东北红豆杉已褐化愈伤组织的去褐化方法
【专利摘要】东北红豆杉已褐化愈伤组织的去褐化方法。即以当年生东北红豆杉的幼嫩茎段或叶片为外植体在发明人研制的培养基上进行愈伤组织的诱导，再依据已发表文献进行东北红豆杉愈伤组织的继代培养，在继代培养的过程中红豆杉的愈伤组织极易发生褐化现象。在发明人研制的东北红豆杉愈伤组织继代培养基上进行培养可以从已褐化的愈伤组织上重新诱导出状态良好的去褐化的东北红豆杉愈伤组织。本发明不仅可以使已褐化东北红豆杉愈伤组织去褐化，而且可以为运用东北红豆杉细胞培养技术生产紫杉醇提供技术支撑。
【专利说明】东北红豆杉已褐化愈伤组织的去褐化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种将已经褐化的东北红豆杉愈伤组织去褐化方法。
【背景技术】
[0002]东北红豆杉，又名紫杉。为红豆杉科乔木植物，是第三纪孑遗的珍贵树种。该种不仅是材用植物，也是重要的药用植物，其茎、枝、叶、根可入药，主要成分含紫杉醇、紫杉碱、双萜类化合物。有抗癌功能，并有抑制糖尿病及治疗心脏病的效用。此外种子还可以榨油等。由于红豆杉属植物生长缓慢，紫杉醇含量较低，仅占枝叶干质量的十万分之一左右。因此随着全球对野生红豆杉资源保护措施的不断加强，利用野生资源生产紫杉醇已无可能，而现阶段人工种植的红豆杉资源量还远远不能满足紫杉醇生产的需求量。
[0003]因此紫杉醇其他途径的开发就显得极为重要，其中利用红豆杉细胞培养技术就是一条重要的途径，一方面可以加强对红豆杉野生种质资源及其生态环境的保护，另一方面可以满足供需间的差距，并且细胞培养繁殖率高，培养条件易于优化和控制，产物较易分离，从长远来看是解决紫杉醇供需矛盾的最佳途径。
【发明内容】
[0004]在东北红豆杉组织继代培养过程中愈伤组织极易发生褐化而难于进行继代培养，为解决此问题，发明人提供了东北红豆杉已褐化愈伤组织的去褐化方法。本发明采用的技术方案是:
[0005]东北红豆杉嫩茎或幼叶愈伤组织诱导、愈伤组织继代培养及褐化愈伤组织的去褐化培养。即以当年生东北红豆杉的嫩茎或幼叶为外植体在发明人配制的诱导培养基上进行培养，诱导出的愈伤组织在前人报道过的东北红豆杉愈伤组织继代培养集中培养，将继代培养中褐化的东北红豆杉愈伤组织再转移到发明人研制的东北红豆杉愈伤组织继代培养基上进行培养。
[0006]所述的东北红豆杉嫩茎或幼叶愈伤组织诱导、继代及褐化愈伤组织的去除方法，具体包括以下步骤:
[0007](I)外植体的消毒
[0008]取当年生东北红豆杉的茎段，进行无菌化处理，获得无菌的东北红豆杉茎段外植体备用；
[0009](2)愈伤组织诱导培养
[0010]将步骤(1)所得的消毒的红豆杉外植体接种于诱导培养基上，控制温度为18-22°C条件下暗培养，15天后得到诱导培养后的愈伤组织；
[0011]所述的诱导培养基的配方，按照每升计算具体为:
【权利要求】
1.东北红豆杉已褐化愈伤组织的去褐化方法，以当年生东北红豆杉的茎段为外植体在诱导培养基上进行培养，最终得到疏松、淡绿色或白色的东北红豆杉茎段愈伤组织； 所述的优质东北红豆杉茎段愈伤组织一步诱导方法，具体包括以下步骤: (1)外植体的消毒 取当年生东北红豆杉的茎段，进行无菌化处理，获得无菌的东北红豆杉茎段外植体备用； (2)愈伤组织诱导培养 将步骤(1)所得的消毒的红豆杉外植体接种于诱导培养基上，控制温度为18-22°C条件下暗培养，15天后得到诱导培养后的愈伤组织； 所述的诱导培养基的配方，按照每升计算具体为:
2.根据权利要求1所述的优质东北红豆杉茎段愈伤组织一步诱导方法，其特征在于:步骤(1)中所述的无菌化处理具体是取当年生东北红豆杉茎段，流水冲洗24小时，然后依次用70-75%的酒精消毒80-120s、0.1%氯化汞消毒10_15min，无菌水冲洗数次，使用无菌滤纸将水分吸干。
【文档编号】A01H4/00GK103563750SQ201310564402
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2013年11月12日 优先权日:2013年11月12日
【发明者】李春斌, 岳玉莲, 刘宝全, 马洪丰, 于鹤, 王德萍 申请人:大连民族学院, 大连市金贵缘科技开发有限公司