专利名称：：红色莴苣的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种红色莴苣植物，从，到的莴苣#引起莴苣着红色的基因复棘
背景技术：
生活方式的改变，以狄自絲、食品公司对多彩有^_饰的需求、甚至于家M妇对iW的e^工好的沙拉的需求不断上升。因此，育种公司4寻^U4t带有艳丽颜色，更^A味和多种质地的品种。莴苣市场可分成三组，即完整的叶球，预切过的整叶#^^叶片。i脉，有吸引力的红色的已预切过的莴苣酉eW常由目iH"得到的"红色"莴苣(Zfl""ca5a〃ra)、或菊苣rosso(C/cMr/鹏//7^te0、^c^甘蓝或红色甜菜提供。到目前为止，已知的"红色"莴苣并不是真正的遍布叶片的红色。特别A^yl型ibl仅絲叶ii^色，iblja^、状红色。叶心内决不会完全红色。原因就在于事实上红色仅在叶球上那些暴露在日光、尤其是紫外线下的部分中^Ji。因此所谓的"红色"莴苣的叶片主要^1绿色，其红色4让At预切过的莴苣g^1"留下红色的印象。通常，叶片红色部#绿色部分的选度状态是褐色。这糊色视觉上认为是不美的。红色^泉莴苣^^A^想到植物病害或M。目前植物育种人员反对选棒鳴色和红色徵泉。另外，甚至发现莴苣包装产业中和消费者经常丢弃斑点或褐色莴苣叶片。使用莴苣以外的其它蔬菜的叶片的炔泉在于这些其它蔬菜的不同^il常常在^M^后认为不:fe^乞。例如菊苣rossotfc^带有些^^木的C/c力or/咖//7^^ws。M^甘蓝的质地完全不同于莴苣的较軟质地。莴苣中花"W:合成由紫外线诱导(参见例如Voipio和Autio，1995年，Responsesofred—leavedlettucetolightintensity,UV-Aradiationandrootzonetemperature.在ActaHorticulturae399.Greenhouseenvironmentalcontrolandautomation.Eds.BJBailey，TTakakura.Kyoto,Japan.第183-187页；Benoit等，1998年，EffectoofaphotoselectivegreenhousefilmonafewvegetablecropsintheBelgianNorthSeaclimate.在14thInternationalcongressonplasticsinagriculture,TelAviv，以色列，1997年3月，LaserPagesPublishing，Jerusale叫以色列，第81—92页；Krizek等，1998年，InhibitoryeffectsofambientlevelsofsolarUV-AandUV-Bradiationongrowthofcv.NewRedFirelettuce,physiologiaPlantarum103(1)，第1—7页；Kleinhenz等，2003年，Variety,shading,andgrowthstageeffectsonpigmentconcentrationsinlettucegrownundercontrastingtemperatureregiment.Hortechnology13(4),第677-683页)。许多植旨类中红色的显示M于花青素的产生。许多不同种类的莴苣通常分成三种类型。最通常的就是具有脆球(或巻心(iceberg))^"油(butter)球的结球莴苣。长叶莴苣(romaine)(或JJl莴苣(coslettuce))形威^^t的:iiL^。'叶片"莴苣类型不结球，并且叶片錄。结球莴苣类型中球心将或多或少不同程度紧闭，因此阳M法照射到。这样在比如巻心莴苣(iceberglettuce)^^油莴苣(butterlettuce)闭合^l体中或在具有+i^t的闭^^体的长叶莴苣(romainelettuce)中不可能产生花青素。相关问^L^i^璃温室、塑料拱棚或密闭容器中生长的红莴苣缺乏红色着色作用。由于缺少紫外线,，由于紫外线净ic^璃或塑料^^物M或者^A造吸W^普中缺少紫外线，花絲的狄比室夕卜糾下少得多。这样在室内条件下斷氐了生产红色莴苣的可能性，因此降低了生产免于受到如冷、热以及各种降水的恶劣天气彩响的红色莴苣的可能性。
