参与控制茄科植物种内及种间生殖障碍的一类基因slf及其应用的制作方法
【专利摘要】参与控制茄科植物种内及种间生殖障碍的一类基因SLF及其应用。本发明公开了一类在茄科植物中参与控制种内和种间生殖障碍的SLF基因及其编码的蛋白，其中SLF基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No：1-5所示，其编码的蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No：6-10所示。本发明公开了通过基因工程技术将SLF基因转入矮牵牛和番茄等茄科植物，从而消除种内和种间生殖障碍的方法。本发明还公开了利用上述多核苷酸及其编码的蛋白，在栽培番茄和野生番茄之间进行遗传育种的应用。
【专利说明】参与控制茄科植物种内及种间生殖障碍的一类基因SLF及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于植物基因工程和育种【技术领域】。具体地说，本发明涉及一个控制茄科种内和种间生殖障碍的基因家族SLF (S-locus f-box)，该家族包含5个SLF基因。本发明还涉及所述SLF基因编码的蛋白质及其功能类似物，以及含有所述SLF基因核苷酸序列的载体和含有该基因核苷酸序列或该载体的宿主细胞；另外，本发明还涉及利用所述载体转化植物细胞以打破茄科植物种内及种间生殖障碍的方法以及在茄科遗传育种中的相关应用。
【背景技术】
[0002]生殖障碍制约了作物遗传多样性的提高和杂交优势的利用。例如，栽培番茄在人工驯化和育种的过程中，遗传多样性逐步丧失，导致其遗传背景单一而对生物和非生物逆境抗性下降(Tanksley and McCouch, 1997)。具有高度遗传多样性的野生番爺与栽培番茄之间的生殖障碍阻碍了它们之间的基因交流，制约了栽培番茄遗传多样性的提高(Rick，1988)。番茄生殖障碍还降低了杂交育种的效率，增加了育种的时间和难度(Bernacchi andTanksley,1997)。
[0003]茄科植物是与人类关系最密切的植物之一，既包含适合科学研究的模式植物(番茄，矮牵牛等)，还包含许多重要的经济作物(土豆，番茄和烟草等)(Rick，1988)。茄科中的番爺亚属包括17个种，它们在种内和种间表现出不同的生殖障碍(Bedinger et al.,2011)。番茄种间生殖障碍会引起栽培番茄与野生番茄杂交子一代自交不亲和，限制了育种家利用野生番爺资源对栽培番爺进行改良(Bernacchi and Tanksley, 1997)。因此,研究并打破种间生殖障碍是番茄育种的重要目标。高密度的种间渐渗系材料，成熟的转基因技术以及高质量的栽培番茄全基因 组数据使得番茄成为研究生殖障碍的模式材料。
[0004]番茄的生殖障碍主要分为两类:一类是种内生殖障碍，自交不亲和性(self-1ncompatibility, SI);另一类是种间生殖障碍，单向不亲和性(unilateralincompatibility, UI)。自交不亲和性是指在一些雌雄同花且正常可育的被子植物中，自花授粉受到抑制的现象。前人的研究结果表明，番茄的自交不亲和性是由单一的复等位基因位点所控制，该位点被称为自交不亲和位点一S位点(the S-locus) 0遗传研究发现该位点至少编码两类基因，花柱表达的花柱S基因和花粉表达的花粉S基因，分别控制花柱和花粉的自交不亲和特异性。这两类基因紧密连锁，构成了一种遗传单元，被称为S单体型(S-haplotype) (Zhang et al.，2009)。番茄的花柱S基因编码一类T2家族的核酸酶，被称为
S-RNase (Parry et al.，1997)，番茄的自交不亲和现象也因此被命名为S-RNase类自交不亲和性。番茄的花粉S因子目前还不清楚。其它S-RNase类自交不亲和物种，如车前科金鱼草和茄科矮牵牛的花粉S因子已被证明是一类与S-RNase基因紧密连锁的F_box基因，命名为 SLF(S_locus F-box) (Lai et al., 2002 ；Qiao et al., 2004 ；Si jacic et al.,2004)。最近的研究结果表明多个SLF蛋白协同作用，识别异己S-RNase并使其进入泛素-26S蛋白酶体系统被降解，同时避免降解自己的S-RNase (Kubo et al., 2010 ；Sun and Kao,2013)。
