专利名称：金银花快速组培繁殖方法
技术领域：
本发明涉及植物生物技术中植物组织培养方法，特别是金银花的快速组培繁殖方法。
背景技术：
金银花属于忍冬科植物，全草均可入药，花蕾含有挥发性芳香油、肌醇、皂苷、绿原酸、黄酮类化合物、肉桂酸、橙花醇、茉莉醛等，茎中含有生物碱，叶中含有忍冬甙和木犀素等，是传统中药材之一，也是药食两用的原料，具有清热解毒，凉散风热，保肝利胆的功效，在中医领域一直用于痈肿疔疮，喉痹，丹毒，热毒血痢，风热感冒，温热发病的治疗；现在更多的用于保健养生茶饮，金银花茶香气宜人，可以制作饮料，对防治盛夏中暑、上呼吸道感染、风热感冒和肠胃疾病有良好的效果，对清除人体自由基、延缓衰老、提高人体免疫机能等具有良好的作用，因而也是高血压和心血管系统患者降低胆固醇的保健佳品；金银花集观赏药用于一身，经济价值高，市场需求量很大，因而需要大量繁殖金银花。目前，金银花主要以扦插、播种、嫁接、压条等传统方法进行繁殖，不仅受季节限制，而且成活率很低，不能满足大规模生产的需要；嫁接繁殖虽然植株适应性强，根系发达的优点，但须大量采集野生资源，而且工序繁杂，成活率也很低。发明专利申请号200610050985. 4公开了“灰毡毛忍冬金银花高效繁殖技术”，采用先进的扦插方法，但其方法繁杂，其成活率也只有70%。已公开的发明专利申请号201110292502. 2是申请人于2011年申请的“金银花组培繁殖方法”专利，该方法采用金银花植物组织成功培养出了金银花植株，但由于该申请没有详细注明培养基的单位，以致说明不完整。同时，经过一年的继续研究实践，申请人发明了组培繁殖更快速，生根率更高的技术方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种方便大面积推广且不受季节限制，可快速大量繁殖金银花的组培繁殖方法。为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是金银花的快速组培繁殖方法，其步骤如下。⑴制备培养基。①用二水氯化钙400mg/L、硝酸钾1900mg/L、硝酸铵250mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸铵220mg/L、硝酸镁320mg/L、磷酸二氢钠40mg/L、七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、六水氯化钴O. 025mg/L、五水硫酸铜O. 025mg/L、碘化钾O. 83mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸锰22. 3mg/L、二水钥酸钠O. 25mg/L、肌醇IOOmg/L、盐酸硫胺素 O. lmg/L、盐酸批P多辛 O. 5mg/L、甘氨酸 2mg/L、烟酸 O. 5mg/L、IBA0. 0001mg/L、6-BAO. 0004mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6g/L制备pH=5. 8的分化和丛生芽培养基，称为MBl培养基。②用二水氯化1丐200mg/L、硝酸钾950mg/L、硝酸铵125mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、硫酸铵110mg/L、硝酸镁160mg/L、磷酸二氢钠20mg/L、七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、六水氯化钴O. 025mg/L、五水硫酸铜O. 025mg/L、碘化钾O. 83mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸锰22. 3mg/L、二水钥酸钠O. 25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素O. lmg/L、盐酸批卩多辛O. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸O. 5mg/L、IBAO. 003mg/L、卡拉胶6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制备pH=5. 8的生根培养基，称为MB2培养基。③将配制好的各培养基装进灭菌器里灭菌，调节温度达到121°C时，记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移储存起来后待用。⑵金银花外植体的采集从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段,剪去叶，留叶柄基部。⑶金银花外植体的消毒将采集的金银花外植体放入1%浓度的洗衣粉水中冲洗3-5分钟，再放到浓度为O. 1%的升汞液中处理15-17分钟，同时加入O. 1%的链霉素，然后用无菌水清洗4-5次，彻底除去升汞。⑷诱导和分化培养接着取出外植体，接种在分化培养基上，每管接种I芽，培养温度25-28°C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时；材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，19-21天逐渐形成丛生芽，24-26天腋芽长出2_3cm0(5)增殖培养待腋芽长出2-3cm时，再进行分段处理，剪切成长度为2. 0-2. 5cm的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，每瓶培养4-6芽，培养温度25-28 °C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时，经过24-26天，芽苗长到2. 