发明内容tt，本发明提供了一种红莴苣，其中包括心的整个^Jr有红色叶片。本发明红莴苣的心叶片大体上完全红色，意味着其含有极高的花青素/叶绿素比值。这是令人惊奇的，因为认为花青素合成必须要的M其是紫外光不負I^球心。这证明本发明中莴苣中光-独^L制A/生花絲的原因。这种光-独立,J4ii允许结絲不结救莴苣^C璃温室或塑料拱棚或密闭容器中栽培。后者使用通常在红莴苣发育中带来问题的Ait吸收光。这是因为花M合成的诱导通常必须要紫外波长(280-400纳米)，而在光镨中或多或少缺乏该紫外波长。^C璃或塑料下，紫外，的类似缺4it常是由遮盖物强烈的紫外阻截引起的。然而，由于本发明红莴苣的紫外光-独錄絲狄，所以其适合于玻璃温室，塑料大棚和密闭M栽培。i^l因为本发明的光-独iL^制，所iiit-独^4几制还可表示为"紫外光广独:i^r^4it"或"紫外光-独立红色着色作用"。本发明的M实施例中，花衬和叶绿素之间的PiUt率》她A523/A665在4和50之间，优逸9和27之间。氾t有完全了解本发明花青素4^否完全独立于紫外辐射，或者其4皮比常规红莴苣*中花^^4^常所需的低的多的紫外,水平歉义。但是，对于本发明实际《用性来说，这个差异不4紧。尽管本发明在结球型莴苣中特别有效，但是本发明的光-独立红色着色也能用在其它类型莴苣，比dHt叶莴苣和用于采^小又^lt叶片的幼小莴苣^培养的小叶栽培中。本发明红莴苣的谱系在实施例1中给出。4^发明涉及亲本的所有后^其球心内具有红色叶片，并_§^合本发明一个或多个其它要求，比如心叶片的花rM^H"绿素之间的H^。另夕卜，具有本发明紫夕卜独立的红色着色作用的不结球、散叶或小叶莴苣植抹也iM;^i全红色结球莴苣,的后代，因此;1本发明的--^分。选择已经是或者可能会向本发明莴苣^Mc^的莴苣^Mr食^iUt视觉上的红色幼小榼昧的选择(步骤1)。在玻璃或塑料下培育它们可能|^#在紫夕卜唯靠花青素狄即少量的着红色，和紫夕卜独幼青素絲即相当强烈的着红色之间产生区别。种M育后者，直到结球。接着，具有红色内心叶片的,视觉上的选^^i通过切^^个,的顶部ii4亍。1^选^心WM"繁歹1^代种子。选择杂^^R^提高着红色水平，和/或者得到所需要的成熟#^球水平。正如扭WM的，当莴苣^Mf到"开放i(^"或"闭合i^^"时，才娥UPOV对于特征"结球形成"的指导方针("TG/13/9.Lettuce(LactucasativaL)Guidelinesfortheconductoftestsfordistinctness,uniformityandstability"，InternationalUnionfortheProtectionofNewVarietiesofPlants,日内瓦，2004)来定M球。本发明莴苣心4^W"^t绿素之间具有PA^I^feA523/A665，^i^高于9，更优选高于13或更高。^常的红莴苣中这一比^UL^^1过3。用于确定本发明比值的叶绿素和花青素i^l借助于分ibbl测定法进行测定。样本制备和分析在实施例2中给出。应当注意到，本发明心叶片中花青素水平可能和在其它不结球的莴苣品种中发现的水平一样高。这种不结球品种的一些例子为40-0203103-B(KnerrLD，2005，Lettucecultivar40-0203103-B。