本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种红火炬郁金优质种苗快速繁殖方法。
背景技术：
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红火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)是华南植物园近年来从国外引进、驯化并通过广东省审定农作物新品种。它的花序长、苞片数多，花色艳丽、花期长、观赏性好，可做盆栽或切花观赏，也可应用于园林绿化，一经推出，供不应求。红火炬郁金常用的繁殖方法为分球繁殖，但繁殖数量有限且易被病菌感染。目前，国内外还没有红火炬郁金组织培养种苗繁殖的报道。
技术实现要素：
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本发明的目的是提供一种简单实惠、切实可行、应用价值高的红火炬郁金优质种苗快速繁殖方法。
一种红火炬郁金优质种苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)外植体的获得和不定芽诱导：在生长季节，选取生长旺盛、无病虫害危害的红火炬郁金，11月底挖取地下球茎，将球茎洗净、消毒、晾干后进行贮藏，取贮藏2～3个月的红火炬郁金球茎埋栽于50％多菌灵可湿性粉剂600～800倍液浇灌的细沙中，放入人工气候箱中进行休眠芽的诱导，培养温度25～30℃，暗培养，当球茎上长出的小芽芽高1～2厘米时，将小芽作为外植体进行消毒处理，然后接种到不定芽诱导培养基中培养，培养温度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，直至外植体基部长出不定芽；所述的不定芽诱导培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤3.0～5.0毫克、激动素2.0～4.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余为MS培养基，pH 5.8-6.0；
2)继代增殖：将诱导出的不定芽切割后接种至继代培养基上进行继代增殖，培养温度24～30℃，光照度1500～2000勒克斯，光照时间12～16小时/天，继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或继续继代增殖；所述的继代培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤1.0～2.0毫克、激动素1.0～3.0毫克、萘乙酸0.1～0.3毫克、蔗糖20～30克、琼脂6～7克，其余为MS培养基，pH 5.8-6.0；
3)生根培养：当继代增殖的不定芽芽高2～3厘米时，切下接种到生根培养基上培养，培养温度26～30℃，光照度1800～2500勒克斯，光照时间12～16小时/天；所述的生根培养基为：每升培养基含有吲哚丁酸1.0～3.0毫克、活性炭1.0～2.0克、蔗糖15～20克、琼脂6～7克，其余为1/2MS培养基，pH5.8～6.0；
4)试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4～5厘米高时，在自然光照下炼苗7～10天，然后取出试管苗并洗净根部的培养基，移栽到泥炭土和珍珠岩按质量比2～4:1混合的基质中，由此得到红火炬郁金的种苗。
步骤1)所述的消毒处理具体为：将小芽用体积分数75％酒精浸泡10～30秒后，用质量分数0.1％升汞溶液消毒5～10分钟，无菌水冲洗4～5次。
本发明的方法是将红火炬郁金球茎经休眠芽诱导得到的小芽作为外植体，经不定芽诱导、继代增殖、生根培养和试管苗移栽各阶段，选择各阶段合适的培养基配方和培养条件，实现红火炬郁金种苗的快速繁殖，繁育出优质的红火炬郁金种苗以满足市场的需要。本发明的方法简单实惠、切实可行、应用价值高，实施该发明只需有简单的植物组织培养设备即可进行。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1：
1.外植体的获得和不定芽的诱导：在生长季节，选取生长旺盛、无病虫害危害的红火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)优良株系进行标记，11月底挖取地下球茎，用自来水洗干净后用50％多菌灵可湿性粉剂600倍液浸泡20分钟，晾干后放入10℃的冷库中贮藏2个月，然后将球茎埋栽于先用自来水洗净再用50％多菌灵可湿性粉剂600倍液浇灌的细沙中，放入人工气候箱中进行休眠芽的诱导，培养温度25℃，暗培养。红火炬郁金球茎在培养20天会长出1厘米的小芽，以此小芽为外植体进行组织培养。小芽先在体积分数75％酒精中浸泡10秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒5分钟，无菌水冲洗4次，接种到不定芽诱导培养基中，培养温度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照时间12小时/天，培养40天时外植体基部有不定芽长出，消毒成功率75％。所述的不定芽诱导培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)3.0毫克、激动素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、琼脂6克，其余为MS培养基，pH 5.8；其配制方法是将3.0毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激动素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
2.不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后接种至继代培养基上进行继代增殖，培养温度24℃，光照度1500勒克斯(lx)，光照时间12小时/天，一般30天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或继续继代增殖。所述的继代培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)1.0毫克、激动素(KT)1.0毫克、萘乙酸(NAA)0.1毫克、蔗糖20克、琼脂6克，其余为MS培养基，pH 5.8；其配制方法是将1.0毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、1.0毫克激动素(KT)、0.1毫克萘乙酸(NAA)、20克蔗糖和6克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
3.生根培养：将继代增殖的不定芽芽高2厘米时，切下接种到生根培养基上培养，培养温度26℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照时间12小时/天，能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每株苗有根数4条。所述的生根培养基为：每升培养基含有吲哚丁酸(IBA)1.0毫克、活性炭(AC)1.0克、蔗糖15克、琼脂6克，其余为1/2MS培养基，pH5.8；其配制方法是将1.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.0克活性炭(AC)、15克蔗糖和6克琼脂，加到少量1/2MS培养基(液体)中，然后用1/2MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