[0005]人们在研究番茄自交不亲和性的过程中，发现当自交亲和的栽培番茄对自交不亲和的野生番茄授粉时，花粉管无法抵达胚珠完成受精；反之，当自交不亲和的野生番茄对自交亲和的栽培番茄授粉时，花粉管可以抵达胚珠完成受精并产生成熟的种子。这种与正反交方向相关的种间生殖障碍被称为单向不亲和性(Martin，1964)。遗传研究表明，含有两个野生潘那利番茄遗传因子的栽培番茄可以打破对野生番茄的单向不亲和性(Chetelatand DeVema，1991)。这两个遗传因子分别被定位在6号染色体(ui6.1)和I号染色体(uil.1)上(Bernacchi and Tanksley, 1997 ；Li et al.,2010)。Li 等人通过遗传学手段证明ui6.1编码一个Cullinl蛋白，在野生番茄中功能正常，而在栽培番茄中失去功能(Liand Chetelat, 2010)。uil.1目前被定位在I号染色体S位点附近约12cM的区域内(Li etal.，2010)，其分子本质和作用机制还不清楚。
[0006]本发明从打破番茄种间生殖障碍，进一步利用番茄野生种质资源出发，利用同源克隆的方法在番茄中克隆了一类SLF基因。这类基因在栽培番茄中由于提前终止而丧失功能，而在野生多毛番茄中功能正常，这样的种间基因功能差异与之前发现的ui6.1情况类似。上述SLF基因中的部分成员在杂交矮牵牛中异位表达可以打破杂交矮牵牛S单体型为S3S%植株的自交不亲和性，提示这类基因作为花粉S因子发挥功能且在属间功能保守。带有功能正常的SLF基因和ui6.1的栽培番茄可以打破对野生番茄的单向不亲和反应，提示这些SLF基因可能作为uil.1参与番茄的种间生殖障碍。根据上述的结果，育种家可以通过基因工程来恢复栽培番茄SLF基因的功能，使其花粉可以消除对野生番茄的种间生殖障碍，从而利用野生番茄种质资源。
【发明内容】
[0007]本发明分离了参与控制茄科植物种内及种间生殖障碍的多核苷酸家族(将其命名为SLFs，(S-locus E-box))和其编码的蛋白质，以及包含该多核苷酸的载体，核酸构建体，细胞和植物材料等。本发明还涉及一种消除茄科植物种内和种间生殖障碍的方法，及本发明中多核苷酸和其编码蛋白的应用。
[0008]基于上述，在第一个方面，本发明提供一种分离的多核苷酸，其包含或由选自下组之一的多核苷酸组成:
[0009]a) SEQ ID No:1_5中任一项所示的多核苷酸；
[0010]b)多核苷酸，其编码SEQ ID No:6_10中任一项所示的氨基酸序列，或编码SEQ IDNo:6-10中任一项所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸但保留SEQID No:6-10的氨基酸序列的功能而得到的氨基酸序列；
[0011]c)多核苷酸，其编码与SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列具有至少60 %的序列同一性，优选至少70 %的序列同一性，优选至少80 %的序列同一性，优选至少90%的序列同一性，优选至少95%的序列同一性和优选至少99%的序列同一性的氨基酸序列；
[0012]d)多核苷酸，其在严谨条件下，优选中等严谨条件下和更优选高等严谨条件下可以与a)或b)或c)中任一项杂交(上述严谨条件可为在6X SSC，0.5% SDS的溶液里，在65°C下杂交，然后用 2XSSC，0.1% SDS 和 1XSSC，0.1% SDS 各洗膜一次)；[0013]e)多核苷酸，其为a)-d)中任一项的活性片段。
[0014]优选地，本发明的多核苷酸由SEQ ID No:1-5所示的核苷酸序列组成或由编码SEQID No:6-10所示的氨基酸序列的核苷酸序列组成。
[0015]更优选地，本发明的多核苷酸编码的蛋白为参与控制茄科植株种内及种间生殖障碍的相关蛋白。
[0016]本发明进一步提供重组载体或核酸构建体，其包含本发明的至少一种多核苷酸。
[0017]本发明进一步提供植物细胞，其包含本发明的重组载体或核酸构建体。
[0018]本发明还提供转基因植物，其包含本发明的植物细胞。优选地，本发明的植物是茄科植物，更优选的选自番茄，土豆或烟草。
[0019] 本发明进一步提供一种植物材料，包括上述植物的后代，克隆，繁殖材料，种子，果实，植物材料，植物细胞培养物，植物器官和部分，优选为种子。