美国专利申请号US2005/0144672Al)，Galactic,NewRedFire,Rolina(Kleinhenz等，2003，Variety,shadingandgrowthstageeffectsonpigmentconcentrationsinlettucegrownundercontrastingtemperatureregimens.Horttechnology13(4),第677-683页)RedSaladBowl，和Sesam(VoipioLandAutioJ.，1995.Responsesofred-leavedlettucetolightintensity,UV-Aradiationandrootzonetemperature.Actahorticulturae399.第183-187页)。但是，与本发明心叶片相比，这些品种具有非常高的叶绿素水平的心叶片，狄不结球的棒性导致的高曝光量的结果。另一方面，可負^Jt^发明心叶片中和结球品种心叶片中具有类似的低叶绿素水平。然而，这些结球品种心叶片与本发明心叶片相比，没有显示高的花rM:水平。由于心叶片的低籐光量，所以通常少量地诱导花絲合成。本发明中，花絲的产生是紫夕卜独立。逸條释了为什么本发明花絲/叶绿素H^SAit先例的高水平。这种紫夕卜独立的红色着色新形^结球莴苣^K中发现并J^,且不同于贿4i^中红色着色作用。但是，本发明也涉及具有本发明的"紫夕卜独立红色着色作用"特征的不结球莴苣,，比:M^t叶片或幼小叶片莴苣^，或生^ML璃温室或塑料大棚内的莴苣,，，里紫外光的量更低。心叶片红色着色作用也记在RHS颜色记录表(TheRoyalHorticulturalSociety,London,UK)。本发明心叶片薄层颜色(特别是叶片顶部)被评为183A,184A或187B,它们都在紫灰色记^^且内。其它叶片薄层颜色被评为180B,180C，180D或181C,它们都在M色记^i且内。也可育树在温室或塑料下生长的,的红色着色作用和花青素^ii^fif定，所錄温室或塑料下即为和室夕NH^相比具有减少的紫外絲7K平的糾。itb^^发明胁比常Mix莴苣还肖^示更高的花青素7K平和更深的红色。尤其是本发明W^f长出的叶片J^it常红莴苣WMt长出的叶片^#更多。本发明红莴苣遗传分析在实施例2中描述。在jHl^现至少三个基因涉;5L^心着红色。本发明涉及t^i^青素和具有另外至少三个涉M心着红色基因的莴苣。^i4^,本发明*包括实施例2描述的完整基因复合沐。通过紧密连锁的DM才斜己，比如AFLP，RFLP，RAPD,SCAR,CAPS,SSR或SNP，确定涉;5L^发明着红色的基因座的存在是可能的。例如，在上述^t^和其后代中进fr^i己-性^^锁分析育y^供这种紧密连锁的DNA才封己。莴苣,内是否存在与本发明内部叶片着红色类似的基因《赋即确定莴苣已知,的表型;^易M定。表型可以通a个方面确定，例如内部叶片着红色情况，心叶片花青素/叶绿素比值，和/或者^C璃或塑料下生"M4^的着红色情况。确定本发明的可EWN^本发明的已知^M:间基因^l^目似性的另一方^!通过比较可負^fc^的^i己基因型和本发明的已知^M^2^因型。才斜逸因型通过一套基于DNA相HHii行定义，比如AFLP，RFLP，RAPD,SCAR,CAPS,ssr或snp,它们与涉;M^发明红^JJi的基因座紧密连锁。确^^因M^目似^1:的另一方iCAH^^发明可肯^t^的基因型和本发明已知*的基因型。该基因型》b^EF2-^t^Jiii行，F2辨辨是由本发明可育^t^已知WMl间杂交得到的F1-代自;t^t粉而衍生的。F2-辦能用預查表型即，内部叶片着红色分离的^Rf在。所有tb^的表型也肯腿it^个方面确定，例如心叶片花"fr^/叶绿素比值，或者^L璃或塑料下生长的植昧中着红色情况。