本发明涉及一种用于抑制藻类生长的抑藻剂制备方法，尤其是涉及一种从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法及其应用。
背景技术：
目前，湖泊、水库等水体中藻类控制技术大体分为物理方法、化学方法和生物方法，然而这些传统方法都有其固有的缺点。人们对新型高效、生态安全的藻类控制技术的探索一直没有停止。利用从植物体内提取的活性成分抑制有害藻类生长是实现水华防控的有效途径之一，已被国内外学者广泛关注。研究表明，化感物质能够通过影响藻类的光合作用、破坏藻细胞膜、影响酶活性、影响细胞的超微结构和基因表达等途径抑制藻细胞的生长。
技术实现要素：
本发明提出一种从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，并将之应用于以蓝藻为优势种的小型景观水体抑制藻类生长。
本发明所采用的技术方案：
一种从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，包括步骤如下：
（1）将晾干后的连翘用石油醚按照连翘、石油醚质量：体积比为1:15～30（kg:l）的用量比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，然后去除连翘残渣，获得连翘石油醚浸提液；
对连翘石油醚浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘石油醚浸膏；
（2）将步骤（1）滤出的连翘残渣与乙酸乙酯按照连翘、乙酸乙酯质量：体积比为1:15～30（kg:l）的用量比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，去除连翘残渣，获得连翘乙酸乙酯浸提液；
对连翘乙酸乙酯浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘乙酸乙酯浸膏；
（3）将将步骤（2）滤出的连翘残渣与甲醇按照连翘、甲醇质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，去除连翘残渣，获得连翘甲醇浸提液；
对连翘甲醇浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘甲醇浸膏；
（4）将前述连翘石油醚浸膏、连翘乙酸乙酯浸膏和连翘甲醇浸膏分别用二甲基亚砜助溶，最终制得连翘石油醚抑藻剂、连翘乙酸乙酯抑藻剂和连翘甲醇抑藻剂。
所述的从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，步骤（1）、步骤（2）和/或步骤（3）中，将滤出的连翘残渣与对应的有机溶剂再次或三次按照质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合，放置12～36小时，获得连翘浸提液，合并两次或三次浸提液，再对浸提液进行处理。
所述的从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，步骤（1）、步骤（2）和/或步骤（3）中，使用定性滤纸滤除连翘残渣，进而获得连翘浸提液。
前述抑藻剂制备方法制备的三种抑藻剂在含藻水中的应用。将最终制得的三种抑藻剂，根据水体中藻细胞数量通过实验确定抑藻剂用量，加入含藻水中静置，使抑藻剂和水中的藻类充分接触，可抑制水中藻类的生长。
本发明的有益效果：
1、本发明从连翘中提取抑藻活性成分制得的抑藻剂，属于天然成分，用于抑制水中藻类生长，在水体中易降解，用于控藻，不会造成二次污染。制备的三种抑藻剂，可以有效抑制水中藻类生长，适用于以蓝藻为优势种的小型景观水体除藻。
2、本发明从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，活性成分提取及抑藻剂制备过程简单，操作简便，提取的抑藻剂具有良好的抑藻效果，能有效去除水中藻类，为藻类去除提供了新的方法。
3、本发明从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，所用原料为中药用连翘，实用性强，控藻成本低，易于推广应用，为连翘资源化利用提出了新的途径。
具体实施方式
本发明从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，步骤如下：
（1）将晾干后的连翘用石油醚按照连翘、石油醚质量：体积比为1:15～30（kg:l）的用量比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，然后去除连翘残渣，获得连翘石油醚浸提液；
对连翘石油醚浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘石油醚浸膏；
（2）将步骤（1）滤出的连翘残渣与乙酸乙酯按照连翘、乙酸乙酯质量：体积比为1:15～30（kg:l）的用量比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，去除连翘残渣，获得连翘乙酸乙酯浸提液；
对连翘乙酸乙酯浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘乙酸乙酯浸膏；
（3）将将步骤（2）滤出的连翘残渣与甲醇按照连翘、甲醇质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合，放置12～36小时以促进连翘中所含的活性成分充分溶出，去除连翘残渣，获得连翘甲醇浸提液；
对连翘甲醇浸提液进行处理，再经减压浓缩回收有机溶剂，得到连翘甲醇浸膏；
