降低犬软骨损伤的方法

专利名称：：降低犬软骨损伤的方法降低犬软骨损伤的方法相关申请的交叉引用本申请要求于2005年2月14日提交的美国专利申请第11/057,718号的优先权，该申请内容在此引作参考。发明背景发明领域本发明涉及处理伴侣动物(更具体地为犬)的关节炎和与关节炎相关病症的方法。相关技术说明关节炎，更具体地为骨关节炎，是常发于人类和伴侣动物的关节变性病。例如参见Richardson等(1997),Vet.Clin.NorthAmer.SmallAnimalPractice27,883-911。骨关节炎涉及关节软骨的进行性退化，且伴有蛋白聚糖和胶原损失以及新骨增殖，在滑膜内伴随有可变炎性反应。它是影响犬的关节和肌骨骼病的最常见形式，但在猫中相对罕见。例如参见Schoenherr等(2000)在Hand等编辑的一书中的内容SmallAnimalClinicalNutrition,4thed.,907-921,WalsworthPublishingCo.,Marceline,MO;Hedborn等(2002)Ce11Mol.LifeSci.59,45-53;Pool(1999)Front.Biosci.4,D662-D670。处理骨关节炎可包括药物治疗、外科手术、给予营养保健品和饮食处理。然而，这类通用的处理方法集中于緩解症状，因而其对处理疾病或对治疗潜在病状并非完全成功。因此，继续需要处理伴侣动物(更具体地为犬)的骨关节炎的新颖的方法。co-3(也称作n-3)脂肪酸为哺乳动物饮食所必须。其为食物中天然存在的物质，业已用于饮食补充物。Schoenherr等(2000，见上述)综述了包括n-3脂肪酸在内的脂肪酸在炎症疾病(包括关节炎)中的用途，其参考了Miller等(1992)CaninePractice17(6),6-8的汇编，该汇编的观察资料中有犬主人在用脂肪酸治疗皮肤病问题时察觉到改善了其犬的关节炎临床征候。作为饮食组分的目前最重要的三种co-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)和oc-亚麻酸(ALA)。迄今为止，还没有发现这三种脂肪酸的明显差别。发明简述现在业已发现在涉及软骨的犬关节炎病症中，00-3脂肪酸的活性并不是等同的。在本文报告的研究中，只有EPA能相当可观地被犬软骨吸收，而DHA或ALA则不能，在与EPA而非DHA或ALA接触后显著降低软骨损伤，其可由葡萄糖胺聚糖(GAG)释放来测量。将特定的to-3脂肪酸EPA给予患有关节炎的犬的益处，可包括提高犬的运动性、增加犬腿的承重和减轻与关节炎有关的疼痛。因此，现在提供用于提高患关节炎的犬的运动性的方法。该方法包括将有效降低犬软骨损伤的量的EPA给予犬。进一步提供用于增强患关节炎的犬的腿承重的方法，其包括将有效降低犬软骨损伤的量的EPA给予犬。进一步提供用于减轻犬与关节炎有关的疼痛的方法，其包括将有效降低犬软骨损伤的量的EPA给予犬。在本发明另外的实施方案中，提供用于调节酶降解犬关节软骨的方法，其包括将有效调节酶降解的量的EPA给予犬。在另一实施方案中，本发明提供通过将降低软骨损伤的量的二十碳五烯酸给予犬来降低犬的软骨损伤的方法。根据以上方法，可通过多种途径给予EPA,包括作为食物组合物的组分或作为补充物经口给予。本发明另外的优点和益处，本领域技术人员通过阅读本说明书将显而易见。发明详述本发明涉及将给予EPA作为处理犬骨关节炎疾病和病症和其症状的方法。co-3脂肪酸为公认的一组多不饱和长链(通常为12-26个碳原子)羧酸。生理学上更重要的w-3脂肪酸具有长为18-22个碳原子的不分支的链。所有的在第3和第4个碳原子(其从分子的甲基(w)端计算)之间都有双键。二十碳五烯酸(EPA)具有长为20个碳原子的链，共5个双键，包括于oo-3位置的一个。当本文提到co-3脂肪酸尤其是EPA时，应该理解需要时可用其衍生物(为本领域技术人员所知)来代替。合适的衍生物实例包括酯，例如w-3脂肪酸尤其是EPA的分支或不分支和/或饱和或不饱和的C广C犯烷基酯或环烷基酯，尤其是CVC6烷基酯。