一种畜禽场用微生物消毒剂及其制备方法与应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种畜禽场用微生物消毒剂及其制备方法与应用。该畜禽场用微生物消毒剂，组分如下，均为体积份：短小芽孢杆菌发酵液1～3份，多粘类芽孢杆菌发酵液1～3份，水25～50份；本发明还涉及该畜禽场用微生物消毒剂的制备方法与应用。本发明采用短小芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌作为主要抑制或杀灭有害病原菌的微生物菌株，二者在菌种的优势生长及代谢物中的多种抗菌物质及酶类等方面均在抑制或杀灭有害菌方面具有协同作用，从而大大提高了灭菌效果。
【专利说明】-种畜禽场用微生物消毒剂及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种畜禽场用微生物消毒剂及其制备方法与应用，属于畜牧消毒剂技 术领域。
【背景技术】
[0002] 在全球范围内，对于畜禽养殖业，病原微生物引起的损失是巨大的，目前，畜禽场 的环境消毒工作主要采用化学方法，消毒剂，如楓制剂、氯制剂、甲酵等，经喷、洒、熏蒸等途 径，被用来进行环境消毒，该类方法对确保畜禽场的环境安全起着重要作用，但是，该类方 法中一些消毒剂本身有一定的危害性，并且还有残留问题，随着人们对食品安全的日益重 视，化学消毒剂的使用受到越来越严厉的限制。
[000引 中国专利文献CN103190449A(申请号201310133696. 0)公开了一种枯草芽抱杆菌 畜禽场用微生物空气消毒剂，采用如下方法制备：（1)将枯草芽抱杆菌接种于液体培养基 中进行活化培养至对数生长期，制得活化菌体；（2)将活化菌体接种于液体发酵培养基中， 发酵培养，制得微生物发酵液；（3)将微生物发酵液经喷雾干燥，制得微生物消毒剂。
[0004] 上述微生物消毒剂因其具有对人畜安全，环境污染少，易降解，防治对象针对性强 等特点，逐渐得到了人们的青睐，但由于微生物消毒剂菌种及其代谢物中多种抗菌物质及 酶类等多种因素对有害菌的作用方向并不一致，因而，抑制病原微生物的复合微生物消毒 剂的杀菌范围更加广泛，为微生物消毒剂的广泛应用打下基础。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术中的不足，提供一种畜禽场用微生物消毒剂的制备方法与应 用。该微生物消毒剂可有效抑制大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌等畜禽养殖场常见致病菌，实 现安全可靠、效益良好的技术效果。
[0006] 本发明采用的技术方案如下：
[0007] -种畜禽场用微生物消毒剂，组分如下，均为体积份：
[000引短小芽抱杆菌发酵液1?3份，多粘类芽抱杆菌发酵液1?3份，水25?50份；
[0009] 所述短小芽抱杆菌发酵液菌体浓度不低于1. 0X 1〇8个/毫升；
[0010] 多粘类芽抱杆菌发酵液菌体浓度不低于0. 5 X 1〇8个/毫升；
[0011] 所述畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质的含量不低于0. 2毫克/毫升。
[0012] 抗菌物质是多种物质的总称，W脂肤类为主，可W通过抑菌圈大小来检测活性：即 在均匀涂布致病菌的平板上，放置0. 8cm灭过菌的滤纸片，在滤纸片上滴加15 y L的活性样 品，并W无菌水为对照，37C培养2化后观察抑菌圈大小。抗菌物质的含量检测可采用本 领域脂肤类物质的常规提取方法，如有机溶剂提取法等。
[0013] 根据本发明优选的，所述短小芽抱杆菌来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普 通微生物中也（CGMCC)，菌种编号为1. 937的短小芽抱杆菌。
[0014] 根据本发明优选的，所述多粘类芽抱杆菌来源于中国微生物菌种保藏管理委员会 普通微生物中也（CGMCC)，菌种编号为1. 224的多粘类芽抱杆菌。
[0015] 上述畜禽场用微生物消毒剂的制备方法，步骤如下：
[0016] (1)将短小芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活 化菌体I ;
[0017] 将制得的活化菌体I按体积百分比3?5%接种于液体发酵培养基II中，在25? 35C下，发酵培养36?48小时，制得短小芽抱杆菌发酵液；
[0018] (2)将多粘类芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得 活化菌体I ;
[0019] 将制得的活化菌体I按体积百分比3?5%接种于液体发酵培养基HI中，在25? 35C下，发酵培养36?48小时，制得多粘类芽抱杆菌发酵液；