[0020]进一步地，本发明还提供上述植物材料制备的组合物，包括食品和饲料等。
[0021]在第二个方面，本发明提供一种参与控制茄科植物种内及种间生殖障碍的蛋白，其由本发明第一方面所述的任一种多核苷酸序列编码，其为具有SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列的蛋白质，或者是将SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸的取代、缺失或添加且具有与SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列相同的功能的由SEQ ID No:6-10中任一项衍生的蛋白质。优选地，所述蛋白质优选具有SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列。更优选地，所述蛋白质由SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列组成。
[0022]在第三个方面，本发明提供一种培育消除种内及种间生殖障碍的茄科植物的方法，该方法包括将本发明的多核苷酸序列导入所述茄科植物的细胞中的步骤，或者包括使用将本发明的重组载体或核酸构建体导入所述茄科植物的细胞的步骤，和将得到的转基因植物细胞培育成为转基因植株的步骤，从而使所得到的转基因植株消除了种内及种间生殖障碍。其中所述茄科植物包括，但不限于，番茄，土豆，烟草。
[0023]在第四个方面，本发明提供了一种消除茄科植物种内及种间生殖障碍的方法，所述方法包括在所述茄科植物中使本发明的多核苷酸过表达的步骤，其中所述茄科植物包括，但不限于，番茄，土豆，烟草。
[0024]在第五个方面，本发明提供了本发明的多核苷酸序列及其编码蛋白质、本发明的重组载体或核酸构建体、或本发明的转基因植物细胞在消除茄科植物种内及种间生殖障碍方面的用途，其中所述茄科植物包括，但不限于，番茄，土豆，烟草。
[0025]在第六个方面，本发明提供了本发明的多核苷酸序列及其编码蛋白质、本发明的重组载体或核酸构建体、或本发明的转基因植物细胞在调控茄科植物种内或者种间传粉受精方面的应用。
[0026]在第七个方面，本发明提供了一种利用上述多核苷酸序列及其编码蛋白质在栽培番茄和野生培番茄之间进行遗传育种的应用。
[0027]综上所述，本发明提供下述各项:
[0028]1、分离的多核苷酸序列，其包含或由选自下组之一的多核苷酸序列组成:
[0029]a) SEQ ID No:1_5中任一项所不的多核苷酸序列；
[0030]b)多核苷酸序列，其编码SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列，或编码SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸但保留SEQ ID No:6-10的氨基酸序列的功能而得到的氨基酸序列；
[0031]c)多核苷酸序列,其编码与SEQ ID No:6_10中任一项所不的氨基酸序列具有至少60 %的序列同一性，优选至少70 %的序列同一性，优选至少80 %的序列同一性，优选至少90%的序列同一性，优选至少95%的序列同一性和优选至少99%的序列同一性的氨基酸序列；
[0032]d)多核苷酸序列，其在严谨条件下，优选中等严谨条件下和更优选高等严谨条件下可以与a)或b)或c)中任一项杂交；
[0033]e)多核苷酸序列，其为a)_d)中任一项的活性片段。
[0034]2、第I项的多核苷酸序列，其由SEQ ID No:1_5中任一项所示的多核苷酸序列组成或由编码SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列的多核酸序列组成。
[0035]3、重组载体或核酸构建体，其包含第1-2项任一项的至少一种多核苷酸序列。
[0036]4、一种转基因植物细胞，其包含第3项中的重组载体或核酸构建体。
[0037]5、一种在茄科植物中参与控制种内和种间生殖障碍的蛋白质，其为具有SEQ IDNo:6-10中任一项所示的氨基酸序列的蛋白质，或者是将SEQ ID No:6_10中任一项所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸的取代、缺失或添加且具有与SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列相同的功能的由SEQ ID No:6-10中任一项衍生的蛋白质。