可通过多种给予途径中的一种或多种将EPA给予犬，例如经口、经鼻、胃肠外(例如静脉内或皮下)途径等等。经口途径尤其合适，EPA可以营养保健品剂型或药物剂型或作为食物组合物的组分经口给予。当EPA存在于食物组合物(其可为湿或干)中时，举例而言，其可通过任何合适的混合方法掺入其中，和/或分布于食物块的表面，例如通过喷雾、附聚、撒尘或沉淀在表面。在特定实施方案中，EPA存在于本身提供营养饮食的食物组合物中，存在于小吃、补充物或零食中，或存在于饮食中的液体部分例如水或其它液体中。作为选择，EPA可以以下形式给予固态形式，例如粉末；或以液态或凝胶形式；或以营养保健品剂型或药物剂型，例如胶嚢、片剂、锭剂、注射剂；或诸如此类。在这样的剂型范围内，EPA可以固体、液体或凝胶形式存在。任何常用的营养保^fc品载体或药物载体可与EPA—起使用，包括水、葡萄糖、蔗糖等等。在某些实施方案中，给予基本上不含DHA和/或ALA的含EPA的食物组合物。"基本上不含DHA和/或ALA"意即基本上缺少DHA和ALA中任一种或两种，或存在的DHA或ALA中任一种或两种都仅有很少并且无关紧要的量，例如少于该组合物重量的约0.1%、少于约0.03%、少于约0.01%、少于约0.003%或少于约0.001%。在本文"基本上不含DHA和/或ALA"的实施方案中，存在的任何量的DHA和/或ALA都以非常低的浓度，以便对骨关节炎犬的骨关节炎或其进展或藉此产生的症状不产生真正的有效作用。在其它实施方案中，可有其它oo-3脂肪酸例如DHA和ALA以显著的量伴随EPA存在。在某些实施方案中，也可存在co-6脂肪酸，例如亚油酸、Y-亚麻酸(GLA)和/或尤其是花生四烯酸(AA)。在诸如鱼油和鱼肉等来源中可找到相当高含量的co-3和co-6脂肪酸。按照本发明，通过给予w-3脂肪酸混合物或w-3和co-6脂肪酸混合物来减轻软骨损伤的好处，主要或基本上完全归功于EPA。因此，在任何这样的混合物中，重要的是EPA以有效降低犬软骨损伤的量存在。按本发明方法给予的EPA，能有效抵抗各种形式的骨关节炎以及其它形式的关节炎，包括风湿性关节炎。EPA起着抑制软骨关节退化过程进展的作用，或减慢退化过程，并由此改善骨关节炎犬或否则可能发展为骨关节炎的犬的关节健康。这种作用是w-3脂肪酸除任何抗炎性作用之外的作用，抗炎性作用在犬骨关节炎中可能并不重要，因为骨关节炎中只涉及有限的炎症。如以下实施例所示，使用涉及关节软骨的体外外植块方法，证明在EPA、DHA和ALA中，EPA为唯一显著降低葡萄糖胺聚糖(GAG)从软骨诱导释放的w-3脂肪酸。GAG为蛋白聚糖的结构组分，因此，GAG的释放预示蛋白聚糖的降解。关于防止骨关节炎的关节损伤，特定的目标组犬包含那些需要这样的预防性护理的犬。举例而言，大型犬例如拉布拉多猎犬(labradorretnever)、洛特维勒犬(rottweiler)、德国牧羊犬等等对骨关节炎更敏感，其可由这些品种中骨关节炎发生率更高所证明。另外，约6岁以上的犬具有明显高的骨关节炎发生率。现役(active)犬、运动犬和肥胖犬也可能处于风险之中。待给予的EPA的量可有显著的变化。如本文实施例所示，实际观察到的剂量反应为一给予EPA的量越大，抗关节炎的效果就越好。通常需要最低至少约0.2。/。重量的营养饮食来满足犬的常规日常需求。在不同实施方案中，可使用至少约0.2%、至少约0.25%、至少约0.3%、至少约0.4%、至少约0.5%或至少约0.6%的饮食重量。在不同实施方案中，合适的饮食可含有达至约5%、达至约4%、达至约3%、达至约2.5%、达至约2.25%或达至约2%重量的EPA。除非另外指出，否则本文所有重量百分比按干物质计。在曰常基础上的常规食物定量中可包括特定量的EPA,或在曰常基础上的零食或补充物中可提供同样量的EPA。只要能每日提供有效量的EPA，可联合釆用这些或任何其它给料手段。在oo-3和oo-6脂肪酸混合物中，co-3与w-6脂肪酸的重量比可显著变化。