[0020] (3)将步骤（1)制得的短小芽抱杆菌发酵液与步骤（2)制得的多粘类芽抱杆菌发 酵液按比例混合，制得畜禽场用微生物消毒剂。
[0021] 根据本发明优选的，所述步骤（1)中的液体培养基I组分如下，均为重量百分比：
[0022] 酵母膏0.5?1.5%，蛋白腺0.7?1%，氯化轴0.5?1.2%，葡萄糖0.5?2%， pH7. 0 ?7. 2。
[0023] 根据本发明优选的，所述步骤（1)中的活化培养条件为：将斜面保存的菌种接种 于液体培养基中，25?35C，180转/分振荡培养12?18小时，即为活化菌体；
[0024] 根据本发明优选的，所述步骤（2)中液体发酵培养基II组分如下，均为重量百分 比：
[00巧]蛋白腺1 %，玉米粉2 %，豆稍0. 5 %，磯酸二氨钟0. 7 %，硫酸镇0. 05 %，葡萄糖 0. 5%，pH7. 0 ?7. 2。
[0026] 根据本发明优选的，所述步骤（3)中的液体培养基III组分如下，均为重量百分 比：
[0027] 葡萄糖0.5%，蛋白腺0.7?1%，氯化轴0.5?1.2%，豆稍1%，玉米浆0.5%，磯 酸二氨钟0. 1 %，硫酸镇0. 03 %，碳酸巧0. 1 %，P册.5。
[0028] 上述畜禽场用微生物消毒剂在畜禽场消毒中的应用。
[0029] 上述应用，步骤如下：
[0030] 将畜禽场用微生物消毒剂喷施于待消毒的畜禽场设施表面，喷施用量为10? 20ml/M 3,作用1小时W上即可，消毒频率为10?15天/次。
[0031] 有益效果
[0032] 1、本发明采用短小芽抱杆菌、多粘芽抱杆菌作为主要抑制或杀灭有害病原菌的微 生物菌株，二者在菌种的优势生长及代谢物中的多种抗菌物质及酶类等方面均在抑制或杀 灭有害菌方面具有协同作用，从而大大提高了灭菌效果。
[0033] 2、本发明所述的畜禽场用微生物消毒剂，在畜禽场的消毒效果方面具有安全无残 留、效果稳定的优点。
【专利附图】
【附图说明】
[0034] 图1为实施例1制得的畜禽场用微生物消毒剂的抑菌圈实验结果；
【具体实施方式】
[0035] 下面结合实施例对本发明的技术方案做进一步说明，但本发明所保护范围不限于 此。
[0036] 实施例中检测畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质活性的方法如下；即在均匀涂布 致病菌的平板上，放置0. 8cm灭过菌的滤纸片，在滤纸片上滴加15 y L的活性样品，并W无 菌水为对照，37C培养2化后观察抑菌圈大小。实施例中抗菌物质（脂肤类物质）的检测 采用有机溶剂提取法。
[0037] 实施例中所述短小芽抱杆菌来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中也（CGMCC)，菌种编号为1. 937的短小芽抱杆菌；所述多粘类芽抱杆菌来源于中国微生物 菌种保藏管理委员会普通微生物中也（CGMCC)，菌种编号为1. 224的多粘类芽抱杆菌。
[0038] 实施例1
[0039] 上述畜禽场用微生物消毒剂的制备方法，步骤如下：
[0040] (1)将短小芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活 化菌体I ;
[0041] 将制得的活化菌体I按体积百分比3%接种于液体发酵培养基II中，在35C下， 发酵培养48小时，制得短小芽抱杆菌发酵液；经检测，所述短小芽抱杆菌发酵液菌体浓度 为3. 2X109个/毫升。
[0042] (2)将多粘类芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得 活化菌体I ;
[0043] 将制得的活化菌体I按体积百分比3%接种于液体发酵培养基III中，在35C下， 发酵培养48小时，制得多粘类芽抱杆菌发酵液；经检测，所述多粘类芽抱杆菌发酵液菌体 浓度为1. 8X 1〇9个/毫升。
[0044] (3)将步骤（1)制得的短小芽抱杆菌发酵液与步骤（2)制得的多粘类芽抱杆菌发 酵液和水按体积比1 ;1 ;30的比例混合，制得畜禽场用微生物消毒剂。
[0045] 所述步骤（1)中的液体培养基I组分如下，均为重量百分比：
[0046] 酵母膏0. 5%，蛋白腺1%，氯化轴1%，葡萄糖2%，余量水，PH7.0。
[0047] 所述步骤（1)中的活化培养条件为；将斜面保存的菌种接种于液体培养基中， 25°C，180转/分振荡培养18小时，即为活化菌体；
[0048] 所述步骤（2)中液体发酵培养基II组分如下，均为重量百分比：
[0049] 蛋白腺1 %，玉米粉2 %，豆稍0. 5 %，磯酸二氨钟0. 7 %，硫酸镇0. 05 %，葡萄糖 0. 5%，余量水，pH7. 0。
[0050] 所述步骤（3)中的液体培养基III组分如下，均为重量百分比：
[0051] 葡萄糖0.5%，蛋白腺1%，氯化轴1.2%，豆稍1%，玉米浆0.5%，磯酸二氨钟 0. 1%，硫酸镇0.03%，碳酸巧0. 1%，余量水，P册.5。
