一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体的制作方法

本实用新型涉及动物繁殖及人类生殖领域精子冻存技术领域，具体地说，是一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体。

背景技术：

辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology，简称ART)是对少精症或无精症患者(通过睾丸、附睾活检获得数量极少的精子)进行卵胞浆内单精子显微注射治疗(Intracytoplasmic sperm injection，简称ICSI)而获得子代。每个ICSI治疗周期的妊娠率在35％-45％，为了获得妊娠，部分患者需要重复多次ICSI治疗。如果在术前没有对其稀少精子进行冻存，那么每次治疗都要进行睾丸、附睾活检，少精症患者的精子不稳定，也有可能得不到精子以致取消治疗。

对稀少精子的冷冻(2-3条/LPF)，目前多见使用各种冷冻载体的报道，Cohen和Desai分别采用透明带作为冷冻载体冻存稀少精子，Nawroth采用冷冻环为载体冷冻睾丸、附睾获得的精子；随后又有卢光琇等“不添加冷冻保护剂的玻璃化方法冷冻稀少精子”的方法报道。尽管上述研究已经获得成功但是各有利弊。透明带存在异种蛋白，可能存在生物污染的风险；冷冻环价格较贵，对睾丸、附睾获得的精子可能需要数个冷冻环来进行冷冻，成本增加。不添加冷冻保护剂的开放性的冷冻麦管，存在着液氮污染的问题。目前冻存精子的存储管、冷冻麦管等对稀少精子的冷冻复苏后的精子活动率、精子形态、精子顶体完整率和DNA断裂指数等功能指标均不是那么令人满意。

因此，亟需要一种冻存效果好、操作方便、结构简单，精子回收率高,复苏后精子存活率高的旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体。

技术实现要素：

本实用新型的目的是，提供一种冻存效果好、操作方便、结构简单，精子回收率高,复苏后精子存活率高的旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体。

为实现上述目的，本实用新型采取的技术方案是：

一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体，所述旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体包括外套管、冷冻载片、旋纽盖；所述的冷冻载片一端固定在旋钮盖上，另一端插入外套管中；所述的外套管端部连接旋钮盖；所述外套管一端设有外螺纹；所述外套管另一端内部呈圆锥形：所述的旋钮盖包括子旋钮盖和母旋钮盖；所述的子旋钮盖和母旋钮盖的内侧面均设有内螺纹，且内螺纹与外套管上的外螺纹相配合；所述的子旋钮盖和母旋钮盖通过折叠机构连接；所述的子旋钮盖外侧设有子锁扣；所述的母旋钮外侧设有母锁扣；所述的子旋钮盖上还设有平台，且平台上设有固定凹槽；所述载片的一端还设有圆形标识；所述载片的另一端还设有固定卡条、手柄；所述的固定卡条与固定凹槽相配合。

进一步地，所述的外套管两端呈开口结构。

进一步地，圆形标识共有两个，每个圆形标识内容积为2微升。

进一步地，所述载片长度为23.5毫米，宽度为8毫米。

进一步地，所述外套管内径为10mm载片宽度为8mm。

进一步地，所述的外套管为耐温高分子材质制备。

进一步地，所述手柄的高度为6.2毫米，宽度为4.95毫米。

进一步地，所述的手柄上设有三角形标识。

进一步地，所述固定卡条为长方形。

本实用新型优点在于：

1、本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体，冻存效果好、操作方便、结构简单，精子回收率高,复苏后精子存活率高；

2、设有冷冻载片，且冷冻载片一端设圆形标识，壁薄、透明，便于技术人员在倒置显微镜下操作时可以清晰观察，能快速将需要冷冻的极少精子放入圆形标识内；

3、冷冻载片上的圆形标识，容积为2微升，器容积小，复苏的精子容易找到，精子回收率高；

4、设有外套管，将冷冻载片装在密封的套管内可以有效地避免液氮的直接接触，减少了交叉污染/感染的机会；

5、设有旋钮盖，其旋钮盖通过固定凹槽固定连接冷冻载片，旋钮盖通过内螺纹与外套管上的外螺纹固定连接，旋钮盖采用折合扣锁方式，使用方便，稳定性好，使用过程中不担心会侧翻或颠倒：

