专利名称：一种棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法
技术领域：
本发明涉及微生物菌肥技术领域，特别是涉及一种棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法。
背景技术：
棕色固氮菌易于培养，在实验室内可固定大量的氮素，所以对固氮的研究多使用此属细菌。在自然界中，棕色固氮菌广泛分布于土壤和水中，能固定游离氮素而具有重要作用，一般在偏酸性环境中生长发育不良。棕色固氮菌作为有益固氮菌，离体条件下能自身固氮，固氮能力强(菌种保藏制手册，中国科学院微生物研究所，科学出版社，1980)，如果将其制成菌肥，不仅能在土壤和多种作物根际中固定空气中的氮气以提供作物的氮素营养需求，又能分泌激素刺激作物生长。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种微生物菌肥，该菌肥中含有大量棕色固氮菌及有益菌，可固定大量空气中的氮素，供作物生长。为了解决上述技术问题，本发明采用如下的技术方案 本发明棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法，包括如下步骤
(1)菌悬液的制备将棕色固氮菌配制成60 80亿个/ml的菌悬液；
(2)发酵腐熟按照重量份计算，取固体农家肥60 70份，加入秸秆粉20 30份、吸附剂4 6份、过磷酸钙2 3份或磷酸二氢钾1. 5 2. 5份、水1 2份，拌勻，60 70°C 发酵3 4天，即得腐熟料；
(3)配制菌肥按照重量份计算，取腐熟料90 95份、糖0.5 1. 5份、灭菌水5 7 份、菌悬液0. 3 1-2份，混勻，在25 30°C发酵5 6天，干燥，即得。进一步的，上述制备方法为
(1)菌悬液的制备将棕色固氮菌配制成68亿个/ml的菌悬液；
(2)发酵腐熟按照重量份计算，取固体农家肥65份，加入稻草或秸秆粉25份、风化煤或草碳5份、过磷酸钙2. 5份或磷酸二氢钾2份、水1. 5份，拌勻，60 70°C发酵3 4天， 即得腐熟料；
(3)配制菌肥按照重量份计算，取腐熟料92.6份、糖1份、灭菌水6份、菌悬液0. 4份， 混勻，在25 30°C发酵5 6天，干燥，即得。优选的，前述制备方法中所用的菌悬液按如下方法制备
(1)富集培养液配制蔗糖15g、磷酸二氢钾0.Sg、硫酸镁0. 2g、氯化钠0. 2g、碳酸钙 lg、钼酸钠0. 05g、硫酸亚铁0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH为6. 5 7. 0 ；
(2)富集培养方法取3 5g肥沃土壤土样用50ml水制成混浊液，吸取5ml悬浮液装入盛有30ml富集培养液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培养3 5天；
(3)平板分离培养基的制备在富集培养液中加入琼脂制成平板分离培养基，灭菌，(4)平板分离培养取富集培养后的培养液，10倍稀释后涂布于平板分离培养基，28°C 培养2天；
(5)增菌培养取(4)所得的平板菌落，移入富集培养液，28°C培养2天，得菌液；
(6)发酵按富集培养液100菌液3 7的重量份比例混合，置于发酵罐中，即摇床发酵培养，搅拌速度200转/分，培养温度27士 1°C，培养M小时，然后在罐温四士 1°C、罐压 0. 4 0. ^g/cm3、搅拌速度180转/分的条件下培养48小时，收集发酵液体，调节pH 6. 8 7. 2，搅拌均勻，即可。采用上述技术方案制备的微生物菌肥，具有很好的增产效果 (1)使用地点
贵州省畜牧兽医研究所试验地和龙里县为主要观测地点，设三个处理棕色固氮菌微生物菌肥、农家肥和未施肥。推广应用地点主要为龙里、天柱、丹寨和毕节等县市。(2)播种施肥