[0052] 经检测，所述畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质的含量为0. 23毫克/毫升。
[0053] 取上述制得的畜禽场用微生物消毒剂对致病菌进行抑菌圈实验，结果如图1所 /J、- 〇
[0054] 实施例2
[00巧]上述畜禽场用微生物消毒剂的制备方法，步骤如下：
[0056] (1)将短小芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活 化菌体I ;
[0057] 将制得的活化菌体I按体积百分比5%接种于液体发酵培养基II中，在35C下， 发酵培养36小时，制得短小芽抱杆菌发酵液；经检测，所述短小芽抱杆菌发酵液菌体浓度 为3. 5X109个/毫升。
[0058] (2)将多粘类芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得 活化菌体I ;
[0059] 将制得的活化菌体I按体积百分比5%接种于液体发酵培养基III中，在35C下， 发酵培养36小时，制得多粘类芽抱杆菌发酵液；经检测，所述多粘类芽抱杆菌发酵液菌体 浓度为2. 1 X 109个/毫升。
[0060] (3)将步骤（1)制得的短小芽抱杆菌发酵液与步骤（2)制得的多粘类芽抱杆菌发 酵液与按体积比3 ;2 ;50的比例混合，制得畜禽场用微生物消毒剂。
[0061] 所述步骤（1)中的液体培养基I组分如下，均为重量百分比：
[006引酵母膏1. 5 %，蛋白腺0. 7 %，氯化轴0. 5 %，葡萄糖0. 5 %，余量水，pH7. 2。
[0063] 所述步骤（1)中的活化培养条件为；将斜面保存的菌种接种于液体培养基中， 35°C，180转/分振荡培养12小时，即为活化菌体；
[0064] 所述步骤（2)中液体发酵培养基II组分如下，均为重量百分比：
[0065] 蛋白腺1 %，玉米粉2 %，豆稍0. 5 %，磯酸二氨钟0. 7 %，硫酸镇0. 05 %，葡萄糖 0. 5%，余量水，pH7. 2。
[0066] 所述步骤（3)中的液体培养基III组分如下，均为重量百分比：
[0067] 葡萄糖0. 5 %，蛋白腺0. 7 %，氯化轴0. 5 %，豆稍1 %，玉米浆0. 5 %，磯酸二氨钟 0. 1%，硫酸镇0.03%，碳酸巧0. 1%，余量水，P册.5。
[006引经检测，所述畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质的含量为0. 3毫克/毫升。
[006引 实施例3
[0070] 上述畜禽场用微生物消毒剂的制备方法，步骤如下：
[0071] (1)将短小芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活 化菌体I;
[0072] 将制得的活化菌体I按体积百分比4%接种于液体发酵培养基II中，在3(TC下， 发酵培养40小时，制得短小芽抱杆菌发酵液；经检测，所述短小芽抱杆菌发酵液菌体浓度 为3. IX 1〇9个/毫升。
[0073] (2)将多粘类芽抱杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得 活化菌体I ;
[0074] 将制得的活化菌体I按体积百分比4%接种于液体发酵培养基III中，在3(TC下， 发酵培养40小时，制得多粘类芽抱杆菌发酵液；经检测，所述多粘类芽抱杆菌发酵液菌体 浓度为1.5Xl〇9个/毫升。
[0075] (3)将步骤（1)制得的短小芽抱杆菌发酵液与步骤（2)制得的多粘类芽抱杆菌发 酵液与水按体积比2 ;3 ;40的比例混合，制得畜禽场用微生物消毒剂。
[0076] 所述步骤（1)中的液体培养基I组分如下，均为重量百分比：
[0077] 酵母膏1.0%，蛋白腺0.9%，氯化轴0.8%，葡萄糖1.5%，余量水，pH7. 1。
[0078] 所述步骤（1)中的活化培养条件为；将斜面保存的菌种接种于液体培养基中， 3(TC，180转/分振荡培养16小时，即为活化菌体；
[0079] 所述步骤（2)中液体发酵培养基II组分如下，均为重量百分比：
[0080] 蛋白腺1 %，玉米粉2 %，豆稍0. 5 %，磯酸二氨钟0. 7 %，硫酸镇0. 05 %，葡萄糖 0. 5%，余量水，pH7. 2。
[0081] 所述步骤（3)中的液体培养基III组分如下，均为重量百分比：
[008引葡萄糖0. 5 %，蛋白腺0. 8 %，氯化轴0. 9 %，豆稍1 %，玉米浆0. 5 %，磯酸二氨钟 0. 1%，硫酸镇0.03%，碳酸巧0. 1%，余量水，P册.5。
[0083] 经检测，所述畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质的含量为0. 32毫克/毫升。
