本发明涉及甘蓝型油菜育种领域，具体涉及甘蓝型油菜乳黄花突变体的应用。
背景技术：
隐性细胞核雄性不育因其具有不育性彻底且稳定、恢复源广等优点，在国内已经成为油菜杂种优势利用的一个重要途径，但由于得不到100％的不育系，在杂交制种时需人工拔除不育系株行中50％的可育株，限制了其广泛应用，如双隐性核不育s45a和117a等。
20118a是上海市农业科学院孙超才研究员于1997年选育的一种新的隐性细胞核雄性不育系，其不育株花药空瘪，无花粉，套袋自交不结实，且不育性稳定，不受环境条件的影响。
通过普通遗传学研究证明，20118a受3对隐性基因控制，为了便于描述其遗传，将三个隐性基因分别命名为a、b和rf，其中a和b为隐性不育基因，rf为隐性上位基因，能抑制a和b不育基因的表达，使育性恢复可育。根据这一遗传原理，这种核不育材料可以实现“三系化”制种。
参见图1，首先是纯合两型系内的纯合型不育株与可育株杂交，不育株上产生的后代世代间基因型相同，2种基因型始终各占50％，因而能稳定遗传。三隐性纯合体aabbrfrf作为父本，与纯合型不育株杂交获得全不育系，因此三隐性纯合体可以作为临保系。基因型为aa----、--bb--或aabb--的可育株与全不育系的不育株杂交，后代全部可育，因此其可以作为恢复系。这种核不育的优点是能通过“临保系”繁殖不育系，理论上可获得全不育系群体，减少了大面积生产杂交种时要拔去母本行50％可育株的麻烦。
但因不育性状、临保系的性状都受隐性基因控制，容易受外来花粉，机械混杂等影响，导致获得高纯度的全不育系非常困难。纯合两型系和临保系中混有外来杂种或受到外来花粉污染，无法对这些杂种进行有效识别和剔除。
另外，全不育系的纯度鉴定有两种方式，第一种是利用特异的分子标记鉴定技术，这种方式需要鉴定单位具备分子实验室和相关技术人员；第二种是利用花期的育性调查进行鉴定，这种方式需要在苗期进行低温春化，等到开花后才能进行，周期较长。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种甘蓝型油菜乳黄花突变体的应用，将隐性基因控制的乳黄花转育到甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系及其临保系中，选育甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系及其临保系，用于生产具有乳黄花性状的全不育系。
为了达到以上目的，本发明采用以下技术方案来实现：
甘蓝型油菜乳黄花突变体的应用，以甘蓝型油菜乳黄花突变体亲本材料为供体，通过与甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系及其临保系杂交选育获得具有乳黄花花色的甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系及其临保系。
进一步地，通过上述甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系及其临保系杂交生产甘蓝型油菜乳黄花全不育系，基因型为aabbrfrfww，乳黄花可作为全不育系纯度鉴定，对全不育系纯度进行快速、简单、有效的鉴定。
更进一步，利用上述乳黄花全不育系与基因型为aa----ww、--bb--ww或aabb--ww的恢复系杂交，生产商用f1杂交种，商用f1杂交种为黄花。
本发明还提供一种甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系及其临保系的选育方法，包括以下步骤：
a)甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系的不育株aabbrfrfww与甘蓝型油菜乳黄花突变体可育株aabbrfrfww杂交，f1代黄花可育株aabbrfrfww套袋自交，f2代分离群体中会分离出乳黄花不育株aabbrfrfww；
