一种提高楸树增殖系数的组织培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，其内容包括无菌培养物的建立、腋芽的诱导、腋芽的增殖、芽苗生根培养以及组培苗的栽培5个技术环节。利用本方法进行楸树组织培养快速育苗具有芽诱导率高、增殖系数大、生根率高和移栽成活率高的优点，尤其在本发明中选择出楸树增殖最优培养基配方MS+BA1.5mg/L+ZT0.1mg/L+IAA0.2mg/L，以及继代时连同茎段基部愈伤一起继代的继代方法，使楸树增值系数为11.0-23.2，平均增殖系数达15.3。该方法可以为林业生产中楸树的大规模栽培提供一种繁殖速度快、生产周期短、稳定性好的育苗方法。
【专利说明】一种提高楸树增殖系数的组织培养方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种提高楸树增殖系数的组织培养方法。
【背景技术】
[0002] 楸树（Catalpa bungei)为紫葳科（Bignoniaceae)梓属（Catalpa)高大乔木，原产 中国，已有两千多年的栽培历史。楸树树体高大挺拔，树冠浓密，枝、叶和花都具有很高的观 赏价值，其木材质地坚韧致密，不易虫蛀、耐磨、耐腐、隔潮，具有极高的经济价值，在中国丰 富的树木资源中，惟其"材"貌双全，自古素有"木王"之美称。楸树的适应性强，是可以大 面积栽培的优良珍贵的用材树种。'豫楸1号'树皮光滑不开裂、树干通直圆满，花期较长， 它除了具有传统楸树的特点以外，还具有较强的速生性，是目前楸树中珍稀良种。
[0003] 关于楸树的组培研究多有报道，但因增殖系数较低，组培苗生根困难等因素，严 重影响了楸树无性体系建立的效率。于永明等（于永明，王军辉，马建伟，张宋智，李平 英，韩云花，魏秀琴.楸树无性系离体培养特性差异研究.西北植物学报，2012, 32(1): 0199-0204)利用 DKW+1. 0mg/L6-BA+0. 2mg/LIBA+25g/L 蔗糖 +4. 5g/L 琼脂（ρΗ5· 8)的培养 基获得楸树增值系数为4. 0-10. 7。由该实验结果可以发现楸树的组培苗的增值系数偏低， 为了促进楸树的大面积推广，必须提高组培苗的增值系数。因此为了解决楸树生产中存在 的实际问题，本发明通过大量的实验，不断优化培养基激素组合，旨在发明楸树最佳组织培 养增殖快繁方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种提高楸树增殖系数的组织培养方法。
[0005] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0006] (1)无菌培养物的建立
[0007] 选取当年生楸树新发嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成1. 0?1. 5cm长带有腋芽的茎 段，将带芽茎段用洗衣粉上清液浸泡30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min ;在 超净工作台上，用75%乙醇浸泡30s,无菌水冲洗2次,然后用0. 1 %的氯化萊处理8min,用 无菌水冲洗6次，获得无菌外植体。
[0008] ⑵芽苗的诱导
[0009] 将获得的无菌带芽茎段接种到诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，诱导培养基 为MS基本培养基，加入0. 05?0. 3mg/L的IBA，0. 2?1. Omg/L的BA，以及30g/L的蔗糖和 7g/L的琼脂，调节培养基pH为6. 0。
[0010] ⑶芽苗的增殖
[0011] 待外植体腋芽诱导30d后，把上述诱导的腋芽转移到增殖培养基进行扩繁增殖， 增殖培养基为MS基本培养基，加入1. 5mg/L的BA，0· lmg/L的ZT，0· 2mg/L的IAA，以及30g/ L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6. 0 ;每20d在原培养基上继代一次，继代时，将 茎段基部愈伤一起继代。
[0012] (4)芽苗生根培养
[0013] 选取步骤（3)中增殖的2?3cm长的芽苗转移到生根培养基中，生根培养基为 1/2MS基本培养基，附加0. 01?0. 05mg/L的NAA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节 培养基pH为6.0。
[0014] (5)炼苗与移栽