4.试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4厘米高时，在自然光照下炼苗10天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土和珍珠岩按质量比2:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红火炬郁金的种苗，成活率可达90％。
实施例2：
1.外植体的获得和不定芽的诱导：在生长季节，选取生长旺盛、无病虫害危害的红火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)优良株系进行标记，11月底挖取地下球茎，用自来水洗干净后用50％多菌灵可湿性粉剂700倍液浸泡25分钟，晾干后放入12℃的冷库中贮藏2.5个月，然后将球茎埋栽于先用自来水洗净再用50％多菌灵可湿性粉剂700倍液浇灌的细沙中，放入人工气候箱中进行休眠芽的诱导，培养温度28℃，暗培养。红火炬郁金球茎在培养18天会长出1.5厘米的小芽，以此小芽为外植体进行组织培养。小芽先在体积分数75％酒精中浸泡20秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒8分钟，无菌水冲洗5次，接种到不定芽诱导培养基中，培养温度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照时间14小时/天，培养35天时外植体基部有不定芽长出，消毒成功率80％。所述的不定芽诱导培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)4.0毫克、激动素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，其余为MS培养基，pH 5.9；其配制方法是将4.0毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激动素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
2.不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后接种至继代培养基上进行继代增殖，培养温度28℃，光照度1800勒克斯(lx)，光照时间14小时/天，一般30天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为3.5倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或继续继代增殖。所述的继代培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)1.5毫克、激动素(KT)2.0毫克、萘乙酸(NAA)0.2毫克、蔗糖25克、琼脂6.5克，其余为MS培养基，pH 5.9；其配制方法是将1.5毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、2.0毫克激动素(KT)、0.2毫克萘乙酸(NAA)、25克蔗糖和6.5克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
3.生根培养：将继代增殖的不定芽芽高2.5厘米时，切下接种到生根培养基上培养，培养温度28℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照时间14小时/天，能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每株苗有根数5条。所述的生根培养基为：每升培养基含有吲哚丁酸(IBA)2.0毫克、活性炭(AC)1.5克、蔗糖18克、琼脂6.5克，其余为1/2MS培养基，pH5.9；其配制方法是将2.0毫克吲哚丁酸(IBA)、1.5克活性炭(AC)、18克蔗糖和6.5克琼脂，加到少量1/2MS培养基(液体)中，然后用1/2MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
4.试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至4.5厘米高时，在自然光照下炼苗8天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土和珍珠岩按质量比3:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红火炬郁金的种苗，成活率可达95％。
实施例3：
1.外植体的获得和不定芽的诱导：在生长季节，选取生长旺盛、无病虫害危害的红火炬郁金(Curcuma hybrida‘Red Torch’)优良株系进行标记，11月底挖取地下球茎，用自来水洗干净后用50％多菌灵可湿性粉剂800倍液浸泡30分钟，晾干后放入15℃的冷库中贮藏3个月，然后将球茎埋栽于先用自来水洗净再用50％多菌灵可湿性粉剂800倍液浇灌的细沙中，放入人工气候箱中进行休眠芽的诱导，培养温度30℃，暗培养。红火炬郁金球茎在培养15天会长出2厘米的小芽，以此小芽为外植体进行组织培养。小芽先在体积分数75％酒精中浸泡30秒，再用质量分数0.1％升汞溶液消毒10分钟，无菌水冲洗5次，接种到不定芽诱导培养基中，培养温度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照时间16小时/天，培养30天时外植体基部有不定芽长出，消毒成功率85％。所述的不定芽诱导培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)5.0毫克、激动素(KT)4.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、琼脂7克，其余为MS培养基，pH 6.0；其配制方法是将5.0毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、4.0毫克激动素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
2.不定芽诱导和继代增殖：将诱导出的不定芽切割后接种至继代培养基上进行继代增殖，培养温度30℃，光照度2000勒克斯(lx)，光照时间16小时/天，一般30天为1个继代增殖周期，每1个继代增殖周期后的增殖倍数为4倍。继代增殖得到的不定芽能用于生根培养或继续继代增殖。所述的继代培养基为：每升培养基含有6-苄基嘌呤(6-BA)2.0毫克、激动素(KT)3.0毫克、萘乙酸(NAA)0.3毫克、蔗糖30克、琼脂7克，其余为MS培养基，pH 6.0；其配制方法是将2.0毫克6-苄基嘌呤(6-BA)、3.0毫克激动素(KT)、0.3毫克萘乙酸(NAA)、30克蔗糖和7克琼脂，加到少量MS培养基(液体)中，然后用MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
3.生根培养：将继代增殖的不定芽芽高3厘米时，切下接种到生根培养基上培养，培养温度30℃，光照度2500勒克斯(lx)，光照时间16小时/天，能正常生根，培养30天时生根率可达100％，每株苗有根数6条。所述的生根培养基为：每升培养基含有吲哚丁酸(IBA)3.0毫克、活性炭(AC)2.0克、蔗糖20克、琼脂7克，其余为1/2MS培养基，pH 6.0；其配制方法是将3.0毫克吲哚丁酸(IBA)、2.0克活性炭(AC)、20克蔗糖和7克琼脂，加到少量1/2MS培养基(液体)中，然后用1/2MS培养基(液体)补齐至1L，混合均匀，灭菌备用。
4.试管苗移栽：当生根培养得到的试管苗长至5厘米高时，在自然光照下炼苗7天。然后打开瓶塞，用镊子把试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入泥炭土和珍珠岩按质量比4:1混合的基质中，注意浇水、遮荫、保温和保湿，由此得到红火炬郁金的种苗，成活率可达100％。