[0038]6、第5项所述的蛋白质，其特征在于:其氨基酸序列为SEQ ID No:6_10中任一项所示。
[0039]7、一种培育消除种内及种间生殖障碍的茄科植物的方法，所述方法包括下述步骤:
[0040](I)将第1-2项所述的任一种多核苷酸序列导入所述茄科植物的细胞中，或者使用第3项的重组载体或核酸构建体转染所述茄科植物的细胞；和
[0041](2)将得到的转基因植物细胞培育成为转基因植株，从而使所得到的转基因植株消除了种内及种间生殖障碍。
[0042]8、第7项的方法，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
[0043]9、一种消除茄科植物种内和种间生殖障碍的方法，所述方法包括在所述茄科植物细胞中导入第1-2项中任一项的至少一种多核苷酸序列或第3项的重组载体或核酸构建体进行过表达的步骤。
[0044]10、第9项的方法，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
[0045]11、第1-2项所述的多核苷酸序列、第3项所述的重组载体或核酸构建体、第4项所述的转基因植物细胞和第5-6项所述的蛋白质在调控茄科植物种内或者种间传粉受精方面的应用。
[0046]12、第1-2项所述的多核苷酸序列、第3项所述的重组载体或核酸构建体、第4项所述的转基因植物细胞或第5-6项所述的蛋白质在消除茄科植物种内或者种间生殖障碍方面的应用。
[0047]13、第11-12项所述的应用，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
[0048]为实现上述目的，本发明的一种优选实施方式步骤如下:
[0049]一、番茄S位点的确定和SLF基因的克隆[0050]本发明利用茄科植物膨大矮牵牛的花粉S因子PiSLF2 (Wang et al.，2004)氨基酸序列在栽培番爺(Solanum Iycopersicum, SI)全基因组数据中进行比对，克隆得到了 5个SlSLF基因，均由于提前终止而丧失功能，而在野生的多毛番茄(Solanumhabrochaites, Sh)中功能正常。这些基因分布在栽培番爺I号染色体长臂靠近着丝粒约1640kb的区域内(图1)。在该区域还发现了一个S-RNase基因，该结果符合SLF基因与S-RNase基因紧密连锁的规律,且与前人对番爺S位点的遗传定位结果一致(Bernacchiand Tanksley, 1997),提示该区域是番爺的S位点。
[0051]二、SLF基因功能的鉴定
[0052]上述的5个SLF基因在栽培番茄中均由于提前终止而失去功能，而在野生的多毛番茄中功能正常。前人的研究发现，SLF基因的不同等位与其对应的S核酸酶连锁。为了验证多毛番茄中的这些ShSLF基因位于S位点，本发明选择其中两个SLF基因对亲本和子代群体进行了 CAPS (cleaved amplified polymorphic sequence)分析。以多毛番爺 ShS1S3和ShS1S5以及它们杂交后得到的31株F1代个体植株的基因组DNA作为模版，对ShSLF2_S5和ShSLFe-S1进行扩增。对于ShSLF2-S5进行CAPS分析，将扩增得到的PCR产物用限制性内切酶TaqI进行酶切检测；对于ShSLFe-S1进行CAPS分析，将扩增得到的PCR产物用限制性内切酶AluI进行酶切检测。酶切后的产物分别用浓度为1.5%或2.5%的琼脂糖凝胶分离，用溴化乙啶染色观察酶切后产生的特异条带。亲本和子代均表现出CAPS标记与S核酸酶连锁的对应关系，提示上述两个SLF基因位于S位点(图4)。
[0053]由于上述ShSLF基因编码的蛋白质(SEQ ID No:6_10)之间的氨基酸序列一致性大约40-70%，我们推测这些基因可能具有相同的功能。之前的报道提示SLF基因编码产物的羧基端(除去氨基端50个氨基酸剩下的部分)可以在酵母中与杂交矮牵牛PhSv-RNase发生相互作用(Qiao et al.，2004)，我们将上述SEQ ID No: 1_5除去起始的150个碱基剩下的序列和PhSv-RNase序`列SEQ ID No:12(图15)构建进入酵母载体，在酵母体内进行了双杂交验证。酵母双杂交结果提示，上述5个ShSLF基因产物的羧基端均可以与PhSv-RNase在酵母中发生相互作用(图14)。