[0015] 移栽前，把增殖获得的生根苗在培养架上拧开盖子放置7d炼苗，炼苗后取出生根 组培苗，洗净根上滞留的琼脂培养基后移入营养土（泥炭土：珍珠岩=1 : 1)中培养，喷 雾每天8:00?19:00隔30min喷水15s，控制环境湿度为80?90%，等小苗有新叶长出后， 逐渐降低环境湿度，按常规苗圃育苗措施管理。
【专利附图】
【附图说明】
[0016] 图1 :楸树芽苗的增殖培养
【具体实施方式】：
[0017] (1)无菌培养物的建立
[0018] 选取当年生楸树新发嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成1. 0?1. 5cm长带有腋芽的茎 段，将带芽茎段用洗衣粉上清液浸泡30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min ;在 超净工作台上，用75%乙醇浸泡30s,无菌水冲洗2次,然后用0. 1 %的氯化萊处理8min,用 无菌水冲洗6次，获得无菌外植体。
[0019] ⑵芽苗的诱导
[0020] 将获得的无菌带芽茎段接种到诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，诱导培养基 为MS基本培养基，加入0. 05?0. 3mg/L的IBA，0. 2?1. Omg/L的BA，以及30g/L的蔗糖和 7g/L的琼脂，调节培养基pH为6. 0。培养基激素组合设计及其对应的腋芽诱导率如表1所 示，其中培养基中加入〇. 8mg/L6-BA和0. lmg/L IBA时，外植体腋芽诱导率最高为96. 3%。 每个处理接种10瓶，每瓶接种1个无菌茎段，3次重复
[0021] 表1不同的激素组合对腋芽诱导的影响
[0022]
【权利要求】
1. 一种提高楸树增殖系数的组织培养方法，其包括如下步骤： (1) 无菌培养物的建立 选取当年生楸树新发嫩梢，剪去叶片和叶柄，切割成3?5cm长带有腋芽的茎段，将带 芽茎段用洗衣粉上清液浸泡30min，用软刷刷洗节段后再置流水下冲洗30min ;在超净工作 台上，用75%乙醇浸泡30s,无菌水冲洗2次,然后用0. 1 %的氯化萊处理8min,用无菌水冲 洗6次，获得无菌外植体。 (2) 腋芽的诱导 将获得的无菌带芽茎段接种到诱导培养基上促进腋芽的萌发和生长，诱导培养基为MS 基本培养基，加入0. 05?0. 3mg/L的IBA，0. 2?1. Omg/L的BA，以及30g/L的蔗糖和7g/L 的琼脂，调节培养基pH为6. 0。 (3) 腋芽的增殖 待外植体腋芽诱导30d后，把上述诱导的腋芽转移到增殖培养基进行扩繁增殖，增殖 培养基为MS基本培养基，加入1. 5?6mg/L的BA，0. 1?0. 3mg/L的ZT，0. 2mg/L的IM，以 及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基pH为6. 0 ; 每20d在原培养基上继代一次，继代时，将茎段基部愈伤一起继代。 (4) 芽苗生根培养 选取步骤（3)中增殖的2?3cm长的芽苗转移到生根培养基中，生根培养基为1/2MS 基本培养基，附加0. 01?0. 05mg/L的NAA，以及30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂，调节培养基 pH 为 6.0。 (5) 炼苗与移栽 移栽前，把增殖获得的生根苗在培养架上拧开盖子放置7d炼苗，炼苗后取出生根组培 苗，洗净根上滞留的琼脂培养基后移入营养土（泥炭土：珍珠岩=1 : 1)中培养，喷雾每 天8:00?19:00隔30min喷水15s，控制环境湿度为80?90%，等小苗有新叶长出后，逐 渐降低环境湿度，按常规苗圃育苗措施管理。
2. 根据权利要求1所述的育苗方法，步骤（3)所述腋芽增殖培养基优选为MS基本培养 基，附加1. 5mg/L的BA，0. lmg/L的ZT，0. 2mg/L的IAA，以及30g/L的鹿糖和7g/L的琼脂， 调节培养基pH为6.0。
3. 根据权利要求1所述的育苗方法，步骤（3)所述腋芽在增殖诱导过程中，每20d在原 培养基上继代一次，继代时连同茎段基部膨大生成的愈伤一起转接，继代3次后增殖效果 最好。
【文档编号】A01H4/00GK104054580SQ201410327693
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2014年7月8日 优先权日:2014年7月8日
【发明者】王鹏, 杨如同, 李亚, 马玲玲, 汪庆, 李林芳 申请人:江苏省中国科学院植物研究所