专利名称：一种蜜环菌(xl-a0704)及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是国家地理标志保护产品“昭通天麻”的一种共生蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和应用。
背景技术：
以云南省彝良县小草坝林区乌天麻为代表的国家地理标志保护产品“昭通天麻”， 是享誉中外的名贵中药材。天麻是树兰亚科异养型植物，在自然条件下，天麻种子发芽形 成原球茎后，主要靠消化浸入繁殖茎和麻体的蜜环菌菌丝供给营养。蜜环菌生物种株较 多，分布地域广阔。但不同生物种的蜜环菌株其成分含量有明显差异，种出的天麻产品其 种质就有优劣之分。云南省昭通市各县山区所产的天麻，在I960年代被中科院昆明植物 所研究员周铉首次发表，定名为乌天麻(Gastrodia elata Bi. f. glauca S. Chow)、黄天麻 (Gastrodia elataBl. f. flavida S. Chow)，但是多年来昭通乌天麻生长所必须的共生蜜环 菌一直未能被分离提纯使用。昭通天麻适生区的麻农，沿用寻找林间染菌的朽木、枯枝作引 菌种植天麻，但产量低且不确定，在栽培过程中存在林材浪费和经济损失。
发明内容
本发明的目的是提供一种天麻生长所必需的蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和 应用，该菌种(XL-A0704)能确保昭通天麻的人工种植生产。本发明利用野外采集的优势蜜环菌源，筛选、分离、纯化出能保持昭通天麻特 性的优良蜜环菌株，该菌株的分类命名为Armillaria sinapina，保藏登记号为CGMCC No.3847。该菌株的制备方法为1)采集野外蜜环菌源材料作为引菌，与直径50_80mm阔叶树枝拌合并植入林下塘 穴作为菌材。在次年天麻种子自然成熟的7-8月再将与萌发菌拌好的天麻种子均勻撒播在 塘穴内的菌材上，覆盖阔叶树鲜叶和砂土进行培育。2) 16-24个月后，在塘穴内天麻生长数量多、形体好的菌材上挑选成丛着生、粗细 适宜、生长健壮、顶端白色的菌索数段置于培养皿内，按无菌操作规程接种到PDA试管斜面 培养基上，把接种好的试管贴上标签作好记录，放入25°C恒温箱，相对湿度60 70%，培 养3-10天，再选择长入培养基的幼嫩菌索进行纯化，直至筛选得到所需的纯菌株(试管菌 种)。菌落特性XL-A0704菌株在PDA固体培养基上生长的形态特征为菌丝白灰色，菌索黄白色， 分枝多，荧光反应强，黑色素分泌少。该菌株气温在6°C-30°C、PH5-6. 5范围均能生长，以25°C生长最快。湿度在 60% -100%以内能正常生长，但在纯液体培养基内生长缓慢或不生长，全光照环境下菌索 生长缓慢，黑暗条件下菌索生长最快。
该菌株经中科院昆明植物所用延长因子(EFl-a)序列分子鉴定为芥黄类蜜环菌 混合群。菌株的应用使用麦麸煮汁、葡萄糖、琼脂培养基，将XL-A0704菌株试管种扩转成 二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育枝 材或菌材供天麻栽培使用。本发明的优点1)该菌株的使用减少了麻农种植昭通乌天麻的盲目性。2)该菌株对昭通天麻球茎生长具有较好的亲和力，能保证“昭通天麻”特性，有效 地实现国家地理标志保护产品“昭通天麻”的纯正品质，实现标准化、专业化、规模化发展天 麻产业。本发明的蜜环菌(XL-A0704)于2010年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏管 理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏登 记号为CGMCC No. 3847。