[0084] 试验例
[00财将14米宽、长150米长的禽舍A、B、C、D、E四栋，每栋饲养肉鸡10000余化A、B、C 栋为试验组，D、E栋为对照组，按照喷洒量为20ml/M3,对A栋鸡舍每15天喷洒实施例1制得 的畜禽场用微生物消毒剂进行消毒一次，消毒后24小时，测定粪便与环境中的病原微生物 量；对B栋鸡舍每15天喷洒实施例2制得的畜禽场用微生物消毒剂进行消毒一次，消毒后 24小时，测定粪便与环境中的病原微生物量；对C栋鸡舍每15天喷洒实施例3制得的畜禽 场用微生物消毒剂进行消毒一次，消毒后24小时，测定粪便与环境中的病原微生物量；对D 栋鸡舍每15天喷洒无菌发酵培养液一次，消毒后24小时，测定粪便与环境中的病原微生物 量；对E栋鸡舍每15天喷洒实施例1制得的短小芽抱杆菌发酵液进行消毒一次，消毒后24 小时，测定粪便与环境中的病原微生物量。
[0086] 检测方法采用平板计数方法。
[0087] 检测结果如表1所示，W D栋中病原微生物的量为100%。
[0088] 表 1
[0089]
【权利要求】
1. 一种畜禽场用微生物消毒剂，其特征在于，组分如下，均为体积份： 短小芽孢杆菌发酵液1?3份，多粘类芽孢杆菌发酵液1?3份，水25?50份； 所述短小芽孢杆菌发酵液菌体浓度不低于1. 〇 X 108个/毫升； 多粘类芽孢杆菌发酵液菌体浓度不低于〇. 5 X 108个/毫升； 所述畜禽场用微生物消毒剂中抗菌物质的含量不低于〇. 2毫克/毫升。
2. 如权利要求1所述的畜禽场用微生物消毒剂，其特征在于，所述短小芽孢杆菌来源 于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号为1.937的短小芽孢杆菌。
3. 如权利要求1所述的畜禽场用微生物消毒剂，其特征在于，所述多粘类芽孢杆菌来 源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号为1. 224的多粘类芽孢杆 菌。
4. 权利要求1所述的畜禽场用微生物消毒剂的制备方法，其特征在于，步骤如下： (1) 将短小芽孢杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活化菌 体I ; 将制得的活化菌体I按体积百分比3?5%接种于液体发酵培养基II中，在25?35°C 下，发酵培养36?48小时，制得短小芽孢杆菌发酵液； (2) 将多粘类芽孢杆菌接种于液体培养基I中进行活化培养至对数生长期，制得活化 菌体I ; 将制得的活化菌体I按体积百分比3?5%接种于液体发酵培养基III中，在25? 35°C下，发酵培养36?48小时，制得多粘类芽孢杆菌发酵液； (3) 将步骤（1)制得的短小芽孢杆菌发酵液与步骤（2)制得的多粘类芽孢杆菌发酵液 按比例混合，制得畜禽场用微生物消毒剂。
5. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中的液体培养基I组分如 下，均为重量百分比： 酵母膏0.5?1.5%，蛋白胨0.7?1%，氯化钠0.5?1.2%，葡萄糖0.5?2%， pH7. 0 ?7. 2。
6. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中的活化培养条件为：将 斜面保存的菌种接种于液体培养基中，25?35°C，180转/分振荡培养12?18小时，即为 活化菌体。
7. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2)中液体发酵培养基II组 分如下，均为重量百分比： 蛋白胨1 %，玉米粉2 %，豆柏0. 5 %，磷酸二氢钾0. 7 %，硫酸镁0. 05 %，葡萄糖0. 5 %， pH7. 0 ?7. 2。
8. 如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3)中的液体培养基III组分 如下，均为重量百分比： 葡萄糖0.5%，蛋白胨0.7?1%，氯化钠0.5?1.2%，豆柏1%，玉米浆0.5%，磷酸二 氢钾0? 1%，硫酸镁0.03%，碳酸钙0? l%，pH6.5。
9. 权利要求1所述畜禽场用微生物消毒剂在畜禽场消毒中的应用。
10. 如权利要求9所述的应用，其特征在于，步骤如下： 将畜禽场用微生物消毒剂喷施于待消毒的畜禽场设施表面，喷施用量为10?20ml/M3， 作用1小时以上即可，消毒频率为10?15天/次。
【文档编号】A01P1/00GK104397036SQ201410534150
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年10月11日 优先权日:2014年10月11日
【发明者】楚杰, 刘可春, 何秋霞, 王雪, 韩利文, 韩建, 郭刚 申请人:山东省科学院生物研究所