0-3. 0cm，在丛生芽增殖倍率达3-5倍时，调低培养温度至21°C，每天增加光照时间至12-14小时，以培养壮苗，为生根打下基础。(6)生根培养选取生长健壮，高达2. 5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，在温度23-25°C、湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时的环境下培养13-15天，小苗将长出白色短根，生根率达50%，20天时，生根率达85%。本发明的有益效果是本方法容易快速成苗，植株一致性强，生长健壮整齐，便于管理，生产成本低，操作简单，繁殖周期短，仅需70天即可成苗，生根率可达85%，生产量大，移栽成活率在95%以上，可根据市场情况大批量生产优质金银花苗。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明。I.配制培养基为了适用于大量生产，首先要把上述的MBl和MB2培养基成分分别配制成大量元素、微量元素、铁盐、有机维生素、细胞分裂素以及植物生长素等母液，详细如下表。
权利要求
1.金银花快速组培繁殖方法，其特征在于该方法包括以下步骤 ⑴制备培养基 ①用二水氯化韩400mg/L、硝酸钾1900mg/L、硝酸铵250mg/L、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸铵220mg/L、硝酸镁320mg/L、磷酸二氢钠40mg/L、七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、六水氯化钴0. 025mg/L、五水硫酸铜0. 025mg/L、碘化钾0. 83mg/L、七水硫酸锌8. 6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸锰22. 3mg/L、二水钥酸钠0. 25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0. lmg/L、盐酸卩比卩多辛0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0. 5mg/L、IBAO. 0001mg/L、6-BAO. 0004mg/L、白糖30g/L、卡拉胶6g/L制备pH=5. 8的分化和丛生芽培养基； ②用二水氯化韩200mg/L、硝酸钾950mg/L、硝酸铵125mg/L、磷酸二氢钾85mg/L、硫酸铵110mg/L、硝酸镁160mg/L、磷酸二氢钠20mg/L、七水硫酸亚铁27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37. 3mg/L、六水氯化钴0. 025mg/L、五水硫酸铜0. 025mg/L、碘化钾0. 83mg/L、七水硫酸锌8.6mg/L、硼酸6. 2mg/L、四水硫酸锰22. 3mg/L、二水钥酸钠0. 25mg/L、肌醇100mg/L、盐酸硫胺素0. lmg/L、盐酸批卩多辛0. 5mg/L、甘氨酸2mg/L、烟酸0. 5mg/L、IBA0. 003mg/L、卡拉胶6g/L、白糖20g/L、活性炭500mg/L制备pH=5. 8的生根培养基； ③将配制好的各培养基装进灭菌器里灭菌，调节温度达到121°C时，记时灭菌21分钟，灭菌完后，把灭菌好的培养基迅速转移储存起来后待用； ⑵金银花外植体的采集从室外选取健壮、无病虫害带腋芽或顶芽的金银花嫩茎段，剪去叶，留叶柄基部； ⑶金银花外植体的消毒将采集的金银花外植体放入1%浓度的洗衣粉水中冲洗3-5分钟，再放到浓度为0. 1%的升汞液中处理15-17分钟，同时加入0. 1%的链霉素，然后用无菌水清洗4-5次，彻底除去升汞； ⑷诱导和分化培养接着取出外植体，接种在分化培养基上，每管接种I芽，培养温度25-28°C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时；材料接种15天后，基部产生少量黄白色的愈伤组织，19-21天逐渐形成丛生芽，24-26天腋芽长出2-3cm ； (5)增殖培养待腋芽长出2-3cm时，再进行分段处理，剪切成长度为2.0-2. 5cm的茎段，将茎段转接至丛生芽增殖培养基上，每瓶培养4-6芽，培养温度25-28 °C，湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时，经过24-26天，芽苗长到2. 0-3. 0cm，在丛生芽增殖倍率达3-5倍时，调低培养温度至21°C，每天增加光照时间至12-14小时； (6)生根培养选取生长健壮，高达2.5cm的无根小苗，切成单株后接种到生根培养基上，在温度23-25°C、湿度50%，光照强度1500-3000LX，光照时间为每天10-12小时的环境下培养13-15天，小苗将长出白色短根，生根率达50%，20天时，生根率达85%。
全文摘要
金银花快速组培繁殖方法，包括培养基的制备、金银花外植体的采集和消毒、组织诱导和分化培养、增殖培养和生根培养，通过组织培养，可以使金银花快速成苗，植株一致性强，生长健壮整齐，便于管理，生产成本低，操作简单，繁殖周期短，仅需70天即可成苗，生根率可达85%，生产量大，移栽成活率在95%以上，可根据市场情况大批量生产优质金银花苗。
文档编号A01H4/00GK102972294SQ20121050993
公开日2013年3月20日 申请日期2012年12月4日 优先权日2012年12月4日
发明者何全慧, 罗朝远, 刘湘凤, 袁自强, 祝利 申请人:重庆市秀山红星中药材开发有限公司