专利名称：一种防治油茶病害的生防放线菌菌株及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物保护领域，尤其涉及一种防治油茶主要病害的生防放线菌菌株及其应用，具体地说涉及一种高效防治油茶炭疽病的球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002 及应用。
背景技术：
油茶(Camellia oleifera)是我国特有的食用油料树种，亦是世界四大木本油料树种之一，已有2000多年的利用和栽培历史。它适应性广，抗逆性强，适种于广大的红壤丘陵低地区。主要生长在南方，以湖南、江西、广西为主，其中湖南省是国内最大的油茶产地和最大的茶油消费区。油茶全身都是宝，具有很高的经济价值。据统计，油茶面积在10万亩以上的县有130个，30万亩以上的县有56个，50万亩以上的县有19个。年产茶油1. 3 1.5亿公斤，是二亿多人口的主要食用油来源。目前全国有油茶林400万公顷，占全国木本食用油料面积的80%以上，常年产油15万吨。目前，油茶的病害种类繁多，其危害程度也愈发严重。每年因病害而造成的经济损失难以估计，其中油茶炭疽病是一种常见的油茶病害。油茶炭疽病是由胶胞炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)侵染引起的一种毁灭性病害，是我国油茶产区的主要病害之一，发生普遍，引起严重落果、落蕾、落叶、枝枯，甚至整株衰亡。病害落果率通常在20%左右，严重时40%以上。据浙江省的资料，由于油茶炭疽病，严重病区发病率高达80%，病树的平均存果率比无病树降低了 63.3%。当前对油茶炭疽病的防治主要通过种植抗性品种和化学防治来控制，但有害生物抗性问题日益严重，且化学农药残留造成严重的危害，如造成残毒、污染环境，对人体健康、生态环境造成了很大的威胁，不利于油茶产业生产的可持续发展。因此寻找一种经济、 安全、有效的防治措施是当务之急。放线菌广泛存在于不同的自然生态环境里，土壤是放线菌习居的良好场所。许多放线菌能够产生抗生素，具有良好的抑制植物病原菌生长和促进植物生长作用。土壤拮抗放线菌具有环境友好、拮抗作用良好、作用效果持久、针对性强等优点，是很有开发和应用潜力的生防菌。从根际土壤中分离筛选获得对油茶炭疽病菌具有拮抗作用的生防菌株，对油茶炭疽病的防治具有重要的意义，但目前相关技术仍旧很薄弱甚至空白，至今20多年能有效防治油茶炭疽病病的拮抗放线菌未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种高效防治油茶幼林病害的球孢链霉菌球孢亚种球孢变种CSUFTAC0906002，球孢链霉菌球孢亚种球孢变种CSUFTAC0906002是一种从植株根际土壤中分离筛选获得对油茶多种主要病害具有广谱拮抗作用的生防放线菌菌株，对油茶幼林病害的防治及促进油茶苗木生长具有重要意义。本发明另一个目的是提供所述高效防治油茶炭疽病的球孢链霉菌球孢亚种球孢
3变种CSUFTAC0906002在防治油茶病害方面的多种应用。本发明的技术方案是提供一种高效防治油茶炭疽病的球孢链霉菌球孢亚种球孢变种CSUFTAC0906002，在PDA固体培养基上菌株菌落干燥、表面不光滑，有突起，菌落边缘不整齐，浅灰色。孢子丝非螺旋形，长枝条状。孢子卵圆形、球形、长圆形，表面光滑。 基丝无色，有时背面微黄色。气丝较少，气丝秸草色、乳脂色或微黄秸草色。该菌株已于 2011年1月10日在中国典型培养物保藏中心进行了保藏，名称为球孢链霉菌球孢亚种 CSUFTAC0906002, (Streptomyces globixporus supsp. globisporus)CSUFTAC0906002 ；保藏编号为CCTCC NO =M 2011012。本发明所述高效防治油茶病害的球孢链霉菌球孢亚种 CSUFTAC0906002通过平板对峙试验筛选获得。本发明还提供了所述高效防治油茶病害的球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002 在防治油茶主要病害上的应用，并且可以用于制备防治植物病害的制剂。所述的植物主要病害包括油茶炭疽病、油茶叶枯病、油茶半边疯病、油茶茶饼病、 油茶根腐病、油茶软腐病、柑橘炭疽病、荷花玉兰炭疽病、杉木炭疽病。该菌株尤其在油茶炭疽病和油茶叶枯病上防治效果显著。所述的防治油茶病害的制剂的制备过程如下(1)先将菌液发酵发酵条件为接种量为10%，装液量100mL/300m L，初始 PH7. 0，温度25 30°C，发酵时间16 ；发酵培养基为酵母粉0. 5%，葡萄糖1 %，磷酸二氢钾0. 1%，氯化钠0. !^，碳酸钙。^1^，？!！自然；(2)将米糠与发酵液混合，自然风干后碾碎制成原粉；添加40wt%原粉，38wt%高岭土，IOwt %木质素磺酸钠，7wt % SDS，5wt %腐植酸制成制剂。所述的米糠进一步粉碎，过30-80目细筛；将发酵液与米糠混合，混合的比例按照质量体积为1 0.5-2进行。所述的米糠优选过80目筛，米糠与发酵液混合比例优选按照质量体积为1 2 进行。所述的菌剂还可以经过稀释后，直接以喷洒和灌根的方式用于防治油茶病害。所述的菌剂稀释100-1000倍。本发明的有益效果是(1)球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002，对油茶主要病害均有防治作用，对多种病原真菌具有拮抗作用，而且具有对病原菌的作用方式多种多样、繁殖速度快等优点，尤其对油茶炭疽病菌抑制作用强，对油茶炭疽病的防治具有重要意义；在植物病害生物防治中所起到的作用非常重要；(2)该种菌株培养条件简单，容易保存，易于工业化生产，具有良好的开发应用前
旦