6、本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体，采用的是显微操作+微滴盖油法来冷冻稀少(单个)精子，当显微镜下挑选精子操作完毕后，将载体取出培养皿再去除载体上覆盖的油，即可放入带旋盖的套管中，置液氮冷藏；

7、精子回收率高于90％，复苏存活率约50％。其冻存效果好、使用方便，适合临床推广使用。

附图说明

附图1是本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体装配结构示意图。

附图2是旋钮盖和冷冻载片连接结构示意图。

附图3为外套管主视方向示意图。

附图4为外套管结构示意图。

附图5为子旋钮盖主视方向示意图。

附图6为旋钮盖结构示意图。

附图7冷冻载片主视方向示意图。

附图8为冷冻载片结构示意图。

具体实施方式

下面结合实施例并参照附图对本实用新型作进一步描述。

附图中涉及的附图标记和组成部分如下所示：

1.外套管 11.外螺纹

2.冷冻载片 21.圆形标识

22.固定卡条 23.手柄

24.三角形标识 3.旋纽盖

31.内螺纹 32.折叠机构

33.子旋纽盖 331.平台

332.固定凹槽 333.子锁扣

34.母旋纽盖 341.母锁扣

实施例1

请参照图1和图2，图1是本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体装配结构示意图。图2是旋钮盖3和冷冻载片2连接结构示意图。一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体包括外套管1、冷冻载片2、旋纽盖；所述的冷冻载片2一端固定在旋钮盖3上，另一端插入外套管1中；所述的外套管1端部连接旋钮盖3。

请参照图3和图4，图3为外套管1主视方向示意图。图4为外套管1结构示意图。所述的外套管1两端呈开口结构；所述外套管1一端设有外螺纹11，外套管1上的外螺纹11方便在一手持装有冷冻载片2的子旋钮盖33顺利扭进母旋钮盖34中；所述外套管1另一端内部呈圆锥形，其圆锥形便于在精子处理所用的液氮罐中存放:所述外套管内径为10mm载片宽度为8mm以防载片与套管内壁粘黏。

请参照图5和图6，图5为子旋钮盖33主视方向示意图。图6为旋钮盖3结构示意图。所述的旋钮盖3包括子旋钮盖33和母旋钮盖34；所述的子旋钮盖33和母旋钮盖34的内侧面均设有内螺纹31，且内螺纹31与外套管1上的外螺纹11相配合；所述的子旋钮盖33和母旋钮盖34通过折叠机构32连接，其折叠机构32可选择合页或销轴；所述的子旋钮盖33外侧设有子锁扣333；所述的母旋钮外侧设有母锁扣341；所述的子旋钮盖33上还设有平台331，且平台331上设有固定凹槽332。

请参照图7，图7冷冻载片2主视方向示意图。图8为冷冻载片2结构示意图。所述冷冻载片2的一端还设有圆形标识21，圆形标识21共有两个，每个圆形标识内容积为2微升；所述冷冻载片2长度为23.5毫米，宽度为8毫米；所述冷冻载片2的另一端还设有固定卡条22、手柄23；所述固定卡条22为长方形；所述的固定卡条22与固定凹槽332相配合；所述手柄23的高度为6.2毫米，宽度为4.95毫米；所述的手柄23上设有三角形标识24；所述的冷冻载片2采用高透明经特殊工艺处理具有稳定附着性。

需要说明的是：全文中所述的稀少精子包括单个精子情形，外套管1为耐温高分子材质制备，确保冷冻载片1冷冻的精子不受外界温度影响，冷冻效果好；外套管1和旋钮盖3对冷冻载片2具有的安全保护作用，这样冷冻载片2装在密封的套管内可以有效地避免液氮的直接接触，减少了交叉污染/感染的机会；