在不同实施方案中，co-6与w-3重量比可为约l.l:l-约0.2:1，或约1.08:1陽约0.42:1,例如约0.2:1、约0.25:1、约0.3:1、约0.4:1、约0.5:1、约0.6:1、约0.8:1、约1.0:1或更高比率。在不同实施方案中，co-6与EPA重量比可为约12.5:1-约1.0:1,或约12.4:1-约1.12:1,例如约0.2:1、约0.25:1、约0.3:1、约0.4:1、约0.5:1、约0.6:1、约0.8:1、约1.0:1、约1.5:1、约2:1、约2.5:1、约3:1、约4:1、约5:1、约6:1、约7.5:1、约10:1、约12.5:1或更高比率。在不同实施方案中，花生四烯酸(AA,—种co-6脂肪酸)与EPA重量比可为约2.8:l-约0.01:1,或约0.28:1-约0.08:1,例如约0.01:1、约0.02:1、约0.04:1、约0.06:1、约0.08:1、约1.0:1、约1.5:1、约2.8:1或更高比率。可以按mg/kg体重计算的量给予EPA。因此，举例而言，20kg的犬每天消费约275g食品的曰常饮食。饮食中约0.2%、约0.3%、约0.4%、约0.5%或约0.6%重量的EPA的量将导致分别给予这样的犬EPA的量为约27.5、约41.25、约55、约68.75或约82.5mg/kg体重。更具体地，每天可以约20-约150mg/kg体重的量给予犬EPA，例如约20、约28、约30、约40、约41、约50、约55、约60、约69、约70、约80、约82、约90、约100、约120或约150mg/kg体重或更高的量。在宠物食品工业，食物通常分为"湿"或"干，，。湿食物具有相当高的水量，通常以罐头或其中基本上或完全将空气排除在外的其它容器来提供。这样的食物实例有"浇汁大块"组合物、在液体浇汁中存在固体颗粒的组合物和块型组合物，它们通常呈容器的形状。干食物通常为烘焙或挤出的原料，然后将后者切割为个别形状的部分，通常称为粗磨物。通过常规手段易于将EPA掺合到湿食物中。在干食物中为了保护EPA免于被空气氧化可采用包封。另外，也可采用使用抗氧化剂和充氮包装。这可由美国专利第4,895,725号作为例子，其专门强调特效鱼油的微嚢。含高水平oo-3脂肪酸的油类包括绯鱼油、鮭鱼油、鳕鱼油等等。在各种实施方案中，本发明也提供涉及将包含EPA的组合物给予犬的方法，以用于减轻骨关节炎临床征候的严重程度和发生次数和与该病有关的疼痛，而基本上无有害反应或副作用。另外，在不同实施方案中，本发明提供减慢犬骨关节炎病症临床进展的方法，其包括给予包含EPA的组合物。在不同实施方案中，本文所阐述的方法基本上改善犬骨关节炎的全部病症，因此通过增加骨关节炎腿的承重可客观测量该益处。本发明也提供涉及EPA与骨关节炎的其它治疗形式联合给予的方法，包括给予不同抗关节炎药物和/或给动物饲喂体重管理饮食，这两种都为本领域所知。人们相信EPA在减轻与骨关节炎有关的软骨损伤中的作用至少可部分通过下调一个或多个负责软骨降解的基因来发生。在某些情况下，可关闭一个或多个负责软骨降解的基因。按照本发明实施方案，在犬软骨组织中引起软骨降解的酶(例如聚集蛋白多糖酶)的mRNA信息表达降低了。通过葡萄糖胺聚糖(GAG)从软骨组织的诱导释放的降低，可预示减轻了软骨损伤。因此，以下是本发明进一步的实施方案。下调与酶降解犬关节软骨相关的一种或多种基因的方法，其包括将有效下调基因的量的EPA给予犬。关闭与酶降解犬关节软骨相关的一种或多种基因的方法，其包括将有效关闭基因的量的EPA给予犬。降低犬软骨组织中引起软骨降解的酶(例如聚集蛋白多糖酶)的mRNA信息表达的方法，其包括将有效降低mRNA信息表达的量的EPA给予犬。降低从犬软骨组织诱导释放GAG的方法，其包括将有效降低GAG释放的量的EPA给予犬。本发明不限于本文所述的具体方法、方案和试剂，因为它们可改变。另外，本文所用术语仅为了阐述具体实施方案的目的，并非意欲限制本发明范围。除非上下文明确指出并非如此，否则本文和后附权利要求中所用的单数形式"一个"、"一种"、"所述"包括提及物的复数。同样地，单词"包含"、"包括"解释为包括性而不是排除性的。