一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法
【专利摘要】本发明公开了一种河川沙塘鳢定向交配和家系培育的方法，包括以下步骤：一)亲本的选择及暂养，二)亲本的定向配组及强化培育，三)亲鱼的产卵和受精卵孵化，四)家系的仔、稚和幼鱼培育，五)家系后期培育及池塘养殖。本发明方法设计合理，可操作性强，通过对河川沙塘鳢家系建立及早期生长比较的研究，为进行大规模家系构建和选育奠定了基础，有助于选育具有生长快速等优良生长性状的新品种，改变现有情况下苗种只能靠从天然水域捕捞或者是依靠上一年养殖的留塘河川沙塘鳢进行自繁自育和累代繁育的状况，形成系统的河川沙塘鳢良种保持和选育技术体系。
【专利说明】-种巧川沙塘禮定向交配及家系培育的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及淡水鱼育种【技术领域】，具体涉及一种控制河川沙塘體定向交配和家系 培育的方法。
【背景技术】
[0002] 河川沙塘體（Odontobutis potamo地ila)属妒形目（Perciformes)，沙塘體科 (Odontobutidae)，沙塘體属（Odontobutis)，俗称；虎头蠻、虎头呆子等。在我国广泛分布 于长江中下游、钱塘江、闽江等水系，属中国特有种。该鱼为淡水底栖小型肉食性鱼类，肉质 细嫩，系餐桌名肴。近些年，由于自然水域的污染加剧，河川沙塘體的生存环境不断恶化， 产卵环境屡遭破坏，其野生资源急剧衰退，部分地区已难觅踪迹。目前该鱼主要靠捕揚供 应市场，但远不能满足需求，价格不断攀升，已发展成为一个非常具有潜力的水产养殖新品 种。全国各地已经零星开展了河川沙塘體养殖，但仍W混养、套养为主，主养面积小，产量总 体水平很低，远不能满足市场的需求。目前用于人工养殖的河川沙塘體苗种主要是捕自天 然水域或者是依靠上一年养殖的留塘河川沙塘體进行自繁自育和累代繁育，苗种的生长速 度、抗病能力和其它养殖性能等还未达到良种化的程度，良种问题已成为制约河川沙塘體 养殖业稳定发展的主要"瓶颈"之一。因此，对河川沙塘體进行遗传改良，选育出具有生长 快速等优良生长性状的新品系，是保障河川沙塘體养殖业可持续发展的必要条件。
[0003] 家系选育是选择育种中最常用的方法之一，它是指在相同或相近的环境条件下， 建立若干个家系，并对各家系进行比较和观察，W整个家系作为一个选择单位，其选择标准 为家系被选择性状的平均值，家系平均值高则家系内所有成员留作种用，家系均值低则全 部淘汰，由此逐代提高品种的遗传纯合性，即能选出具有稳定优良性状的新品种。现在已经 有不少关于家系构建方法及生长比较的研究，如Garber等对大西洋婚鱼73个全同胞和半 同胞家系的生存、生长性状进行了比较研究；田永胜等建立了 63个牙解家系并对其生长性 能进行了测定和比较分析，最终筛选出8个生长快速的家系；马爱军等采用巢式设计方法 和人工采卵授精技术，对大菱解大规模家系的构建与培育技术进行了研究；目前将家系选 育运用于河川沙塘體的良种选育尚处于起步阶段。
[0004] 由此可见，进行一个物种的家系选育首先要解决该物种家系构建的技术，而物种 不同相应的构建方法也会存在差异，同时家系也是进行遗传分析的重要材料，对于深入分 析不同亲本的遗传背景和构建遗传连锁图谱十分重要。由于河川沙塘體苗种培育的特殊 性，有关河川沙塘體家系建立和选育的研究尚未见报道，本专利首次发明了河川沙塘體定 向交配及家系培育的方法，W期为河川沙塘體大规模家系选育奠定基础。
【发明内容】
[0005] 针对现有技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种河川沙塘體定向交配及家 系培育的方法，通过W下技术方案加W实现：
[0006] 所述的一种河川沙塘體定向交配及家系培育的方法，其特征在于包括W下步骤：
[0007] 一）亲本的选择及暂养
[0008] 有针对性的选取来源我国不同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较 强的健康雌、雄河川沙塘體作为繁殖亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准 备好的亲鱼培养池内进行暂养，放养密度为30尾/m2,培育期间亲鱼巧料为慷邮和青邮。