具体实施例方式1、制备试管菌种1)野外选择蜜环菌源(采集小草坝天麻产区不同地段的蜜环菌源材料)作为引 菌，与直径50-80mm阔叶树枝拌合并植入林下塘穴作为菌材。在次年天麻种子自然成熟的 7-8月再将与萌发菌(石斛小菇Mycena dendrobii，保藏登记号为CGMCC No. 3848，或用 其它萌发菌)，拌好的天麻种子均勻撒播在塘穴内的菌材上，覆盖阔叶树鲜叶和砂土进行培育。2) 16-24个月后，在塘穴内天麻生长数量多、形体好的菌材上挑选成丛着生、粗细 适宜、生长健壮、顶端白色的菌索数段置于培养皿内，按无菌操作规程接种到PDA试管斜面 培养基上，把接种好的试管贴上标签作好记录，放入25°C恒温箱，相对湿度60 70%，培养 3-10天，再选择长入培养基的幼嫩菌索进行纯化，直至筛选得到所需的纯菌株即试管菌 种。2、菌种扩繁按1000毫升水秤取麦麸200克、葡萄糖20克、琼脂18克制成瓶 装固体培养基，无菌操作将XL-A0704试管种转接到上述培养基上，放入室温25°C，湿度 70% -80%的黑暗培养室培养25天， 即可长成二级菌种。再制备将长度2-3厘米、径粗 1-2厘米的阔叶树鲜枝节清水浸泡24小时，装入750毫升菌种瓶至瓶肩，向瓶内注入清洁 水到半淹没表面枝节，经加盖灭菌后，无菌操作接入二级菌种，把接种后的种瓶放进室温 220C -25°C，相对湿度70% -80%的黑暗培养室培养50-60天，即可培育出三级树枝菌种。3、点菌播种7_8月份，采用菌种、枝材、天麻种子“三下窝”播种方式，选择适宜荒 林地开挖成70厘米X 50厘米X 15-20厘米的播种穴，挖松捣平穴底，铺一薄层树叶，将径 粗5-8厘米阔叶树枝材砍成60厘米节段，段木两侧砍好鱼鳞口后间隔5-8厘米平放穴内， 把树枝菌种从瓶内掏出卡入鱼鳞口中，再在段木之间放入适量鲜树枝节，回填鲜砂土至平 齐枝材，压实。将拌和好天麻种子的萌发菌种叶均勻撒播在枝材面上，盖一薄层鲜叶后，覆 土 10-15厘米，使穴顶高出地面。应用实施例1) 2008年7月，在昭通市彝良县小草坝林间，使用扩转培养的(XL-A0704)三级树枝菌种点培枝材，采用“三下窝”方法播种小草坝野生乌、绿天麻种子1080穴/袋，播种20 个月后抽样检查，结果见下表。
权利要求
1.一种蜜环菌(XL-A0704)，其特征在于该菌株的分类命名为Armillaria sinapina， 保藏登记号为CGMCC No. 3847。
2.权利要求1所述的蜜环菌(XL-A0704)的制备方法，其特征在于按以下步骤进行1)采集野外蜜环菌源材料作为引菌，与直径50-80mm阔叶树枝拌合并植入林下塘穴培 育为菌材，在次年天麻种子自然成熟的7-8月再将与萌发菌拌好的天麻种子均勻撒播在塘 穴内的菌材上，覆盖阔叶树鲜叶和砂土进行培育；2)16-24个月后，在上述塘穴内天麻生长数量多、形体好的菌材上挑选成丛着生、粗细 适宜、生长健壮、顶端白色的菌索数段置于培养皿内，按无菌操作规程接种到PDA试管斜面 培养基上，把接种好的试管贴上标签作好记录，放入25°C恒温箱，相对湿度60 70%，培养 3-10天，再选择长入培养基的幼嫩菌索进行纯化，直至筛选得到所需的纯菌株。
3.权利要求1所述的蜜环菌(XL-A0704)的应用，其特征在于将XL-A0704纯菌株扩转 成二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育 枝材或菌材供天麻栽培使用。
4.权利要求3所述的蜜环菌(XL-A0704)的应用方法，其特征在于7_8月份，选择适 宜荒林地开挖成70厘米x50厘米X15-20厘米的播种穴，挖松捣平穴底，铺一薄层树叶，将 径粗5-8厘米阔叶树枝材砍成60厘米节段，段木两侧砍好鱼鳞口后间隔5-8厘米平放穴 内，把树枝菌种卡入鱼鳞口中，再在段木之间放入适量鲜树枝节，回填鲜砂土至平齐枝材， 压实，将拌和好天麻种子的萌发菌种均勻撒播在枝材面上，盖一薄层鲜叶后，覆土 10-15厘 米，使穴顶高出地面。
全文摘要
本发明是一种蜜环菌(XL-A0704)及其制备方法和应用。该菌株的分类命名为Armillaria sinapina，保藏登记号为CGMCC No.3847。将XL-A0704纯菌株扩转成二级固体菌种，用二级固体菌种扩转培养三级瓶装树枝菌种，使用树枝菌种作引菌培育枝材或菌材供天麻栽培使用。本发明的菌株具有以下优点1)该菌株的使用减少了麻农种植昭通乌天麻的盲目性。2)该菌株对昭通天麻球茎生长具有较好的亲和力，能保证“昭通天麻”特性，有效地实现国家地理标志保护产品“昭通天麻”的纯正品质，实现标准化、专业化、规模化发展天麻产业。
文档编号A01G1/04GK101999295SQ201010518720
公开日2011年4月6日 申请日期2010年10月26日 优先权日2010年10月26日
发明者凌敏, 徐畅 申请人:昭通神农乌天麻良种繁育有限公司