才娥本发明的红莴苣胁的种子在2005年7月18日保^fijNCIMB，躬己号是NCIMB41337，NCIMB41338和NCIMB41339。本发明还涉;sjt些种子的后代，以及涉;sut过杂交或分子生物技术的方式而获得引^^发明着红色的植林基因细LAil基因复合体的^^。本发明还涉及这些^#或者获得本发明着红色性状的,的后代。为了将对红^^作用的基因转到另一舰，可以^f^J回交育种。为此，期望的纯^^培品种或自交种(inbred)作为回交亲本。待转的性状源称为供方亲本。最贿到的^K期望具有回交亲本的属性(例如，躲品种)和转自供方亲本的所期望性状。初始杂交后，拥有供方亲;^^型(心内叶片着红色)的^^皮筛选出来并#亲本重复杂交(回交)。最,到的^^期望具有回交亲本的属性(例如，絲品种)和转自供方亲本的所期望性状。倘若着红色遗传比其它期望性城性^^且合妙复杂，带有红色心叶片的亲本可用作回交亲本，而带有其它期望性城性^i且合的亲本可用作供方亲本。其它通常用于不同性;I^fp作物的育种方法的描述可见;L^^考书(例如，"PrinciplesofPlantBreeding"JohnWileyandSon,第115-161页，1960;Allard，1960;Si咖onds，1979;Sne印等，1979;Fehr，1987)。本发明进一步在下述实施例描述，并JL^斤述实施例仅^A描述的目的，而^^fi"f可情况下不用于P艮制^^发明。图l出示了对于来自"99P.30637"xcv."SharpShooter"杂交的212F3-系，而言，夕h^和内部叶片着红色的系内分离分布。红色着色的三个分类应用于如下##:"红色夕KT，即具有红色夕Kp叶片^K的系内频率，而不考虑内部叶片颜色；"红色外和红色内"，即具有红色夕^和红色内部叶片*的系内频率；"红色内/红色外"，即在具有红色夕^叶片的所有种系*中具有红色内部叶片*的频率。才Wii传模式，0=，的；E,望的。图2出示了基于"99P.30637"xcv."SharpShooter"杂狄离的花青素狄的遗传模式。图3a出示了本^发明糊K该幼小植抹是从03P82421系种子得到的,，03P82421系是胁99P38154的三代自花授粉25的后得到的。图3b，3c和3d分别出示了亲本Pierrot，Pippo和Gringo的幼小植昧。图3e和3f分别出示了对照品种Apache和Bijou的幼小#^。所有这些幼小植#^生"1^温度16"C下光照14小时^j显度12t:下黑暗10小时的生长室中的泥炭块中。皿过PhilipsTLD36W840REFLEX管产生，每0.24平方米1管，距离上iiit物之上0.6米。图4出示了与商业品种Pippo，Pierrot和Gringo的幼小叶片相tb^的本发明,的幼小叶片，用"NEW"表示。这些幼小^tP生絲温度161C;jy、14小时^^显度12X:黑暗10小时的生长室中的泥炭块中。M过PhilipsTLD36W840REFLEX管产生，每0.24平方米1管，距离Jii^t物^Ji0.6米。图5-8出示了;^发明樣昧(01P80146)分别和商业品种Darkland(用"99R10044"表示;图5a-5d)，Pierrot(用"95G2237"表示;图6a-6d)，Roxy(用"99R10283，，表示;图7a-7d)和Sierra(用"95G1986"表示,图ga-8d)之间的》嫩。a-图(5a，6a，7a，8a)出示了完整釆收的叶球，b-图(5b，6b,7b，8b)出示了无夕卜部叶片的心，c-图(5c，6c，7c，8c)出示了心的纵向切面。d-图(5d，6d，7d,8d)出示了切开的心叶片。本发明莴苣WK在叶球心里A^i全红色，而其它莴苣^MfTvl这样。