[0009] 二）亲本的定向配组及强化培育
[0010] 采用定向交尾法进行配组，不同地理群体间河川沙塘體亲鱼两两组合可获得若干 个不同的组合配对，将对应的雌雄个体一雄一雌单独放入室内培育缸内，进行自然交配，培 育缸底内放入一个两个半圆柱形瓦片对接形成的圆柱形产卵巢，所用的长度20?25cm，内 径为10?15cm。水温维持在25 + rC，保持定向配组期间处于较暗的光线及安静的环境下， 强化培育期间亲鱼巧料为青邮和麦穗鱼。
[0011] H)亲鱼的产卵和受精卵赔化
[0012] 每天检查产卵巢的情况，待雌雄交配完成后，发现雌鱼在产卵巢外，雄鱼在产卵巢 内进行护巢时，将雌鱼和巧料从培育缸移出，雄鱼护巢直至仔鱼出膜，期间赔化水温维持在 25+rc。待仔鱼全部出膜后，将雄鱼也移出培育缸。
[0013] 四）家系的仔、稚和幼鱼培育
[0014] 将家系苗种培育分为3个阶段：出膜到苗种规格1. 5cm之间为第一阶段，1. 5cm到 3cm之间为第二阶段，3cm W上为第H阶段。整个阶段期间为了最大限度的减少循环水流对 鱼苗的影响，培育缸中放置2到3个亲鱼产卵时所用的瓦片，给鱼苗提供一个躲避水流的场 所，同时也增大了鱼苗的栖息面积，并投入田螺，可起到消除残巧净化水质的作用，整个苗 种培育过程中定期加入益生菌和聚维丽楓。
[0015] 1)第一阶段；使用人工赔化的丰年虫开口并培育，日投喂H次，投喂密度为3?5 个/mU每天吸污一次；待家系育苗的平均规格到达1. 5cm时进入第二阶段。
[0016] 2)第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘體幼苗随机选 取300尾投入新的培育桶中继续培育，并放置瓦片和人工水草，供幼鱼躲避和栖息，此阶段 第一个星期采用丰年虫和水祀蝴混合投喂，丰年虫投喂密度为1?3个/mU水祀蝴投喂情 况视吃食情况而定，一星期后全部投喂水祀蝴，期间水温为25+rc，每天吸污一次。
[0017] 3)第H阶段；待家系鱼苗的规格达到3cm时进入第H阶段，此时开始投喂赤眼轉 幼苗至培育结束。期间水温为常温，每两天吸污一次。
[0018] 五）家系后期培育
[0019] 第二阶段中各个家系的河川沙塘體幼苗随机选取300尾投入到新的培育桶中，进 行标准化养殖和生长对比试验，期间每隔45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通 过数据分析和处理，挑选出生长快速的优秀家系。将分析所得的优秀家系进行不同的英光 标记处理，放入事先准备好的池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶段，进行新一轮的 配组、赔化、育苗，继续进行家系选育。
[0020] 所述的一种河川沙塘體定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤一）和 步骤二）中青邮和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm W内，数量一直保证在亲鱼数3倍W上， 及时添补巧料。
[0021] 所述的一种河川沙塘體定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四）中 培育缸中放置的半圆柱形瓦片为2到3个，所用的长度20?25畑1，内径为10?15畑1，同时 投入田螺10只。
[0022] 所述的一种河川沙塘體定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤四）中 第一阶段投喂巧料为丰年虫，投喂密度为3?5个/mU每天投喂H次，第二阶段和第H阶段 为水祀蝴和赤眼轉幼苗，一直保证足量，及时添加。浸泡水祀蝴的盐水浓度为7%。，加入的± 霉素浓度和硫離沙星浓度为分别为化pm和Ippm。
[0023] 所述的一种河川沙塘體定向交配及家系培育的方法，其特征在于所述步骤五）中 标准化养殖是指将河川沙塘體幼苗放养于80化的培育桶中，常温，水位保持60?70cm，放 养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，W供幼鱼躲避和栖息， 前期喂食水祀蝴，3cm后喂食赤眼轉幼苗，一直保证足量，不间断充气和循环水，每天吸污一 次。