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语和任何缩写词具有与本发明领域一般技术人员通常理解相同的含义。在本发明实践中,尽管可使用与本文所述相似或相当的任何组合物、方法、制造材料或其它手段或材料，但优选本文所述组合物、方法、制造的物品或其它手段或材料。本文所引用或提及的所有专利、专利申请、出版物和其它参考文献，以法律允许的程度在此引作参考。这些参考文献讨论仅仅意欲总结其中所得出的论断。不能承认任何这样的专利、专利申请、出版物或参考文献或其任何部分，为本发明的有关先前技术，尤其保留质疑这样的专利、专利申请、出版物和其它参考文献的准确性和针对性的权利。实施例本发明可进一步通过以下实施例来阐明，然而除非另外明确指出，否则应该理解包含这些实施例仅为阐明目的，并非意欲限制本发明范围。实施例1本实施例阐明了在培养的犬软骨组织中通过co-3脂肪酸引起释放葡萄糖胺聚糖(GAG)。从四只犬的左右后膝关节(两个都为股骨骨节和胫骨平台)获得关节软骨。将软骨外植块在含10%胎牛血清的培养基中培养3天，然后用无血清培养基洗涤3次。然后让外植块在含0、100或300jug/ml的n-3脂肪酸(EPA、ALA或DHA)的无血清培养基中培养6天。在该培养期之后，所有外植块用无脂肪酸、无血清的培养基洗涤3次。然后分别在以下lml无脂肪酸、无血清的培养基中培养外植块4天不含添加物(对照，C)、含10-6M视黄酸(RA)或50ng/ml抑瘤素M(OSM),每种作3个平行。注意，因为软骨的可用性，对所有犬并非所有处理都是可能的。在终止培养时测量释力i:到培养基中的GAG(mg/mg湿重)。在以下表格中，给出了来自四只犬中每一只的三个平行培养物中GAG释放的平均值和标准偏差(SD)。另外，给出了每一种处理的基质乳酸盐浓度(ng/mg湿重)。表1:犬1结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>如表1所示，在OSM处理的培养物中用100yg/mlEPA和在RA和osm处理的培养物中用300mg/mlepa，都使gag释放出现显著降低。对任何剂量的EPA，基质乳酸盐浓度无显著降低。表2:犬2结果<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>如表2所示，在OSM处理的培养物中，是EPA而不是ALA或DHA显著降低GAG释放。任何脂肪酸的任何剂量对基质乳酸盐浓度无显著影响。表3:犬3结果<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>**未分析如表3所示，在该特定动物中，没有一种脂肪酸显著改变自RA或OSM刺激的软骨的GAG释放。没有基质乳酸盐与任何脂肪酸的任何剂量相联系的变化。表4:犬4结果<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>如表4所示，300Mg/ml的EPA显著降低从RA处理的培养物的GAG释放，但以任何剂量的任何其它脂肪酸都不行。在对照、RA和OSM处理的培养物中用300mg/mlOSM预处理，基质乳酸盐浓度显著降低。实施例2本实施例阐明了将o)-3脂肪酸掺入犬软骨细胞膜。这些实验大部分用单层培养实施，然而，在个别实验中，分析了将脂肪酸掺入到犬软骨外植块培养物中。单层培养物经24或48小时，i8:3的to-3脂肪酸ALA没有掺入到来自2只犬的软骨细胞膜中。5组数据显示，仅在培养基中將育的软骨细胞中的ALA百分比<1%(介于0.3_0.9%之间)，在用100或300jug/mlALA孵育24或48小时后，该百分比无明显变化(介于0.3-2.5%之间)。20:5的co-3脂肪酸EPA经48小时明显掺入到来自1只犬的软骨细胞膜中。当用100或300jug/mlEPA处理培养物48小时时，EPA百分比从<1%(介于0.2-0.6%之间)增加到大约7%(介于5.6-8%之间)。当培养物在含或不含5。/。胎牛血清(FCS)中培养时，掺入没有差别。