所有*于2002年都生^法国Aramon:2002年l月10日播种，2002年2月15日移栽到可信任的线，2002年4月25日練实施例实施例1^^明红莴苣i昝系本发明莴苣才娥下面镨系得到1986年在cv.Pi卯o(RijkZwaan;着红色)；tfc^cv.BlondeMaraichere(Caillard;着绿色)##^间杂交。1988年，AUi述杂交得到的红^^fJ(^^用作和cv.Gringo(RijkZwaan;着红色)W^杂交的3C^。同年，在cv.Pierrot(RijkZwaan;着红色)；tfc^和cv.Roxette(RijkZwaan;着绿色)植^ii行杂交。1989年，AUi述杂交得到的红^^fJ(^Ml作和cv.Krizet(RijkZwaan;着绿色)胁杂交的汰1992年，AUi述Krizetx(PierrotxRoxette)杂交选出红色F3-后代，并且月它作为和3C^tfc^杂交中的母本，父本是AUi^Gringox(Pipp0xBlondeMaraichere)杂交选出的红^^Rifc^。1995年从新得到的1992杂交种中选出红色F4-^^,并iUI]它作为和cv.Roxette(RijkZwaan;着绿色),杂交中的母本。类型、威^^^颜色的选择从杂交开始的F2-，F3-和F4—J(^行,最终在1998年得到红色F4-才沐(98P.31582)。F5-系从颜色(红^ft晦色)上出现分离，但是在下一代中的筛选得到具有完全红色心叶片的三个球F5-糊M99P.38152;99P.38154;99P.30637),接下来/L^^^fcit些胁。显示了不分离绿色植抹的后代和种子以编号02R.2413,01R.1439,02R.2418保藏。这些F5-才4^其后代已用作进一步育种具有光-独立红色着色作用的莴苣的亲本源。总之，可以说在使用的亲本品种当中，^t^就是Pippo，BlondeMaraichere，Gringo，Pierrot,Roxette和Krizet在对、心中都不具有特有的红色叶片。本发明包括来自这些红色和绿色亲本品种的独特的并且新的基因组合，其^^心内^C供完全红色叶片。实施例2^^发明红莴苣的ij传^^斤正如在此使用的，基因座定义为染色体上基因所在的特定位置。(GriffithsAJF,MillerJH，Suzuki,DT，LewontinRC，Gelbart,M'Anintroductiontogeneticanalysis.'6thedition.1996.WHFreemanandCompany,NewYork.)给定胁中引絲红色的基因座数目可通辦该^#^着绿色cv"SharpShooter"杂^代的遗传分析确定。本发明红莴苣的遗传分析通过以下步^ii行在编号99P.30637的F5-植抹的后代植眛，即本发明^#和色彩不鲜艳的着绿色的cv.SharpShooter巻心莴苣胁(SVS，Waycott等，1999:美国专利号5，973，232)之间杂交。将源自该杂交后代的212个随才几F2-才^^繁歹线F3-系。对上述212个F3-系在荷兰Fijnaart的可信任的室外试睑中进行测定。2002年6月17日在泥炭^Ji播种，幼苗^L璃温室中生长，2002年7月5日移栽到田间。釆收日期(》膝时间)从2002年8月19日到8月23日。微田大小是^"F3-系24^4^,即4行，其中每行6^W。没有重复种系，因为一^^中颜色特征的杀Ji^非常稳定的。观瘵在#-^3-*中进行。，tt^t征是a)颜色，并且如果是红色，其夕h^叶片上强度和狄图案，b)颜色，并且如果是红色，其内部叶片上强;l和^t图案，c)结^^i^，d)如果是绿色夕I^P叶片在如下2组中评定^feil不,。以如下的递增顺序评定着红色强度和表达图案，所iiiil增顺序为1)淡色或红色，即夕h^和内部叶片ii^，或内部叶片底部着淡红色，2)红斑，3)绿斑，即红叶片表面上的敏，4)完全红色，即夕Mp叶片的曝光部分上无徵泉的强烈红色，并J^内部叶片JCi^^内部叶片上无逸泉的强烈红色。