[0024] 本发明方法设计合理，可操作性强，通过对河川沙塘體家系建立及早期生长比较 的研究，为进行大规模家系构建和选育奠定了基础，有助于选育具有生长快速等优良生长 性状的新品种，改变现有情况下苗种只能靠从天然水域捕揚或者是依靠上一年养殖的留塘 河川沙塘體进行自繁自育和累代繁育的状况，形成系统的河川沙塘體良种保持和选育技术 体系。
【具体实施方式】
[0025] 通过W下具体实例对本发明作进一步详述，具体参数为说明本发明技术方案所 需，不应理解为对本发明保护范围的限制。
[0026] 2014年3月5日至15日，有针对性的选取来源于浙江建德新安江流域、安徽当涂 县运粮河段、江苏射阳镇宋径河流域、江苏苏州太湖东西山侧等4个不同地理群体健康的 雌、雄河川沙塘體作为繁殖亲本，在南京市水产科学研究所禄口基地的实验室内进行了河 川沙塘體定向交配及家系培育的工作，具体内容如下：
[0027] 一）亲本的选择及暂养
[0028] 河川沙塘體的基础群体来源于浙江建德新安江流域、安徽当涂县运粮河段、江苏 射阳镇宋径河流域、江苏苏州太湖东西山侧等4个不同地理群体，有针对性的选取来源不 同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较强的健康雌、雄河川沙塘體作为繁殖 亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准备好的亲鱼培养池内进行强化培育， 培养池的规格为2. 5mXl. 5mX0. 6m，水深40cm，放养密度为30尾/m2,水温15-20°C，循环 微流水和充气，水流为lOL/min，培育期间亲鱼巧料为慷邮和青邮，慷邮和青邮为活体，体长 规格在5cm W内，数量一直保证在亲鱼数量3倍W上，及时添补巧料。
[0029] 二）亲本的定向配组及强化培育
[0030] 于2014年3月中旬采用定向交尾法进行配组，4个不同地理群体间两两组合可得 16个不同的组合，每个组合设置3个平行，共配组48个，按照每个组合将对应的雌雄个体一 雄一雌单独放入室内培育缸（容积130^规格为76cmX40cmX48cm)内，水深约40cm，自然 交配，缸内放一个PVC管（内径20cm，长度25cm)和半圆形的瓦片（长度20cm)作为交配和 产卵场所，水温维持在25 +rC，不间断充气，溶解氧保持在3mg/L W上，水流为化/min,保 持整个培育缸处于较暗的光线及安静的环境下，W防止对亲鱼进行干扰，强化培育期间亲 鱼巧料为青邮和麦穗鱼，青邮和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm W内，数量一直保证在亲鱼 数量3倍W上，及时添补活巧料。
[0031] H)亲鱼的产卵和受精卵赔化
[0032] 配组完成后，每天检查3次各个培育缸的情况，如有亲鱼死亡现象，及时换取新的 亲鱼，待有交配现象发生且交配结束后，将雌鱼和巧料（青邮和麦穗鱼）取出，雄鱼护巢直 至仔鱼出膜，期间赔化水温维持在25 ± rC，溶解氧3mg/L W上。产卵时间于3月27号开 始，到4月8号全部结束，共计有45个培育缸开始产卵，全为全同胞家系。在恒定25 +rC 的水温下，河川沙塘體仔苗的出膜时间为14天左右，开始至赔化完成经历1?2d，共有40 个培育缸成功赔化出河川沙塘體仔苗，赔化成功率为88. 89%，单个培育缸赔化出仔苗数都 在1000尾W上，最大赔化出仔苗数3000尾左右。
[0033] 四）家系的仔、稚和幼鱼培育
[0034] 当雄鱼不在人工产卵巢内护巢，即仔鱼全部出膜后，将雄鱼移出培育缸，刚出膜的 仔鱼约6mm左右。可将苗种的培育分为3个阶段：出苗到平均规格1. 5cm为第一阶段，1. 5cm 到3cm之间为第二阶段，3cm W上为第H阶段。整个阶段期间为了最大限度的减少循环水 流对幼苗的影响，培育缸中放置2到3个产卵时所用的瓦片，给幼苗提供一个躲避水流的 场所，同时也增大了幼苗的栖息面积，同时可投入少量田螺，可起到消除残巧净化水质的作 用，整个过程中定期加入益生菌和聚维丽楓。