（4）将前述连翘石油醚浸膏、连翘乙酸乙酯浸膏和连翘甲醇浸膏分别用二甲基亚砜助溶，最终制得连翘石油醚抑藻剂（确切的说，是利用石油醚作为溶剂从连翘中提取抑藻活性成分制备的抑藻剂，或可标记为抑藻剂a）、连翘乙酸乙酯抑藻剂（利用乙酸乙酯作为溶剂从连翘中提取抑藻活性成分制备的抑藻剂，也可标记为抑藻剂b）和连翘甲醇抑藻剂（利用甲醇作为溶剂从连翘中提取抑藻活性成分制备的抑藻剂，也可标记为抑藻剂c）。
步骤（1）、步骤（2）和/或步骤（3）中，将滤出的连翘残渣与对应的有机溶剂再次或三次按照质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合，放置12～36小时，获得连翘浸提液，合并两次或三次浸提液，再对浸提液进行处理。
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
实施例1
本发明从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，包括以下步骤：
（1）将中药连翘依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇三种溶剂按照质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合，优选1:20，并搅拌均匀后放置12～36小时，优选24小时，以促进连翘中所含的活性成分充分溶出；
（2）使用定性滤纸滤除浸提液中的连翘残渣，得到连翘提取液，再经减压浓缩回收有机溶剂，即可，得到连翘浸膏（连翘石油醚浸膏、连翘乙酸乙酯浸膏和连翘甲醇浸膏），分别将三种浸膏用二甲基亚砜助溶获得三种抑藻剂（分别标记为连翘石油醚抑藻剂、连翘乙酸乙酯抑藻剂和连翘甲醇抑藻剂）。
用于抑制水中藻类生长时，将所述的抑藻剂，加入含藻水中，放置48～120小时，以使抑藻剂和水中藻类接触，达到抑制藻类生长的目的。
实施例2
本实施例从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，包括步骤如下：
（1）将连翘依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇三种溶剂按照质量：体积比为1:15～30（kg:l）的比例混合；
（2）使用定性滤纸去除连翘残渣得到连翘浸提液，再经减压浓缩回收有机溶剂，即可，得到连翘浸膏（连翘石油醚浸膏、连翘乙酸乙酯浸膏和连翘甲醇浸膏），分别将三种浸膏用二甲基亚砜助溶获得三种抑藻剂（连翘石油醚抑藻剂、连翘乙酸乙酯抑藻剂和连翘甲醇抑藻剂）；
实施例3
本实施例从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，与实施例2的不同之处在于：步骤（1）中，连翘与三种溶剂（石油醚、乙酸乙酯和甲醇）混合后放置12～36小时，以促进连翘中所含的活性成分充分溶出。
实施例4
本实施例从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，与前述各实施例的不同之处在于：将连翘依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇三种溶剂按照质量：体积比为1:15的比例混合。
实施例5
本实施例从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，与前述各实施例的不同之处在于：将连翘依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇三种溶剂按照质量：体积比为1:20的比例混合。
实施例6
本实施例从连翘中提取抑藻活性成分制备抑藻剂的方法，与前述各实施例的不同之处在于：将连翘依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇三种溶剂按照质量：体积比为1:30的比例混合。
实施例7
本实施例前述各实施例制备的抑藻剂在抑制水中藻类生长方面的抑藻应用。根据水体中藻细胞数量通过实验确定抑藻剂的最佳用量，将所述三种抑藻剂分别加入含藻水中，静置48～120小时，以使抑藻剂和水中藻类充分接触，达到抑制藻类生长的目的。
下面结合实验室的研究结果对本发明抑藻活性成分的提取方法、抑藻剂的制备及其用于抑制水中藻类生长的方法及过程进一步说明。
实验1
取中药连翘以石油醚为提取溶剂，将30.0g连翘浸泡在600ml的石油醚中，放置24小时，使用滤纸去除连翘残渣得到连翘石油醚浸提液，再经减压浓缩回收石油醚，即可，得到连翘石油醚浸膏；再将连翘石油醚浸膏用二甲基亚砜助溶，此即为最终的连翘石油醚抑藻剂；取该抑藻剂加到藻浓度为9.4×105个/ml的水体中，使该抑藻剂的最终浓度为20mg/l，放置72h，抑藻率可达到58.78%。
实验2
取用石油醚浸提过的连翘，以乙酸乙酯为提取溶剂，将30.0g连翘浸泡在600ml的乙酸乙酯中，放置24小时，使用滤纸去除连翘残渣得到连翘乙酸乙酯浸提液，再经减压浓缩回收乙酸乙酯，即可，得到连翘乙酸乙酯浸膏；再将连翘乙酸乙酯浸膏用二甲基亚砜助溶，此即为最终的连翘乙酸乙酯抑藻剂；取该抑藻剂加到藻浓度为9.4×105个/ml的水体中，使该抑藻剂的最终浓度为10mg/l，放置72h，抑藻率可达到79.14%。
实验3
取依次用石油醚和乙酸乙酯浸提过的连翘，以甲醇为提取溶剂，将30.0g连翘浸泡在600ml的甲醇中，放置24小时，使用滤纸去除连翘残渣得到连翘甲醇浸提液，再经减压浓缩回收甲醇，即可，得到连翘甲醇浸膏；再将连翘甲醇浸膏用二甲基亚砜助溶，此即为最终的连翘甲醇抑藻剂；取该抑藻剂加到藻浓度为9.4×105个/ml的水体中，使该抑藻剂的最终浓度为20mg/l，放置72h，抑藻率可达到30.10%。