用l)稍微打开的叶球，象长叶莴苣(romaine)或直立莴苣(coslettuce)，和2)带有清Btt叠叶片的强硬叶球、(M心莴苣(iceberglettuce))两批絲球。微中一些W^釆收前死亡。其中预期5088##^中，即212x24,有总数5007棵F3-蹄^J錄收期，并JLst其进行了评定(錄l)。所有,出示了结^7JC平，该结^7K平至少与长叶莴苣(ro咖ine)或直立莴苣具有可比性。数据显示从悉数212列里面有55列完全绿色分离。从具有至少一棵着红色M的157列里面，有28列是包紛h^叶片上4^显示花M絲的胁。^Jiii28列里面，有8列是包括心叶片上^P显示花"frt狄的。具有至少一棵着红&WK的157列中，33列中的着红色##仅^1^叶片而不是在心叶片显示花"Hr^to157列中着红&WK的另外33列中的着红色^M^h^叶片和心叶片上都显示了花"fr^^it剩下的91列着红^t^里面都在外部叶片显示了花青素表达。然而，上iiifc^显示了在心叶片内花青素^Ji的种系内分离。5007^fc^里面没有一^4^显示心叶片花絲^Jt与夕MP叶片着绿^i^合。因此，推导出^KP叶片中iiA^絲狄的一个或多个基因对于心叶片中花青素表狄必要的。红色和绿色之间分离时，夕Np叶片着色中红色和绿色之间的分离比值范围从23:1到1:22。对于内部叶片，红色和绿色着色之间分离比值范围从18:1到1:23，其中排除了所有具有绿色夕h^叶片的胁。表l出示了对于随械自"99P.30637"xCV."SharpShooter"杂交的212个F3-系，其外侧和内侧叶片的红色和绿色着^4^的种系内分布。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>上述分离数据錄立孟德尔分离比值约束下用于构建遗传模式。已发餘少三个基因座涉及内部叶片中获得紫外-独J4^^4ii。第一基因座，进一步用A-a表示，在已知红莴苣中也发现，并且为获得花"M:4i^性等錄因A在所有情况下是必要的。该基因座可肯feAC或G基因座(Robinson等，1983，Thegenesoflettuceandcloselyrelatedspecies.In:PlantBreedingReviews1.Ed.JJanick.第267-293页)。第二基因;iA通过调整模iC^现的，进一步用B-b表示，其中纯賴絲在的隐性等M因b连同A引^h^叶片的花^:^J^两个以上的基因座，进一步用C-c和D"d表示，^t^^现涉;^卜部叶片花"fr^^J^^1#"性等位基因C的至少一个复制，或纯何i(^在隐性等M因d，都引勤h^叶片中的花"fr^^ii，但这仅^50l:在等M因A的至少一个复制^^4在的情况下。发现了三个以上的基因座，进一步用E-e，F-f和G-g表示。为了在内部叶片获得紫外-独立花"fr^^ii，需要至少一个A-等M因和两个b-等^因的存在以M性E"^Hi^因的一个复制或者纯合形式的f-等^因或者纯^式的g-等M因的存在。因#至少三个基因座，即A-a,B-b和E-e，F-f或G-g上存在的用于红色着色作用的等位基因对于内部叶片的紫外-独立花青素表iiA必要的。^卜，假i^少三个，但是可育Lhi^斤有七个基因座都涉;s^发明着红色强度。实施例3莴苣颜色，花絲和叶绿素的确定1.l.样林备和分析4M具有下^L^的^^ibt^计Ultrospectni(Pharmacia):-单色器具有全4#射光栅(1200行/毫米)的车尔尼旋转器-波长准确度±1纳米-波长再现性土0.5纳米-传感器类型单固^^^fc^l管-带宽5纳米2.原理红色(花青素)和绿色(叶绿素)用生物化学方法确定。获得两个提取物，一个用于523纳米下吸光率的测定，该测;t^悉花青素的测定，一个用于665纳米下piUt率的测定，该测^A总叶绿素(叶^:素a和b)的测定。