[003引 1)第一阶段；使用人工赔化的丰年虫开口并培育，上午8点和晚上8点各投喂一 次，投喂密度为3?5个/mU投喂期间每天加入0. 3mL的益生菌，W消化水中残留的巧料， 防止水质变坏；期间水温为25 + rC，每天吸污两次，每星期换1/3的新水。经过45天的培 育，仔苗规格可到1. 5cm。待家系的平均规格到达1. 5cm时进入第二阶段。
[0036] 2)第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘體幼苗随机选 取300尾放入新的80化的培育桶中继续培育，期间除了继续放置瓦片外，也适当放置一些 人工水草，W供幼鱼躲避和栖息，由于部分亲本配合力不高等因素，培育至第二阶段时，部 分家系死亡或数量急剧下降，自此淘汰了 6个家系，实际共得到了 34个家系，此阶段第一个 星期采用丰年虫和水祀蝴混合投喂，丰年虫投喂密度为1?3个/mU水祀蝴投喂情况视吃 食情况而定，一星期后全部投喂水祀蝴，期间水温为常温，每天吸污一次，每星期换1/3的 新水。喂食水祀蝴之前用7%。盐水浸泡处理5分钟，喂食过程中每3天加入一次化pm的± 霉素和Ippm的硫離沙星，W预防幼苗肠炎的发生。经过40天的培育，仔苗规格可到3cm。
[0037] 3)第H阶段；待家系的平均规格达到3cm时进入第H阶段，此时开始投喂赤眼轉 幼苗至培育结束。投喂的赤眼轉幼苗平均规格为1. 5cm左右，期间水温为常温，每两天吸污 一次，每星期换1/3的新水。
[0038] 五）家系培育及池塘养殖
[0039] 第二阶段中得到的34个家系的河川沙塘體幼苗随机选取300尾投入到新的培育 桶中，进行标准化养殖和生长对比试验，试验在80化的培育桶中进行，常温，水位保持60? 70cm，放养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，W供幼鱼躲避和 栖息，前期喂食水祀蝴，平均规格3cm后喂食赤眼轉幼苗，一直保证足量，不间断充气和循 环水，水流为lOL/min，每天吸污一次。试验时间为2014年6月1号至8月30号，期间每隔 45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通过Excel和SPSS18统计软件进行数据分析 和处理，挑选出了家系1、16、29、35和36等5个生长快速的优秀家系（见表1)。表1中全 长多重比较表明，生长最快的五个河川沙塘體家系是家系1、家系16、家系29、家系35和家 系36,生长最慢的五个家系是家系12、家系27、家系37、家系26和家系34。体重多重比较 表明，生长最快的五个家系是是家系1、家系16、家系29、家系35和家系36,生长最慢的五 个家系是家系12、家系37、家系28、家系26和家系33。多数家系河川沙塘體幼苗生长差异 不明显，但生长最快与生长最慢的家系之间生长差异显著。
[0040] 将各家系分别按全长和体重进行降序排序，可知是家系1、家系16、家系29、家系 35和家系36,在两种排列方式中均排在前五，由此初步判断该五个家系的河川沙塘體幼苗 生长性状较好，为5个生长迅速的优秀家系，可W作为下一步遗传选育的基础群体。同时将 分析所得的5个优秀家系和之后的13个较好的家系进行红、澄、黄H种英光标记处理，标记 部位为鱼体觸盖边缘，放入事先准备好的6个池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶 段，进行新一轮的配组、赔化、育苗，继续进行家系选育。后备亲鱼的池塘养殖在南京市水产 科学研究所周岗基地进行。
[0041] 表1河川沙塘體34个家系早期生长对比
[0042]
【权利要求】
1. 一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于包括以下步骤： 一） 亲本的选择及暂养 有针对性的选取来源不同地理群体个体健壮、无病害、营养状况良好、活力较强的健康 雌、雄河川沙塘鳢作为繁殖亲本，采用不同地理群体分开放养的方式放入事先准备好的亲 鱼培养池内进行强化培育，放养密度为30尾/m2,水温15-20°C，不间断的流水和充气，培育 期间亲鱼饵料为活的糠虾和青虾； 二） 亲本的定向配组及强化培育 采用定向交尾法进行配组，不同地理群体间河川沙塘鳢亲鱼两两组合可获得若干个不 同的组合配对，将对应的雌雄个体一雄一雌单独放入室内培育缸内，进行自然交配，培育缸 内放一个人工产卵巢，水温维持在25±1°C，保持定向配组期间处于较暗的光线及安静的环 境下，强化培育期间亲鱼饵料为青虾和麦穗鱼； 三） 亲鱼的产卵和受精卵孵化 每天上午检查产卵巢的情况，待雌雄交配完成后，雌鱼在产卵巢外，雄鱼在产卵巢内进 行护巢，将雌鱼和饵料移除，雄鱼护巢直至仔鱼出膜，期间孵化水温维持在25±1°C ;待仔鱼 全部出膜后，将雄鱼移出； 四） 家系的仔、稚和幼鱼培育 将家系苗种培育分为3个阶段：出膜到规格1. 