外线照射使海胆精子遗传失活，遗传失活的海胆精子与海胆卵子结合，用静水压法使海胆受精卵染色体二倍化，成批生产出性腺色泽、口感好，营养价值高的雌性海胆，可提高海胆养殖效益和满足市场的不同需求。尤其是选用光棘球海胆精子、虾夷马粪海胆卵子，受精卵成活率高且可改善海胆的品质。当紫外线为180mJ/cm2、静水压力为80MPa，起始时间为120min，持续时间5min时效果最好，二倍体率可达30.76％。
具体实施例方式实施例1a.用现有技术取光棘球海胆精子置于盛有水的平坦的器皿中，水温为适合于精子存活的温度，最好为18℃，用紫外线灯对其照射，照射剂量为30～330mJ/cm2，则光棘球海胆精子染色体灭活，即遗传失活；用遗传失活的光棘球海胆精子与其它种类的海胆的卵子结合，如虾夷马粪海胆卵子，生成受精卵；b.将受精后90～120min的受精卵置于压力仓中，水温为适合受精卵存活的温度，最好为18℃，用静水压法处理受精卵，静水压力60～80MPa，持续时间3～5min，则使海胆受精卵染色体二倍化。
实施例2a.用现有技术取中间球海胆(虾夷马粪海胆)精子置于盛有水的平坦的器皿中，水温为适合于精子存活的温度，最好为18℃，用紫外线灯对其照射，照射剂量为30～330mJ/cm2，则中间球海胆精子染色体灭活，即遗传失活；用遗传失活的中间球海胆精子与其同种的海胆卵子，生成受精卵；b.将受精后90～120min的受精卵置于压力仓中，水温为适合受精卵存活的温度，最好为18℃，用静水压法处理受精卵，静水压力60～80MPa，持续时间3～5min，则使海胆受精卵染色体二倍化。
实施例3a.用现有技术取马粪海胆精子置于盛有水的平坦的器皿中，水温为适合于精子存活的温度，最好为18℃，用紫外线灯对其照射，照射剂量为180mJ/cm2，则马粪海胆精子染色体灭活，即遗传失活；b.用遗传失活的马粪海胆精子与虾夷马粪海胆卵子结合，生成受精卵；c.将受精后120min的受精卵置于压力仓中，水温为适合受精卵存活的温度，最好为18℃，用静水压法处理受精卵，静水压力80MPa，持续时间5min，则使海胆受精卵染色体二倍化率最高。
实验结果见表1、表2表1 不同剂量紫外线照射光棘球海胆精子对其受精的虾夷马粪海胆的胚胎发育的影响
表2 不同压力、持续时间和起始时间对海胆胚胎发育的影响
权利要求
1.一种诱导海胆雌核发育二倍体的方法，步骤依次如下a.用紫外线照射海胆精子使其遗传失活；b.用遗传失活的海胆精子与海胆卵子结合，生成受精卵；c.用静水压法处理受精卵，使海胆受精卵染色体二倍化。
2.根据权利要求1所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述的海胆精子为光棘球海胆精子。
3.根据权利要求2所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述的海胆卵子为虾夷马粪海胆卵子。
4.根据权利要求1或2或3所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述a步骤的紫外线照射剂量为30～330mJ/cm2。
5.根据权利要求4所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述b步骤的静水压力为60～80MPa，起始时间为90～120min，持续时间3～5min。
6.根据权利要求4所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述a步骤的紫外线照射剂量为180mJ/cm2。
7.根据权利要求4所述的诱导海胆雌核发育二倍体的方法，其特征在于所述b步骤的静水压力为80MPa，起始时间为120min，持续时间5min。
全文摘要
本发明公开一种诱导海胆雌核发育二倍体的方法，步骤依次如下用紫外线照射海胆精子使其遗传失活；用遗传失活的海胆精子与海胆卵子结合，生成受精卵；用静水压法处理受精卵，使海胆受精卵染色体二倍化。成批生产出性腺色泽、口感好，营养价值高的雌性海胆，可提高海胆养殖效益和满足市场的不同需求。尤其是选有光棘球海胆精子、虾夷马粪海胆卵子，受精卵成活率高且可改善海胆的品质。当紫外线为180mJ/cm
文档编号A01K67/00GK1586189SQ20041005033
公开日2005年3月2日 申请日期2004年8月27日 优先权日2004年8月27日
发明者常亚青, 丁君, 曹学彬, 宋坚, 王 华 申请人:大连水产学院