专利名称：一种天麻种子萌发菌(xl-m0701)及制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种微生物技术领域，具体地说是国家地理标志保护产品“昭通天麻” 种子萌发菌(XL-M0701)及制备方法和应用。
背景技术：
以云南省彝良县小草坝林区乌天麻为代表的国家地理标志保护产品“昭通天 麻”(2004年获得认证)是享誉中外的名贵中药材。天麻是树兰亚科异养型植物，在自然条 件下，天麻种子萌发生长必须依靠萌发菌、蜜环菌这类真菌供给营养，不同萌发菌所提供的 营养对天麻种子的萌发和种子发芽后原球茎的生长都有不同影响。国内公知的已鉴定到种 的天麻种子萌发菌株紫萁小菇(Mycena osmundicola)、石斛小菇(Mycena dendrobii)、兰 小燕(Mycena orchidicola)禾口开唇兰小 (Mycena anoectochila)，其中石解小 在天麻 人工种植中运用较多。为了在人工栽培“昭通天麻”的过程中得到纯正品质的乌天麻种子， 需要在乌天麻野生环境寻找一种与乌天麻最具共生优势的萌发菌源，并分离、纯化出对昭 通天麻种子萌发、生长较优良的萌发菌株，以保证昭通天麻栽培质量和产量。
发明内容
本发明的目的是提供一种用于播种“昭通天麻”种子的萌发菌(XL-M0701)，以及它 的制备方法和应用，该菌株有效地保证昭通天麻的纯正品质。本发明以采自野生状态萌发的乌天麻初生球菌为菌源，筛选、分离、纯化出能保 持昭通天麻特性的优良萌发菌株(XL-M0701)，该菌株的分类命名为石斛小菇Mycena dendrobii，保藏登记号为CGMCC No. 3848。该菌株的制备方法为1)野外培育天麻原球茎选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个约30立方厘米的袋子，袋 底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面潮湿的含有阔叶树半腐落 叶或日本金星蕨根，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均勻播上天麻种子，种面上盖一层落叶 再覆鲜沙土 8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先挖好的林地塘穴内，盖土堆高出地 面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶。2)整粒球茎分离上述播种袋培育50-60天后，取出袋子(可见到部分天麻种子已经被萌发成初生 球茎)，挑选发育健壮的乌天麻原球茎置于培养皿内，用自来水洗净杂物后带入接种室，在 洁净工作台内经消毒处理后，无菌操作将球茎接入PDA斜面培养基，接种完毕，贴上标签， 将接种管(皿)放入2 恒温箱内培养；3)菌种纯化恒温培养3-10天，见球茎萌生出白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点无菌移接到 斜面培养基上，观察菌丝生长情况并作好记录，将长势不一(或有杂菌)的管(皿)种再度提纯，把提纯后的菌种两两之间做拮抗试验，从而纯化出本发明的XL-M0701菌株；4)将纯化的菌株制成生产种用于天麻种子萌发，再次得到了优质的乌天麻栽培种子。菌落特性XL-M0701菌株在PDA固体培养基上生长的形态特征为菌落白色、规则，具有荧光 反应，菌丝无色，具有锁状联合，菌丝呈束状螺旋弯曲生长，气生菌丝发达。该菌株经中科院昆明植物所标本馆用延长因子(EFl-a)序列分子鉴定与石斛小 菇形似性最近。该菌株在101-301均能生长，以251生长最快，基质含水量40%-60%，？!15. 5-6 范围菌丝生长最好。菌株应用将XL-M0701菌株扩转培养为三级生产种，在干净容器内把片状的生 产种撕成碎片，与粉状的天麻种子均勻拌合后，再播种在林下塘穴内的阔叶树枝材(直径 50-80mm)上，覆叶盖土 50-60天后，天麻粉种即可萌发生长为天麻原生球茎。本发明的积极效果因XL-M0701菌株的菌源采自于野生状态的乌天麻原球茎，保 证了国家地理标志保护产品昭通天麻的品质特性，并且在与其他菌种的对比试验中证明本 发明(XL-M0701)菌株对昭通乌天麻种子的萌发数量和速度较优。能够为昭通天麻的规模 化种植提供优质乌天麻良种。本发明的萌发菌株(XL-M0701)于2010年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏登记号为CGMCC No. 3848，保藏地址北京市朝 阳区北辰西路1号院3号。