5cm为第一阶段，1. 5cm到3cm之间为第 二阶段，3cm以上为第三阶段。整个阶段期间为了最大限度的减少循环水流对鱼苗的影响， 培育缸中放置2到3个亲鱼产卵时所用的瓦片，给鱼苗提供一个躲避水流的场所，同时也增 大了鱼苗的栖息面积，并投入田螺，可起到消除残饵净化水质的作用，整个苗种培育过程中 定期加入益生菌和聚维酮碘； 1) 第一阶段：使用人工孵化的丰年虫开口并培育，日投喂三次，投喂密度为3?5个/ mL，每天吸污一次；待家系育苗的平均规格到达1. 5cm时进入第二阶段； 2) 第二阶段：达到第二阶段后将培育缸中的各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300 尾投入新的培育桶中继续培育，并放置瓦片和人工水草，供幼鱼躲避和栖息，此阶段第一个 星期采用丰年虫和水蚯蚓混合投喂，丰年虫投喂密度为1?3个/mL，水蚯蚓投喂情况视吃 食情况而定，一星期后全部投喂水蚯蚓，期间水温为25±1°C，每天吸污一次，每星期换1/3 的新水。喂食水蚯蚓之前要进行千分之七的盐水浸泡处理，喂食过程中也要定时加入土霉 素和硫醚沙星；，以预防幼苗肠炎的发生； 3) 第三阶段：待家系鱼苗的规格达到3cm时进入第三阶段，此时开始投喂赤眼鳟幼苗 至培育结束。期间水温为常温，每两天吸污一次； 五） 家系后期培育及池塘养殖 第二阶段中各个家系的河川沙塘鳢幼苗随机选取300尾投入到新的培育桶中，进行 标准化养殖和生长对比试验，期间每隔45天统计各个家系子代的全长及体重的数据，通过 数据分析和处理，挑选出生长快速的优秀家系。将分析所得的优秀家系进行不同的荧光标 记处理，放入事先准备好的池塘作为后备亲鱼继续培育，待到性成熟阶段，进行新一轮的配 组、孵化、育苗，继续进行家系选育。
2. 根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所 述步骤二）中青虾和麦穗鱼为活体，体长规格在5cm以内，数量一直保证在亲鱼数量3倍以 上，及时添补饵料。
3. 根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所 述步骤二）中选定的亲鱼为一雄一雌，水温维持在25±1°C，保持定向配组期间处于较暗的 光线及安静的环境下。
4. 根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所 述步骤四）中培育缸中放置2-3个产卵时所用的长度20?25cm半圆形瓦片，同时投入田 螺10只。
5. 根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于所 述步骤四）中第一阶段投喂饵料为丰年虫，投喂密度为3?5个/mL，每天投喂三次，第二阶 段和第三阶段为水蚯蚓和赤眼鳟幼苗，一直保证足量，及时添加；浸泡水蚯蚓的盐水浓度为 7%。，加入的土霉素浓度和硫醚沙星浓度为分别为2ppm和lppm。
6. 根据权利要求1所述的一种河川沙塘鳢定向交配及家系培育的方法，其特征在于 所述步骤五）中标准化养殖是指将河川沙塘鳢幼苗放养于800L的培育桶中，常温，水位保 持60?70cm，放养密度为300尾/桶，桶内放置瓦片作为鱼巢，放置一些人工水草，以供幼 鱼躲避和栖息，前期喂食水蚯蚓，3cm后喂食赤眼鳟幼苗，一直保证足量，不间断充气和循环 水，每天吸污一次。荧光标记为红、橙、黄三种标记，打入鱼体鳃盖边缘进行不同河川沙塘鳢 豕系鉴别标记。
【文档编号】A01K61/00GK104396836SQ201410749395
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】尹绍武, 丁严东, 张国松, 汪亚媛, 藏雪 申请人:南京师范大学