20:5的co-3脂肪酸EPA经48小时明显掺入到来自1只犬的软骨细胞膜中，但18:3的oo-3脂肪酸ALA不是这样(各种脂肪酸剂量为300jug/ml)。EPA百分比从〈l。/。增加到大约15%。20:5的co-3脂肪酸EPA经3或6天明显掺入到来自1只犬的软骨细胞膜中(剂量为300Mg/mlEPA)。EPA百分比从<1%增加到16-18%，在3和6天孵育之间没有差别。外植块培养物20:5的w-3脂肪酸EPA经6天明显掺入到来自1只犬的软骨外植块中，但18:3的w-3脂肪酸DHA或w-6脂肪酸AA不是这样(各种脂肪酸剂量为300Mg/ml)。EPA百分比从0%(未检测到)增加到大约2%。小结:这些数据指出，是EPA而并非其它co-3脂肪酸在单层培养物或外植块培养物中掺入到犬软骨细胞膜中。实施例3本实施例阐明了co-3脂肪酸对犬软骨细胞新陈代谢的作用。为了评估oo-3脂肪酸对犬软骨中蛋白质和蛋白聚糖代谢的潜在作用，除了在培养的最后4天不加入分解代谢刺激物(即所有都为"对照"培养物)外，如实施例1所述准备培养物。在培养的最后24小时期间，分别将(i)"SO"以测量蛋白聚糖的合成)或(ii)"S-曱硫氨酸和35S-半胱氨酸(以测量蛋白质合成)加入到培养基中，以;故射标记新合成的蛋白聚糖和蛋白质。在终止培养时测量软骨基质中掺入的放射性标记物。未尝试将在24小时标记期间从软骨损失的放射性标记物质进行定量。掺入的35S04("PG")或"S-甲硫氨酸和35S-半胱氨酸("PROT")的平均值和标准偏差(SD)以DPM/mg湿重示于以下表5中。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>如表5所示，任何to-3脂肪酸对蛋白质合成和掺入到基质中都没有明显作用。100ng/mlEPA显著增加蛋白聚糖的合成和掺入。其它剂量或其它脂肪酸不能显著改变蛋白聚糖的合成和掺入到软骨基质中。用逆转录PCR测量基质蛋白酶(聚集蛋白多糖酶-l和-2)、环氧合酶_1和—2、脂肪氧化酶-5和-12和潜在的自分泌细胞因子及其受体(例如IL-I、IL-6和TNF)的mRNA信息表达水平。该研究结果发现聚集蛋白多糖酶-1和聚集蛋白多糖酶-2的mRNA信息在"正常"犬软骨组织中表达。另外，尽管在某些犬中无关节病状征候，但这些动物表达环氧合酶-2(COX-2)信息的mRNA信息。这使得可监测oo-3和oo-6脂肪酸补充物对未刺激的犬关节软骨外植块中的聚集蛋白多糖酶和COX-2的mRNA表达的作用。EPA是唯一能降低犬关节软骨中降解酶、聚集蛋白多糖酶-1和聚集蛋白多糖酶-2的mRNA信息的脂肪酸。这证明了EPA"关闭"负责软骨降解的基因的能力。实施例4本实施例阐明了co-3脂肪酸在犬骨关节炎临床研究中的作用。对临床诊断患有骨关节炎的宠物犬进行了三个临床研究。兽医全科医生和整形外科专家征召拥有满足特定合格标准的豢养犬。所有患犬需要(i)根据宠物主人的历史描述和兽医的身体检查，具有用X光照相的骨关节炎物证与可测量的疾病的临床表现；(ii)或者根据身体检查、全血计数(CBC)、血液化学和验尿，健康并无并发症；和(iii)若在该研究中登记前30天内接受骨关节炎药物或补充物处方治疗，继续治疗方案。进行了以下测量。血清脂肪酸分布图通过气相色谱法来测定，涉及用氯仿和曱醇混合物(2:1)萃取脂肪酸，用三氟化硼-甲醇(BFg:MeOH)试剂甲基化，然后进行火焰离子化检测(FID)。通过用已知标准比较保留时间来确定脂肪酸甲酯，用内标定量。兽医临床评价在筛选阶段和临床试验过程中的每一次飼喂间隔，兽医进行身体检查和患犬骨关节炎病症的临床评价。兽医评价骨关节炎的5个参数的严重程度残废、勉强承重、运动范围减小、勉强支撑对侧腿和关节触痛。在飼喂期间测量这些单个参数的严重程度得分变化。通过结合所有5个单个参数的严重程度得分变化，得出饮食干预对病犬骨关节炎病症效果的综合兽医临床评估。宠物主人主观评估。宠物主人在参加该研究之前需要完成征召调查表，在临床试验过程中的每一次饲喂间隔要完成另外的调查表。征召调查表。