2010年3月和2011年3月，田间试验总面积1200 m2，推广试验面积1000亩。棕色固氮菌微生物菌肥按40 60 kg /667 m2用量施入，农家肥(基肥)540 kg /667 m2，先后两次等量施入，其它常规管理一致。或者按种子微生物菌肥为10:1的重量比接种。接种微生物菌肥时应避免阳光直射，接种了微生物菌肥的种子应当日播完。通过采用科学的种植和施肥方法，牧草和农作物产量得到提高，水稻、黑麦草、玉米、蔬菜农作物产量比对照单施农家肥分别提高了 4. 2%、6. 0%、4. 9%、4. 0%。与现有技术相比，本发明以农作物秸秆、稻壳或草炭为载体，将棕色固氮菌接种于农家肥制备成微生物菌肥，解决了农畜粪便对环境的污染和农作物秸秆高效利用的问题， 并且棕色固氮菌与料堆发酵中产生的乳酸杆菌、酵母菌、木霉菌、曲霉的相互作用不但可使畜禽粪便迅速降解、转化、腐熟，还可使物料形成适宜有益微生物菌群生长的微生态环境， 有益微生物可迅速繁殖，能够产生各类生物活性物质，有效地抑制有害菌的生长，促进作物旺盛生长，提高农作物产量，增强农作物的抗病能力，改善土壤肥力，本发明菌肥肥效高，有益菌数高达151亿个/g，其中棕色固氮菌可达7X IO8个/g，能有效增产农作物，并且方便施用，特别适用于禾本科牧草，如黑麦草年产达到5000 5500 kg /667 m2。
具体实施例方式实施例1 首先按如下方法配制菌悬液
(1)富集培养液配制蔗糖15g、磷酸二氢钾0.Sg、硫酸镁0. 2g、氯化钠0. 2g、碳酸钙 lg、钼酸钠0. 05g、硫酸亚铁0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH为6. 5 7. 0 ；
(2)富集培养方法取3 5g肥沃土壤土样用50ml水制成混浊液，吸取5ml悬浮液装入盛有30ml富集培养液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培养3 5天；
(3)平板分离培养基的制备在富集培养液中加入琼脂制成平板分离培养基，灭菌，
(4)平板分离培养取富集培养后的培养液，10倍稀释后涂布于平板分离培养基，28°C 培养2天；
(5)增菌培养取(4)所得的平板菌落，移入富集培养液，28°C培养2天，得菌液；(6)发酵按富集培养液100 菌液3 7的重量份比例混合，置于发酵罐中，即摇床发酵培养，搅拌速度200转/分，培养温度27士 1°C，培养M小时，然后在罐温^±1°C、罐压
0.4 0. ^g/cm3、搅拌速度180转/分的条件下培养48小时，收集发酵液体，调节pH 6. 8 7. 2，搅拌均勻，即可。菌悬液的制备将上述棕色固氮菌配制成68亿个/ml的菌悬液；
发酵腐熟取固体农家肥65kg，加入秸秆粉25kg、风化煤(吸附剂)^g、过磷酸钙 2. 5kg"jC 1. 5kg，拌勻，60 70°C发酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料92. 6kg、糖浆1kg、灭菌水6kg、菌悬液0. 4kg，混勻，在25 30°C 发酵5 6天，干燥，即得。该棕色固氮菌有效菌数高达151亿个/g，其中棕色固氮菌7X IO8个/g。实施例2:
菌悬液的制备取实施例1所制备的棕色固氮菌制成60亿个/ml的菌悬液； 发酵腐熟取固体农家肥70kg，加入稻草粉30kg、草炭(吸附剂)4kg、磷酸二氢钾
1.^g、水^ig,拌勻，60 70°C发酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料90kg、蔗糖1. 5kg、灭菌水5kg、菌悬液0. 3kg，混勻，在25 30°C 发酵5 6天，干燥，即得。实施例3:
菌悬液的制备取市场上购买的棕色固氮菌制成70亿个/ml的菌悬液； 发酵腐熟取固体农家肥60kg，加入秸秆粉20kg、风化煤(吸附剂)meg、过磷酸钙3kg、 水1kg，拌勻，60 70°C发酵3 4天，即得腐熟料；
配制菌肥取腐熟料95kg、甘露醇(糖)0. ^g、灭菌水Ag、菌悬液0. ^g，混勻，在25 30°C发酵5 6天，干燥，即得。
权利要求
1.一种棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法，包括如下步骤(1)菌悬液的制备将棕色固氮菌配制成60 80亿个/ml的菌悬液；(2)发酵腐熟按照重量份计算，取固体农家肥60 70份，加入秸秆粉20 30份、吸附剂4 6份、过磷酸钙2 3份或磷酸二氢钾1. 5 2. 5份、水1 2份，拌勻，60 70°C 发酵3 4天，即得腐熟料；(3)配制菌肥按照重量份计算，取腐熟料90 95份、糖0.5 1. 5份、灭菌水5 7 份、菌悬液0. 3 1-2份，混勻，在25 30°C发酵5 6天，干燥，即得。
2.按照权利要求1所述棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法，其特征在于(1)菌悬液的制备将棕色固氮菌配制成68亿个/ml的菌悬液；(2)发酵腐熟按照重量份计算，取固体农家肥65份，加入稻草或秸秆粉25份、风化煤或草碳5份、过磷酸钙2. 5份或磷酸二氢钾2份、水1. 5份，拌勻，60 70°C发酵3 4天， 即得腐熟料；(3)配制菌肥按照重量份计算，取腐熟料92.6份、糖1份、灭菌水6份、菌悬液0. 4份， 混勻，在25 30°C发酵5 6天，干燥，即得。
3.按照权利要求1或2所述棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法，其特征在于菌悬液按如下方法制备(1)富集培养液配制蔗糖15g、磷酸二氢钾0.Sg、硫酸镁0. 2g、氯化钠0. 2g、碳酸钙 lg、钼酸钠0. 05g、硫酸亚铁0. lg、蛋白胨5g、水1000ml, pH为6. 5 7. 0 ；(2)富集培养方法取3 5g肥沃土壤土样用50ml水制成混浊液，吸取5ml悬浮液装入盛有30ml富集培养液的250ml三角瓶中，150rpm，25 30°C，培养3 5天；(3)平板分离培养基的制备在富集培养液中加入^)琼脂制成平板分离培养基，灭菌，(4)平板分离培养取富集培养后的培养液，10倍稀释后涂布于平板分离培养基培养2天；(5)增菌培养取(4)所得的平板菌落，移入富集培养液，28°C培养2天，得菌液；(6)发酵按富集培养液100菌液3 7的重量份比例混合，置于发酵罐中，即摇床发酵培养，搅拌速度200转/分，培养温度27士 1°C，培养M小时，然后在罐温^±1°C、罐压 0. 4 0. ^g/cm3、搅拌速度180转/分的条件下培养48小时，收集发酵液体，调节pH 6. 8 7. 2，搅拌均勻，即可。
全文摘要
本发明公开了一种棕色固氮菌微生物菌肥的制备方法，首先将棕色固氮菌配制成60～80亿个/ml的菌悬液；然后将固体农家肥、秸秆粉、吸附剂、过磷酸钙或磷酸二氢钾混合，加水发酵得腐熟料；最后将腐熟料、糖、灭菌水和菌悬液混匀，发酵，干燥，即得，本发明菌肥肥效高，有益菌数高达151亿个/g，其中棕色固氮菌书可达7×108个/g，能有效增产农作物，并且方便施用，特别适用于禾本科牧草，如黑麦草年产达到5000～5500kg/667㎡。
文档编号C05F11/08GK102153387SQ20111012290
公开日2011年8月17日 申请日期2011年5月13日 优先权日2011年5月13日
发明者吴位珩, 孙淑琴, 朱冠群, 李红曙, 杨茂生, 梁应林, 裴晓红 申请人:贵州省畜牧兽医研究所