采收已结球并成熟的莴苣,，同时剥去夕I^P叶片，直到剩下心。莴苣心用于》—斤。心叶片在采收前应当没有直接暴露到阳光下，除了##、顶部上叶片(最多10%)的很小的顶部。心包括至少10片具有1^i^更长的叶片。心里最老的叶片应当是凹入的。将心獻塑^fLE,并JL^低于-70X:温度下冷冻。在-70X:温度下至少几^，用大##冷冻了的叶心4树。细小样#液氮(样本应当絲冷冻)的存在下使用自由悬浮的盖子在Grindomix(GM200,Retsch，5〃3000rpm接着5"5000rpm)中研磨，以得到粉末。接着^P^^^试管，将盛有粉末的试管在液氮中冷冻，并且^^^f氐于-70X:温度下储存，直到进行分析。4.分析三克粉^^好后^v四个50毫升的试管。两^NC管用于^"析花"fr^:，两M管用于分^H"绿素。为了花青素的测定，将50。/。曱醇中的1.0M盐酸立即加入两^管。根据样本魏色和提出物，使用5-10毫升/克^^本。使用的^R(毫升)要注意。样^^UU手^Mf置于:bNUi。^p分i^t^1.5毫升印pendorf试管，并且试管在4C13000转/^4中下离心4^4中。光^fM具有5纳米带宽的分iUeJL计进行测定。使用1M比色杯。测定360-900纳米光镨，并测定523纳米的^率(如果必要的话，在用浸提液稀释后)和最大波长(入咖x)。入咖x应当接近523纳米。立即向两^/f加入100%甲醇来测定叶绿素。#^样本频色和提出物，<狄5-10毫升/^#本的甲醇。^^的、(毫升)要注意。样^^I手搅4W时在'setdegas，下子超声^^中振动5^4中进^^声处理。"~^分溶液放入1.5毫升印pendorf试管，并且试管在4匸，13000转/分钟下离心4分钟。测定360-900纳米光谱，并测定665纳米pAit率(如果必要的话，在用浸提液稀释后)和最大波长(入max)。入max应当接近665纳米。toA523和A665，以，10毫升提:fi^:^^中1克鲜重溶液的piUt率。^^下面公式计算e^it的A523和A665，其中^^对称重样本(克)、提:|^^(#:亳升)的*，并且如果必要的^HMW^释度的^:妙"tuS傻.-g^C"T^w画'、A=-*稀释度重量*10计算A523/A665比值。表2a出示了在法国Aramon莴苣(2002年l月10日播种，2002年2月15日移栽，2002年4月25日采收)观测到的叶绿素和花"H:PA^和花青素/叶绿素比值。01P.80146系是通ii^99P.38154两代自;ft^t粉而获得的后代。Pierrot(RijkZwaan)，Darkland(CentralValley)，Sierra(VUmorin)和Roxy(Enza)是^if莴苣品种。表2b出示了在荷兰Fijnaart莴苣(2002年5月21日播种，2002年6月10日移栽，2002年8月20日采收)观测到的叶绿素和花絲^Jt率和花青素/叶绿素比值。01P.80146系是通ii^99R38154两代自;^t粉而获得的后代系。Pierrot(RijkZwaan)，Pippo(RijkZwaan)，RedRosalite(Johnny，sSelected&Orsetti),Darkland(CentralValley)，Sierra(Vilmorin)和Roxy(Enza)是"fit莴苣品种。表2a<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>表2b<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>保藏信息2005年7月18日F5-胁01R.1439，02R.2413和02R.2418^f^絲英国AberdeenAB219YABucksburnCraibstone地产Ferguson大厦的NCIMB(FergusonBuilding,CraibstoneEstate,Bucksburn,AberdeenAB219YA，UnitedKingdom)，其保藏射己号分别是NCIMB41337，NCIMB41338和NCIMB41339。