宠物主人评估所观察到的犬骨关节炎最常见征候发生次数和严重程度，包括站起困难、跛行、僵硬、触及痛、行走时滞后、因痛苦而吠叫或呜咽、侵略行为、奔跑困难、行走困难、攀爬困难、跳跃困难、游戏困难、削弱运动性和整体活动水平。另外，主人评估其宠物的骨关节炎总体病症。饲喂调查表。宠物主人评估征召时基准化的犬骨关节炎征候发生次数和严重程度变化。另外，宠物主人评估其动物与骨关节炎有关的疼痛的严重程度。力台步态分析。每一研究机构于0、6和12周时用计算机处理的生物力学力台评估犬。平台中心直立，用10m走道表面齐平。训练者使犬小跑过力台，观察者评估每次通过平台的经过，以确认步伐撞击和步态。当犬小跑通过力台的速度为1.7-2.0m/s，加速度变化为-0.5-0.5m/s2，若身体同侧的前腿和后腿的撞击明显，则认为试验有效。在每次试验期间，用毫秒计时器和两个光电开关测量犬前进的速度。每次试验录像，用于反复观看和确定有效步伐撞击。每次试验期间要小心以确保犬触动了计时器，并在通过平台时保持一致的速度(如训练者和观察者所察知)。在每次试验期间，获得了各条犬的每条受影响的腿和每条身体同侧的腿的5个有效试验。通过专门的软件程序测量并记录了垂向力峰值的正交直线地面反作用力、纵向沖动、刹车和推进峰值力和刹车和推进冲动(Acquire,SharonSoftware,DeWitt,MI)，所有力用千克体重来标准化。将每条腿的有效试验数据平均，得到每一次的力或冲动的平均值每一次比较治疗组与安慰剂组之间的地面反作用力数据，作为跛腿与身体同侧腿之间的百分比差别。比较飼喂期开始和结束时跛腿的地面作用力变化数据的百分比。1号研究进行犬研究以评估给诊断为骨关节炎的犬伺喂高水平的n-3脂肪酸的饮食效果。在该研究中吸收18名兽医全科医生来征召病犬。将总共131只犬随机分为两个饮食治疗組，伺喂180天。试验食物和对照食物具有相似的常量营养元素分布图，但脂肪酸组成明显不同(表6)。试验々欠食含有高水平的ALA、EPA和DHA,调配为低n-6/n-3比率。对照饮食为可得到的最主要的市售犬食物，具有工业上典型水平的n-3脂肪酸和n-6/n-3比率特点。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>在第0、45、90和180天，记录血清脂肪酸和宠物主人的评价。试验食物可明显调节血清脂肪酸分布图。在每次饲喂间隔结束时与对照组比较，试验组明显具有较高浓度的n-3脂肪酸(PO.Ol),尤其是EPA、DHA和ALA，明显具有较低浓度的AA(PO.Ol)，具有明显低的n-6/n-3比率(PO.01)(表7)。基于宠物主人的观察，与对照组比较，即使存在强烈的安慰剂作用，试验组也显著改善站起、奔跑、游戏(在第45天)和行走(第卯天和180天)(PO.05)(表8)。表7:平均血清脂肪酸水平(mg/dl)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表8:宠物主人观察的骨关节炎严重程度变化*<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>*骨关节炎严重程度等级量表1=好转，2=无变化，3=恶化。**nsd=无显著差异2号研究进行犬研究以评估给诊断为骨关节炎的犬饲喂高水平的n-3脂肪酸的饮食效果。在该研究中有2位兽医整形外科专家征召病犬。将总共38只犬随机分为两个饮食治疗组，饲喂90天。用与上述(表6)相同的食物份额制备试验和对照饮食。在第0、45和90天记录血清脂肪酸、力台步态分析和兽医临床评估。通过试验食物可明显调节血清脂肪酸分布图。在每次饲喂间隔结束时与对照组比较，试验组明显具有较高血清浓度的n-3脂肪酸(PO.Ol)，尤其是EPA、DHA和ALA,在第90天明显具有较低浓度的AA(P0.01),具有明显低的n-6/n-3比率(P0.01)(表9)。表9:平均血清脂肪酸水平(mg/dl)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>用力台步态分析客观评估犬的骨关节炎最严重的腿的生物力学评价(表10)。