[0054]本发明利用ρΒΙΙΟΙ质粒构建转化载体(图5)，通过转基因技术，将这些功能正常的ShSLF基因转入自交不亲和物种杂交矮牵牛(S单体型为S3S3J中(图6)，自交不亲和性被打破，子代群体均带有转基因(图7和图8)。这一结果提示这些ShSLF基因可能作为花粉因子发挥功能，同时在属间(矮牵牛属和茄属)功能保守。
[0055]三、验证SLF基因是否作为uil.1参与番茄种间单向不亲和性
[0056]为了验证SLF基因是否作为uil.1参与番茄种间单向不亲和性，本发明利用上述携带ShSLF基因的pBI 101载体(图5)，通过转基因技术，将这些功能正常的ShSLF基因转入自交亲和的栽培番茄(图9)。将转基因栽培番茄与ui6.1的栽培番茄渐渗系进行杂交，获得含有功能正常的ShSLF基因和ui6.1的栽培番茄。将该株系作为父本，对自交不亲和的野生番茄进行授粉。授粉后得到的子代均带有转基因(图10)。对子代进行自花授粉，发现与对照栽培番茄花粉相比，子代花粉可以抵达胚珠(图11)。这些结果提示，上述SLF基因(例如ShSLF6)作为uil.1参与控制番茄种间单向不亲和性。
[0057]四、通过打破单向不亲和性进一步利用野生番茄资源
[0058]首先，之前在栽培番茄和野生番茄之间的杂交育种中，栽培番茄只能作为母本。在打破了单向不亲和性后，可以选择野生番茄作为母本进行杂交育种。
[0059]其次，之前在栽培番茄和野生番茄之间的杂交育种中，由于杂种一代自交不亲和(类似于单向不亲和性，即栽培番茄对野生番茄授粉的情况)而无法得到性状强烈分离的杂种二代以及后续世代，导致遗传方式复杂的性状(如一些数量性状)无法得到优选(Bernacchi and Tanksley，1997)。在打破单向不亲和性后，杂种一代自交亲和，使得育种家可以在F2代以及后续分离世代中优选遗传方式复杂的性状，从而更有效地利用野生资源改良栽培品种(图12)。
【专利附图】
【附图说明】
[0060]从下面结合附图的详细描述中，本发明的上述特征和优点将更明显，其中:
[0061]图1、栽培番茄SLF基因的定位:
[0062]左图显示番茄I号染色体，两条横线之间的基因区段为栽培番茄的S位点，位于番茄I号染色体长臂靠近着丝粒的区域；右图显示该基因区段的放大图:在S位点内，黄色箭头(即，最上方的箭头)表示S-RNase基因，蓝色箭头表示提前终止的SLF基因。
[0063]图2、5 个 ShSLF 基因的 DNA 序列:SEQ ID No:1_5。
[0064]图3、5个ShSLF基因编码的氨基酸序列:SEQ ID No:6_10。
[0065]图4、ShSLF 与 ShS-RNase 的连锁分析:
[0066]为了检测ShSLF2和ShSLF6是否与S-RNase连锁，我们对多毛番茄ShS1S5和ShS1S3以及它们杂交得到的F1代群体(31株)进行了 CAPS分析。图a，ShSLF2_S5，ShSLF2-S1和ShSLF2-S3核苷酸序列中TaqI的酶切位点示意图。图b，ShSLF6_S5，ShSLFe-S1和ShSLF6_S3核苷酸序列中AluI的酶切位点示意图。图C，以ShS1S5和ShS1S3基因组DNA为模版，使用引物ShSLF2_F和ShSLF2_R(表1)进行 PCR扩增，得到的产物用TaqI进行酶切，酶切产物在1.5%琼脂糖凝胶中电泳后用溴化乙啶染色后检测。图d，以ShS1S5和ShS3S5基因组DNA为模版，使用引物ShSLF6-F和ShSLF6-R (表1)进行PCR扩增，得到的产物用AluI进行酶切，酶切产物在2.5%琼脂糖凝胶中电泳后用溴化乙啶染色后检测。图e，ShS1S5和ShS1S3杂交产生的31株个体中，14株基因型为S3S5,17株基因型为S1S3，符合1:1的预期分离比(表2)。然后，我们利用该F1代群体，对ShSLF2进行CAPS分析。结果如图所示，ShSLF2_S5的CAPS分析的特异性条带只出现在14株基因型为S3S5的植株中，而在17株基因型为S1S3中则完全检测不到，表明ShSLF2-S5是S5-单倍型特异性的，与ShS5-RNase紧密连锁。随后，我们利用该F1代群体，对ShSLF6进行CAPS分析。结果如图所示，ShSLFe-S1的CAPS分析的特异性条带只出现在17株基因型为S1S3的植株中，而在14株基因型为S3S5中则完全检测不到，表明ShSLFe-S1是S1-单倍型特异性的，与ShS1-RNase紧密连锁。图中W表示用双蒸水代替底物模版进行PCR的阴性对照。