ο
图1为球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002菌株菌落形态图；图2为球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002菌株菌丝形态图；图3为球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002菌株对油茶炭疽病菌的平板对峙拮抗作用图4为球孢链霉菌球孢亚种CSUFTA⑶906002菌液发酵后活性组分液质联用图。
具体实施例方式本发明提供球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002新菌株，其展现出对油茶炭疽病具有较强的拮抗活性。本发明的新菌株分离自园林植物根基土壤。本发明的球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002，在PDA固体培养基上菌株菌落干燥、表面不光滑，有突起，菌落边缘不整齐，有褶皱，浅灰色。孢子丝非螺旋形，长枝条状。孢子多，卵圆形、球形、长圆形，表面光滑。基丝无色，有时背面微黄色。气丝较少，气丝秸草色、乳脂色或微黄秸草色。在高氏1号培养基上生长较慢，孢子较少，菌落浅灰色。菌株的生化反应明胶液化慢。牛奶胨化。淀粉水解快。硝酸盐还原。不产生类黑色素酪氨酸酶和H2S。利用葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、麦芽糖、甘露糖、鼠李糖、淀粉、甘油、甘露醇、柠檬酸钠；不利用蔗糖、乳糖、棉子糖。不利用亚硝酸盐作为氮源。下面结合实施例对本发明作进一步的详细说明，而不会限制本发明。实施例1CSUFTAC0906002的分离、筛选及鉴定取土样，采用常规法进行分离、纯化和保存。我们从土壤中共分理出14株放线菌， 用平板对峙法，初筛到6株抑菌直径大于5mm的菌株，再用摇瓶复筛，得到抑制菌丝生长的菌株。最终确定CSUFTAC0906002的拮抗作用最强。筛选到的菌株经过形态学观察，生理生化实验以及分子生物学鉴定，最终确定该菌为球孢链霉菌球孢亚种。本发明球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002菌株菌落和菌丝形态图见图1和图 2。实施例2CSUFTAC0906002的抗菌谱测定采用对峙培养法。将打好直径为6mm的病原菌菌饼放于平板中央，然后用接菌环蘸取待测菌悬浮液等距离(距平板中央3cm)点接拮抗菌，放于培养箱中黑暗培养，4d 后观察记录抑菌带的有无及大小，共重复3次。结果见表1。表1CSUFTAC0906002菌株对10种供试病原菌的拮抗作用
权利要求
1.一种防治油茶病害的生防放线菌菌株，其特征在于，所述的菌株为球孢链霉菌球孢亚种(Streptomyces globixporus supsp. globisporus) CSUFTAC0906002 ；保藏编号为 CCTCC NO :M 2011012。
2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述的植物病害包括油茶炭疽病、油茶叶枯病、油茶半边疯病、油茶茶饼病、油茶根腐病、油茶软腐病、柑橘炭疽病、荷花玉兰炭疽病、杉木炭疽病。
3.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述的油茶病害为油茶炭疽病和油茶叶枯病。
4.权利要求1-3任一项所述的菌株应用于防治油茶病害。
5.根据权利要求4所述的应用方法，其特征在于，所述的菌株用于制备防治油茶病害的制剂。
6.根据权利要求5所述的应用方法，其特征在于，所述的防治油茶病害的制剂的制备过程如下(1)先将菌株发酵发酵条件为接种量为10%，装液量100mL/300mL，初始pH7.0，温度25 30°C，发酵时间16 ；发酵培养基为酵母粉0.5%，葡萄糖1%，磷酸二氢钾0. 1%, 氯化钠0. !^，碳酸钙。^1^，？!！自然；(2)菌剂制备将米糠与发酵液混合，自然风干后碾碎制成原粉；添加40wt%原粉， 38wt %高岭土，IOwt %木质素磺酸钠，7wt % SDS，5wt %腐植酸制成制剂。
7.根据权利要求6所述的应用方法，其特征在于，所述的米糠进一步粉碎，过30-80目筛；将发酵液与米糠混合，混合的比例按照质量体积为1 0.5-2进行。
8.根据权利要求7所述的应用方法，其特征在于，所述的米糠过80目筛，米糠与发酵液混合比例按照质量体积为1 2进行。
9.权利要求6所述方法制备的菌剂的应用方法，其特征在于，所述菌剂经过稀释后，以喷洒和灌根的方式用于防治油茶病害。
10.根据权利要求9所述的应用方法，其特征在于，所述的菌株的菌剂稀释100-1000倍。
全文摘要
本发明公开了一种防治油茶病害的生防放线菌菌株及其应用方法。所述的菌株为球孢链霉菌球孢亚种CSUFTAC0906002，保藏编号为CCTCC M 2011012。该菌株发酵液与米糠混合，自然风干后碾碎制成原粉；添加40wt％原粉，38wt％高岭土，10wt％木质素磺酸钠，7wt％SDS，5wt％腐植酸制成菌剂；将菌剂稀释后直接以喷洒和灌根的方式用于防治油茶病害。该菌株对油茶主要病害均有防治作用，对多种病原真菌具有拮抗作用，而且具有对病原菌的作用方式多种多样、繁殖速度快等优点。尤其对油茶炭疽病菌抑制作用强，对油茶炭疽病的防治具有重要意义，具有良好的开发应用前景。
文档编号A01P3/00GK102206592SQ20111000705
公开日2011年10月5日 申请日期2011年1月13日 优先权日2011年1月13日
发明者周国英, 宋光桃, 李琳, 李红军, 杨蕾 申请人:中南林业科技大学