垂向力峰值是测量以决定受影响的腿的承重的关键参数。对于对照组而言，在90天饲喂期间平均垂向力峰值没有显著变化(P4.91)，而试验组在这一时间内垂向力峰值平均值有显著增加(P二O.Ol)。在不同组之间，垂向力峰值的百分比平均变化也明显不同(P<0.05)，这些说明试验组增加了受影响的腿的承重，而对照组在研究过程中未显示承重变化。对于各个饮食组，承重能力也可由显示垂向力的百分比变化频数分布来代表。在对照组中〗叉31。/。动物在饲喂90天后显示出承重有改进，而试验组在研究过程中有82%的犬增力口承重表10:垂向力峰值第o天第％天变化(第0-卯天)组平均P值平均P值平均变化平均=0Pr>ltl0/0平均变化Pr"tl对照72.800.598172.630.9323-0,170.9144-0.580.0443试验69.5173.213.710.01035.35由兽医整形外科专家进行的主观临床评价，对试验饮食的有效性提供了另外的支持。基于综合兽医临床评价，与消费对照食物的犬相比，消费试验食物的犬评估为有改善的百分比明显大一些(P<0.05)。与对照组比较，兽医专家也观测到试验组表现出比较大的关节触痛降低百分比(P=0.05)。3号研究进行犬研究以评估给诊断为骨关节炎的犬伺喂高水平的n-3脂肪酸的饮食效果。在该研究中有28名兽医全科医生征召病犬。将总共177只犬随机分为两个饮食治疗组，饲喂90天。除了消费待评估的治疗性饮食外，大约三分之二的参加该研究的犬接受用于治疗骨关节炎的处方药物和/或补充物。三种试验食物具有相似的常量营养元素分布图，但EPA和DHA的组成有变化，且变量A含有最低水平，变量C含有最高水平(表ll)。表11试验变量y。膳食营养ABC蛋白质19.9719.5119,37脂肪(总)13,7815.3419.55CH02(NFE*)53.9252.3447.66ALA(n-3)2.651.18UOAA(n-6)0.110.180.24EPA(n-3)0.501.181.69DHA(n-3)0,340.80U5总n-62.702.452,14总n-33.543,534,52ji"6/n-3比例0.760,700.47*NFE=作为无氮萃取物的可溶性碳水化合物在第0、21、45和90天记录血清脂肪酸、宠物主人评价和兽医临床评估。所有的饮食变量明显调节血清脂肪酸分布图。在每次饲喂间隔结束时，与饲喂变量A的犬比较，饲喂试验变量B和C的犬具有明显较高的n-3脂肪酸血清浓度(PO.Ol)，尤其是EPA、DHA和ALA,具有明显较低的n-6脂肪酸浓度，尤其是AA(PO.Ol)，具有明显较低的n-6/n-3比率(PO.01)(表12)。表12:平均血清脂肪酸水平(mg/dl)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>宠物主人报告，消费21天任何饮食变量的犬，14只中有13只骨关节炎征候有改善(表13)。另外，宠物主人报告，消费90天任何饮食变量的犬，14只中有13只骨关节炎征候的严重程度减轻(表14)。宠物主人也报告在犬消费任何饮食变量90天后，可观察到的骨关节炎征候发生次数明显减少(表15)。表I3:宠物主人观察的骨关节炎征候的改进(第0-21天)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>表15:宠物主人关于发生次数评估的差异(第0-90天)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>据报告，基于兽医临床评估，比起那些接受最低剂量n-3脂肪酸的犬，消费较高浓度n-3脂肪酸的犬的骨关节炎病症改善效果更好，更明显减轻骨关节炎的进展(表16)。在接受药物和/或补充物组和不加药物组之间，在改善骨关节炎病症或减轻骨关节炎进展方面无明显差别(表17)。这表明治疗性饮食与其它治疗通过为患骨关节炎的犬提供额外的益处起协调作用，或至少不对抗其它治疗。在参与该研究的犬中，据报告有害反应或副作用发生率极低。据报告215只动物中只有5只犬对指派食物有腹泻和呕吐，其可能是由于消费了一种饮食变量。