权利要求1.莴苣物种中的结球莴苣植株，其中包括心的整个球具有红色叶片。2.即使在缺少短于400nm波长的辐射下仍在心中具有红色叶片的的莴苣植林o3.如权矛凌求2所述的莴苣胁，其中从播种到观测的整个时期，生錄境中缺少短于400nm波长的辐射。4.^M'漆求l-3^fP项所述的莴苣M,其中心叶片的花^和叶绿素之间^UW比值A523/A665在4和50之间。5.如;^U'漆求4所述的莴苣;^，其中心叶片的花^^M"绿素之间piUt率比值A523/A665在9和27之间。6.^^U'虔求l-3^fi^项所述的莴苣,，其中十片超过l絲的最年轻心叶片的花青素和叶绿素之间^OW比值A523/A665在4和50之间。7.^5U，J^求6所述的莴苣检眛，其中十片超过1厘米的最年轻心叶片的花絲和叶绿素之间级賴比值A523/A665在9和27之间。8.4^U'漆求l-7^r^项所述的莴苣胁，^^有引起心中心叶片着红色的基因《試，该基因症赋包括用于花青素絲的基因座，至少两个涉狄心内着红色的基因座，以及^i^的至少两个涉;M"红色强度的基因座。9.:N5Uf'J^求l-Mi—项所述的莴苣鹏，其是从2005年7月18日保^fijNCIMB的种子得到的，所述种子的射己号是NCIMB41337,NCIMB41338和NC顏1339。10.^^U'j要求1一M—项所述的莴苣她，^*有2005年7月18日保^!]NCIMB,射己号是NCIMB41337，NCIMB41338和NCIMB41339的种子的的基因纟赋，该基因M^引起心中叶片着红色。11.莴苣糾的莴苣WK，即使从播种到观测的整个时期，生^T嫂中缺少短于400nm波长的辐射，其还具有红色叶片。12.dH5Uf'漆求ll所述的莴苣胁，其中花絲和叶绿素之间pil^比值A523/A665在4和50之间。13.:iwM'澳求ll所述的莴苣胁，其中花絲和叶绿素之间PiU^比值A523/A665在9和27之间。14.》^']^求11或12所述的莴苣,，其中十片超过1M的最年轻心叶片的花絲付绿素之间^J^t她A523/A665在4和50之间。15.:fe^U，J^求14所述的莴苣^K，其中十片超过l^ft的最年轻心叶片的花"H:衬绿素之间C^比值A523/A665在9和27之间。16.权舰求l-15^-项所述的莴苣舰的后代。17.W'j^求l—161'P项所述的莴苣皿的种子。18.WU慎求l-l6P项所述的莴苣胁叶球。19.在莴苣树的莴苣,中引起包括心的整个球的叶片都着红色的基因复*,其包括用于花青素狄的基因座，至少两个涉;Mi心内着红色的基因座，以"Ji^的至少两个涉;M"红色强度的基因座。20.^!^'J^求19所述的基因复^，^#在于2005年7月18日保彰)JNCIMB,躬己号是NCIMB41337,NCIMB41338和NCIMB41339的种子中。全文摘要本发明涉及一种包括心的整个球具有红色叶片的莴苣物种的结球莴苣。心内的红色叶片即使在缺少短于400nm波长的辐射下还是红色，其中从播种到观测的整个时期，其生长环境中缺少短于400nm的波长辐射。花青素和叶绿素之间的比值在4和50之间，优选9和27之间。本发明还涉及植物的后代。文档编号A01H5/10GK101272682SQ200680034527公开日2008年9月24日申请日期2006年9月20日优先权日2005年9月20日发明者A·M·J·阿莫兰,C·M·莫尔,E·C·J·斯密特斯,J·W·舒尔特,K·雷尼恩克申请人:瑞克斯旺种苗集团公司