具体实施例方式1、XL-M0701菌株的制备方法1)野外培育天麻原球茎选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个 约30立方厘米的袋子，袋底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面 潮湿的含有阔叶树半腐落叶或日本金星蕨根的腐殖土，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均 勻播上天麻种子，种面上盖一层落叶再覆鲜沙土 8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先 挖好的林地塘穴内，盖土堆高出地面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶；2)整粒球茎分离上述播种袋培育50-60天后，取出袋子，挑选发育健壮的乌天麻 原球茎置于培养皿内，用自来水洗净杂物后带入接种室，在洁净工作台内经消毒处理后，无 菌操作将球茎接入PDA斜面培养基，接种完毕，贴上标签，将接种管(皿)放入2 恒温箱 内培养；3)菌种纯化恒温培养3-10天，见球茎萌生白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点 无菌移接到PDA斜面培养基上，观察菌丝生长情况并作好记录，将长势不一(或有杂菌)的 管(皿)种再度提纯，把提纯后的菌种两两之间做拮抗试验，从而纯化出本发明的XL-M0701 菌株(试管种)。2、菌种扩繁使用含水量55%的木屑、麦麸等体积比的混合培养料，将XL-M0701 试管种扩转培养成600ml瓶装二级种，再用等体积的木屑、麦麸混合料拌合阔叶树树叶制 成袋装培养料，灭菌后在无菌条件下接入二级种，在湿度70%、室温22°C _25°C条件下培养 60-80天，即成为三级生产用种。
3、菌株的应用将上述三级生产用种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻 栽培种子。应用实例1)2008年7-10月，在云南省彝良县小草坝林间，使用XL-M0701转扩的三级生产 种，拌合小草坝野生乌天麻粉种1080穴/袋，播种90天后抽样检查，结果见下表
权利要求
1.一种天麻种子萌发菌(XL-M0701)，其特征在于该菌株的分类命名为 Mycenadendrobii，保藏登记号为CGMCC No. 3848。
2.权利要求1所述的天麻种子萌发菌(XL-M0701)的制备方法，其特征在于按以下步骤 进行1)野外培育天麻原球茎选择天麻种子自然成熟的7-8月，用双层地膜制成一个约30 立方厘米的袋子，袋底凿几个孔后装上10厘米鲜沙土，采集野生天麻适生林间地面潮湿的 含有阔叶树半腐落叶或日本金星蕨根的腐殖土，平铺在袋内沙土上，适量喷水后均勻播上 天麻种子，种面上盖一层落叶再覆鲜沙土 8-10厘米，扎好袋口并将播种袋置于事先挖好的 林地塘穴内，盖土堆高出地面，稍压紧，再盖一层枯枝落叶；2)整粒球茎分离上述播种袋培育50-60天后，取出袋子，挑选发育健壮的乌天麻原球 茎置于培养皿内，用水洗净杂物后带入接种室，经消毒处理后，无菌操作将球茎接入PDA斜 面培养基，接种完毕，将接种管(皿)放入恒温箱内培养；3)菌种纯化恒温培养3-10天，见球茎萌生白色菌丝后，立即挑取基质内菌丝点无菌 移接到PDA斜面培养基上，观察菌丝生长情况，将长势不一的管种再度提纯，把提纯后的菌 种两两之间做拮抗试验，从而纯化出XL-M0701菌株；
3.权利要求1所述的天麻种子萌发菌(XL-M0701)的应用，其特征在于将纯化的菌株制 成生产种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻栽培种子。
全文摘要
本发明是一种天麻种子萌发菌(XL-M0701)及其制备方法。该菌株的分类命名为Mycenadendrobii，保藏登记号为CGMCC No.3848。将纯化的菌株制成生产种用于乌天麻种的培养，得到了优质的乌天麻栽培种子。因XL-M0701菌株的菌源采自于野生状态的乌天麻原球茎，保证了国家地理标志保护产品昭通天麻的品质特性，并且在与其他菌种的对比试验中证明本发明(XL-M0701)菌株对昭通乌天麻种子的萌发数量和速度较优。能够为昭通天麻的规模化种植提供优质乌天麻良种。
文档编号C05F11/08GK102061263SQ20101051870
公开日2011年5月18日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者凌敏, 徐畅 申请人:昭通神农乌天麻良种繁育有限公司