b)以上述步骤a)中的乳黄花不育株aabbrfrfww为母本，与甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系可育株aabbrfrfww杂交，分离出1：1的黄花可育株aabbrfrfww和黄花不育株aabbrfrfww；
c)以上述步骤a)中的乳黄花不育株aabbrfrfww为母本，与上述步骤b)中的黄花可育株aabbrfrfww为父本进行杂交，分离出1：1：1：1的黄花可育株aabbrfrfww、黄花不育株aabbrfrfww、乳黄花可育株aabbrfrfww和乳黄花不育株aabbrfrfww；
将其中的乳黄花可育株aabbrfrfww和乳黄花不育株aabbrfrfww兄妹交，其后代中乳黄花可育株与乳黄花不育株始终按照1：1的比例分离，由此选育出甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系；
d)以上述步骤a)或步骤c)中的乳黄花不育株aabbrfrfww与临保系aabbrfrfww杂交，杂交后代为黄花不育株aabbrfrfww；
e)以上述步骤d)中的黄花不育株aabbrfrfww与临保系aabbrfrfww杂交，杂交后代分离为1：1：1：1的黄花不育株aabbrfrfww、黄花不育株aabbrfrfww、黄花可育株aabbrfrfww和黄花可育株aabbrfrfww；
将杂交后代分离群体中的两种黄花可育株分别自交，选择自交后代群体中出现的部分乳黄花可育株，其基因型为aabbrfrfww，即为乳黄花临保系。
进一步，步骤e)中，获得杂交后代后，可以通过分子检测手段筛选出基因型为aabbrfrfww的黄花可育株，再进行自交，获得乳黄花可育株。
进一步，步骤e)中，黄花可育株aabbrfrfww的自交后代分离出黄花可育株(基因型为aabbrfrfww或aabbrfrfww)以及乳黄花可育株aabbrfrfww，分离出的黄花可育株与乳黄花可育株的比例为3：1。
甘蓝型油菜正常的花色为黄色，本发明的乳黄花突变体花色为乳黄色(参见图2)。乳黄花突变体与正常黄色花植株进行杂交，f1代植株表现为黄花，将f1代植株套袋自交，f2代分离群体表现黄花和乳黄花两种性状，这两种类型的单株数分别为342和108，卡方值为0.25，符合3：1的分离比例。选择f2代分离群体中黄花和乳黄花植株套袋自交，进一步观察f3代分离情况。f2代为乳黄花的植株套袋自交后得到的f3代群体全部为乳黄花，f2代为黄花的植株套袋自交后的f3代群体出现两种情况，一种情况是f3代群体全部是黄花，另一种情况是f3代部分为黄花，部分为乳黄花，且分离比例为3：1。以上遗传研究表明：乳黄花性状为隐性性状，当基因ww隐性纯合时，表现为乳黄花，当基因ww或ww时表现为黄花。
本发明在黄花不育株aabbrfrfww与临保系aabbrfrfww杂交后，理论上获得的黄花可育株是存在aabbrfrfww和aabbrfrfww两种基因型的(图3)，因此，将获得的黄花可育株自交，其自交后代群体将出现两种情况，第一种情况是后代群体全部为黄花可育株，说明其亲本基因型为aabbrfrfww，第二种情况是后代群体中出现部分黄花可育株和部分乳黄花可育株，且比例为3：1，说明此亲本的基因型为aabbrfrfww，而其自交后代群体中出现的部分乳黄花可育株基因型为aabbrfrfww，即为获得的乳黄花临保系。
本发明利用乳黄花这一特殊的形态标记可以对全不育系生产全程进行纯度和质量控制，同时也为全不育系纯度鉴定提供一种高效、快捷、简单可行的方法，尤其是利用该形态标记可实现全不育系的除杂，为商用杂交种的生产节省了大量的用工和时间。
本发明的有益效果：
1)本发明将乳黄花性状转育到纯合两型系和临保系中，并以花色作为指示性状，可对纯合两型系和临保系繁殖过程中的机械混杂、外源花粉或次生苗进行有效识别、除杂，从源头上保证全不育系生产的质量。
2)简化杂交育种程序。本发明将乳黄花性状转育到纯合两型系和临保系中，生产具有乳黄花性状的全不育系，利用乳黄花全不育系和恢复系生产的杂交种为黄花，这样可以利用黄花作为指示性状，对杂交种纯度进行快速、简单、有效的鉴定。