对于那些在前两个研究中讨论的消费治疗性饮食的犬，据报告有害反应或副作用发生率相似(对实施例1和2分别为1/88和1/26)。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表17<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>在本说明书中，公开了本发明典型的优选实施方案，尽管采用了具体的术语，但其仅以其一般和描述的意义使用，并非用于限制下面权利要求提出的本发明范围的目的。根据上面的教导，显然本发明可能存在很多修改和变化。因此，应该理解，在本发明后附权利要求范围内可以不同于具体阐述来实施本发明。权利要求1.一种提高患有关节炎的犬的运动性的方法，该方法包括将有效降低所述犬软骨损伤的量的二十碳五烯酸给予所述犬。2.权利要求1的方法，其中下调一个或多个负责软骨降解的基因。3.权利要求1的方法，其中关闭一个或多个负责软骨降解的基因。4.权利要求1的方法，其中降低犬软骨组织中引起软骨降解的酶的mRNA信息的表达。5.权利要求4的方法，其中所述酶为聚集蛋白多糖酶。6.权利要求1的方法，其中降低葡萄糖胺聚糖从犬软骨组织的诱导释放。7.—种增加患关节炎的犬腿承重的方法，该方法包括将有效降低所述犬软骨损伤的量的二十碳五烯酸给予所述犬。8.权利要求7的方法，其中下调一个或多个负责软骨降解的基因。9.权利要求7的方法，其中关闭一个或多个负责软骨降解的基因。10.权利要求7的方法，其中降低犬软骨组织中引起软骨降解的酶的mRNA信息的表达。11.权利要求10的方法，其中所述酶为聚集蛋白多糖酶。12.权利要求7的方法，其中降低葡萄糖胺聚糖从犬软骨组织的诱导释放。13.—种减轻与犬关节炎有关的疼痛的方法，该方法包括将有效降低所述犬软骨损伤的量的二十碳五烯酸给予所述犬。14.权利要求13的方法，其中下调一个或多个负责软骨降解的基因。15.权利要求13的方法，其中关闭一个或多个负责软骨降解的基因。16.权利要求13的方法，其中降低犬软骨组织中引起软骨降解的酶的mRNA信息的表达。17.权利要求16的方法，其中所述酶为聚集蛋白多糖酶。18.权利要求13的方法，其中降低葡萄糖胺聚糖从犬软骨组织的诱导释放。19.一种调节犬关节软骨的酶降解作用的方法，该方法包括将有效调节酶降解的量的二十碳五烯酸给予所述犬。20.权利要求19的方法，其中下调一个或多个负责软骨降解的基因。21.权利要求19的方法，其中关闭一个或多个负责软骨降解的基因。22.权利要求19的方法，其中降低犬软骨组织中引起软骨降解的酶的mRNA信息的表达。23.权利要求22的方法，其中所述酶为聚集蛋白多糖酶。24.权利要求22的方法，其中所述降低mRNA信息表达伴随将二十碳五烯酸掺入到软骨细胞膜中。25.权利要求19的方法，其中降低葡萄糖胺聚糖从犬软骨组织的诱导释放。26.权利要求19的方法，其中所述二十碳五烯酸在食物组合物中经口给予。27.权利要求26的方法，其中所述食物组合物包含按干物质计至少约0.2%重量的二十碳五烯酸。28.权利要求26的方法，其中所述食物组合物为营养饮食、快餐、补充物或零食的组分。29.权利要求19的方法，其中所述二十碳五烯酸以营养保健品剂型或药物剂型经口给予。30.—种降低犬软骨损伤的方法，该方法包括将降低软骨损伤的量的二十碳五烯酸给予所述犬。31.权利要求30的方法，其中每天给予所述犬二十碳五烯酸的量为约20-约150mg/kg体重。全文摘要本发明提供调节犬关节软骨的酶降解作用的方法，其包括将有效调节酶降解的量的二十碳五烯酸(EPA)(例如作为食物组合物的组分)给予犬。通过对患关节炎的犬实施该方法，可增加犬的运动性，可增加关节炎腿的承重，和/或可减轻与关节炎有关的疼痛。文档编号A23K1/18GK101155511SQ200680011235公开日2008年4月2日申请日期2006年2月13日优先权日2005年2月14日发明者D·A·弗里特施,D·E·朱厄尔,W·D·舍恩赫尔申请人:希尔氏宠物营养品公司