外套管1上设有外螺纹11，与设有内螺纹31的旋钮盖3螺纹连接，可拆卸连接，操作简单，且螺纹连接，稳定性好。

冷冻载片2壁薄、透明，便于技术人员在倒置显微镜下操作时可以清晰观察，能快速将需要冷冻的极少精子放入圆形标识21内。冷冻载片2上设有圆形标识21，容积小，复苏的精子容易找到，精子回收率高；冷冻载片2上设置有手柄23，在精子冷冻过程中，通过小镊子夹住冷冻载片2即可将冷冻载片2从培养皿中取出，方便实用。手柄23使用时将冷冻载片2插入打开子旋钮盖33的内侧，扣上母旋钮盖34，即可将冷冻载片2安全可靠的扣在旋钮盖3里再插入外套管1内。

旋钮盖包3括子旋钮盖33和母旋钮盖34，且子旋钮盖33上设有平台331，平台331设有固定凹槽332，其固定凹槽332与手柄23上的固定卡条22相配合。当带手柄23的冷冻载片2盛装好冷冻样本后，放进打开折合扣的子旋钮盖33时可以不担心会侧翻或颠倒；然会再把母旋钮盖34合上，扣上子锁扣333和母锁扣341，将这个带有冷冻载片2的子旋钮盖33旋钮在外套管1上即可。

本实用新型稀少精子冷冻超细管载体的使用方法包括以下步骤

(一)精子冷冻

在60mm培养皿内做3个条状含平衡液的(mHTF，含10％SSS)液滴，覆盖矿物油，将处理后的精子标本加入上述平衡液的(mHTF)液滴内；另准备好一个超薄冷冻载片2，在超薄冷冻载片2上的圆形标识21内加入2μL的冷冻保护液的微滴，然后将它放入已含精子样本的培养皿中。将培养皿转入倒置显微镜下，利用显微操作系统抓取精子，将扑获得精子(不超过3条/每滴)放至超薄冷冻载片2上冷冻液的微滴内，用小镊子夹住超薄冷冻载片2上的手柄23取出超薄冷冻载片2，用吸水纸将矿物油尽量吸干。将超薄冷冻载片2插入打开旋钮盖3的内侧，扣上旋钮盖3，套上外套管1，旋紧外套管1，固定在铝架上，先放置4℃冰箱内20分钟，再置于液氮面上方5cm的液氮蒸汽中5-10分钟至冷冻液微滴完全冻结后，放入液氮内长期保存。

二、精子复苏

将外套管1自液氮罐取出后，搽去外套管1的霜痕，打开旋钮盖3上的子锁扣333和母锁扣341，扭开旋钮盖3，用小镊子夹住超薄冷冻载片2从外套管1内取出，迅速插入预先准备好的显微操作培养皿内(覆盖有37℃矿物油)，在倒置显微镜下，利用显微操作针抓取复苏后的精子直接用于卵胞浆内单精子的注射。

本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体，冻存效果好、操作方便、结构简单，精子回收率高,复苏后精子存活率高；设有冷冻载片2，且冷冻载片2一端设圆形标识21，壁薄、透明，便于技术人员在倒置显微镜下操作时可以清晰观察，能快速将需要冷冻的极少精子放入圆形标识21内；冷冻载片2上的圆形标识21，容积为2微升，器容积小，复苏的精子容易找到，精子回收率高；设有外套管1，将冷冻载片2装在密封的套管内可以有效地避免液氮的直接接触，减少了交叉污染/感染的机会；设有旋钮盖3，其旋钮盖3通过固定凹槽332固定连接冷冻载片2，旋钮盖3通过内螺纹31与外套管1上的外螺纹11固定连接，旋钮盖3采用折合扣锁方式，使用方便，稳定性好，使用过程中不担心会侧翻或颠倒：本实用新型的一种旋盖套管式稀少精子超薄片冷冻载体，采用的是显微操作+微滴盖油法来冷冻稀少(单个)精子，当显微镜下挑选精子操作完毕后，将载体取出培养皿再去除载体上覆盖的油，即可放入带旋盖的套管中，置液氮冷藏；精子回收率高于90％，复苏存活率约50％。其冻存效果好、使用方便，适合临床推广使用。

以上所述仅是本实用新型的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本实用新型原理的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本实用新型的保护范围。