附图说明
图1为现有隐性核不育杂交制种的生产模式。
图2为甘蓝型油菜乳黄花(左)和黄花(右)的比较图。
图3为本发明甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系和乳黄花临保系选育过程的示意图。
图4为利用乳黄花全不育系生产商用杂交种示意图。
具体实施方式
以下结合具体实施例与附图进一步详细描述本发明的技术方案。
本发明实施例中，所需的试验材料：
1.隐性核不育纯合两型系
甘蓝型油菜隐性核不育纯合两型系20118ab，20118a基因型为aabbrfrf，20118b基因型为aabbrfrf，其芥酸含量为0.56％，硫甙含量为23.45μmol/g。
2.临保系
临保系m-6029，其基因型为aabbrfrf，可育，与隐性核不育20118a(aabbrfrf)杂交，其后代基因型为aabbrfrf，仍为不育，但是该不育性只能保持一代，其后代会发生育性分离，故称基因型aabbrfrf的m-6029为甘蓝型油菜隐性核不育20118a的临保系。
3.恢复系
因甘蓝型油菜隐性核不育是受三对隐性基因控制的，所以恢复系的选择自由度大，生产上的品系(自交系)基因型大多为aa----、--bb--或aabb--，故均可以用作恢复系。
实施例1甘蓝型油菜乳黄花隐性核不育纯合两型系的选育
参见图3，以隐性核不育纯合两型系不育株20118a为母本，与甘蓝型油菜乳黄花突变体aabbrfrfww为父本杂交，并利用临保系m-6029同时对该不育株进行测交，测交后代全不育，表明当选单株基因型为aabbrfrf。
乳黄花可育株aabbrfrfww和该不育株aabbrfrfww的杂交后代黄花可育，其基因型为aabbrfrfww，f1代自交套袋，将收获的种子秋播到田间，在油菜花期进行田间观察，不育性状和花色均为明显的指示性状，有利于选出乳黄花隐性核不育系。通过观察，在781个f2代分离群体中，发现了15株乳黄花不育株aabbrfrfww。然后利用乳黄花不育株aabbrfrfww与隐性核不育纯合两型系可育株20118b杂交，杂交后代为黄花，育性会发生分离，可育株aabbrfrfww与不育株aabbrfrfww的分离比例为1：1，以分离后代的可育株与乳黄花不育株回交，在363个回交后代中，分离出94个乳黄花不育株aabbrfrfww，85个乳黄花可育株aabbrfrfww，兄妹交后代中乳黄花可育与乳黄花不育植株数比例始终以1：1分离。
实施例2甘蓝型油菜乳黄花临保系的选育和全不育系的生产
参见图3，以乳黄花不育株aabbrfrfww为母本，与临保系m-6029杂交，杂交后代全部为黄花不育株，基因型为aabbrfrfww，以该黄花不育株与临保系m-6029回交，在220个回交群体中有113个黄花不育，基因型为aabbrfrfww和aabbrfrfww，剩余的107株为黄花可育株，基因型为aabbrfrfww和aabbrfrfww，选择10株黄花可育株进行套袋自交，将收获的种子进行播种，其中在4株上自交套袋收获的种子播种后在花期观察发现所有后代植株全部为黄花可育株，表明这4株亲本植株基因型为aabbrfrfww，剩余6株植株自交套袋收获的种子播种后在花期观察发现它们的后代群体出现黄花可育株与乳黄花可育株的分离，分离比例均约为3：1，表明这6株亲本植株基因型为aabbrfrfww，后代出现的黄花可育株基因型为aabbrfrfww或aabbrfrfww，出现的乳黄花可育株基因型为aabbrfrfww，一共获得了32株乳黄花可育株，这些乳黄花可育株即为甘蓝型油菜乳黄花临保系。
参见图4，将乳黄花隐性核不育纯合两型系种植在母本行，乳黄花临保系种植在父本行，父本与母本的行比为1：2。在花期，除去母本行中的乳黄花可育株aabbrfrfww，留下乳黄花不育株aabbrfrfww，乳黄花临保系作为唯一授粉源。种子成熟后，收获不育株上的种子，即为甘蓝型油菜乳黄花全不育系aabbrfrfww。