[0067]表1用于同源克隆多毛番爺ShSLF的引物
[0068]
【权利要求】
1.分离的多核苷酸序列，其包含或由选自下组之一的多核苷酸序列组成: a)SEQ ID No:1_5中任一项所不的多核苷酸序列； b)多核苷酸序列，其编码SEQID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列，或编码SEQ IDNo:6-10中任一项所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸但保留SEQID No:6-10的氨基酸序列的功能而得到的氨基酸序列； c)多核苷酸序列，其编码与SEQID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列具有至少60 %的序列同一性，优选至少70 %的序列同一性，优选至少80 %的序列同一性，优选至少90%的序列同一性，优选至少95%的序列同一性和优选至少99%的序列同一性的氨基酸序列； d)多核苷酸序列，其在严谨条件下，优选中等严谨条件下和更优选高等严谨条件下可以与a)或b)或c)中任一项杂交； e)多核苷酸序列，其为a)_d)中任一项的活性片段。
2.权利要求1的多核苷酸序列,其由SEQID No:1_5中任一项所示的多核苷酸序列组成或由编码SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列的多核酸序列组成。
3.重组载体或核酸构建体，其包含权利要求1-2任一项的至少一种多核苷酸序列。
4.一种转基因植物细胞，其包含权利要求3中的重组载体或核酸构建体。
5.—种在茄科植物`中参与控制种内和种间生殖障碍的蛋白质，其为具有SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列的蛋白质，或者是将SEQ ID No:6_10中任一项所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸的取代、缺失或添加且具有与SEQ ID No:6-10中任一项所示的氨基酸序列相同的功能的由SEQ ID No:6-10中任一项衍生的蛋白质。
6.权利要求5所述的蛋白质，其特征在于:其氨基酸序列为SEQID No:6-10中任一项所示。
7.一种培育消除种内及种间生殖障碍的茄科植物的方法，所述方法包括下述步骤: (1)将权利要求1-2所述的任一种多核苷酸序列导入所述茄科植物的细胞中，或者使用权利要求3的重组载体或核酸构建体转染所述茄科植物的细胞；和 (2)将得到的转基因植物细胞培育成为转基因植株，从而使所得到的转基因植株消除了种内及种间生殖障碍。
8.权利要求7的方法，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
9.一种消除茄科植物种内和种间生殖障碍的方法，所述方法包括在所述茄科植物细胞中导入权利要求1-2中任一项的至少一种多核苷酸序列或权利要求3的重组载体或核酸构建体进行过表达的步骤。
10.权利要求9的方法，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
11.权利要求1-2所述的多核苷酸序列、权利要求3所述的重组载体或核酸构建体、权利要求4所述的转基因植物细胞和权利要求5-6所述的蛋白质在调控茄科植物种内或者种间传粉受精方面的应用。
12.权利要求1-2所述的多核苷酸序列、权利要求3所述的重组载体或核酸构建体、权利要求4所述的转基因植物细胞或权利要求5-6所述的蛋白质在消除茄科植物种内或者种间生殖障碍方面的应用。
13.权利要求11-12所述的应用，其中所述茄科植物选自番茄、土豆或烟草。
【文档编号】A01H5/00GK103484474SQ201310426075
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月18日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】薛勇彪, 郭晗, 李群, 张玉娥, 孔昭胜 申请人:中国科学院遗传与发育生物学研究所