本发明具体涉及一种酿酒用籼糯两系不育系的选育方法，属于特种稻育种技术领域。
背景技术：
用糯米为主要原料酿制的糯米酒，以其独特的口味而深受人民喜爱。在水稻育种中，有育种家以酿酒用途为目标进行品种选育，如绍兴市农科所进行以适合酿制黄酒用优质糯稻为目标的品种选育，先后育成绍糯86、绍糯119等品种。酿酒主要以糯米为主，酿酒工业对糯稻的米质及外观指标有一定的要求。糙米率和整精米率影响产酒率，直链淀粉含量的多少、胶稠度的大小对酒的糖度、醇味等都会带来影响。研究表明，适宜于酿制优质高档米酒的糯稻品种的米质标准为：整精米率要在60%以上，直链淀粉＜1.5%，糊化温度(碱值)7.0，胶稠度100mm，米粒要长。
本发明选籼型糯稻保持系、高抗逆性旱稻品种、粗秆、抗倒伏籼稻品种、耐贮藏籼稻品种为杂交亲本、两系不育系作轮回亲本，通过杂交、复交以及花粉培养和后代种植筛选，选育出高产、不育起点温度≤23.0℃、抗旱、抗倒伏、耐储藏的酿酒用籼糯两系不育系。该不育系与相应的恢复系可配组出酿酒用籼糯杂交稻，稻米适合用于酿酒，酿酒糖价高、固形物多、出酒率高。本发明方法科学高效，易于操作，为选育、利用酿酒用优质杂交糯稻的品种资源提供科学方法和依据。
技术实现要素：
本发明的目的在于针对现有育种技术的不足，提供一种可以配组酿酒用优质杂交糯稻的籼糯两系不育系的选育方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
一种酿酒用籼糯两系不育系的选育方法，包括以下步骤：
（1）亲本选择：选籼型糯稻保持系嘉农wx2b为p1，高产抗逆性强的旱稻品种原旱稻3号（优质高产抗旱品种原旱稻3号的选育，中国种业，2014（3）：70-71）为p2，粗秆、抗倒伏籼稻品系辐恢838为p3，耐贮藏水稻品系二秋矮1号（水稻耐贮藏种质资源的筛选，江西农业学报，2008，20(4):17-19）为p4，以p1、p2、p3和p4作为杂交亲本，两系不育系“y58s”或“广占63s”作轮回亲本s；
（2）杂交配组及后代种植、选择方法：
1）作杂交：p1×p2→f1-12；p3×p4→f1-34；
2）种植杂种一代f1-12、f1-34，开花期作杂交f1-12/f1-34，获得复交一代，以f1-1234表示；
3）种植f1-1234，开花期取幼穗，73wt%酒精消毒，8.2℃下处理4天；超净工作台上剥离幼穗，0.1wt%hgcl2溶液消毒10分钟，无菌水清洗5次，吹干花药表面水分后接种于sk3培养基上诱导愈伤组织，接种量为2400-2600个花药；愈伤组织继代1次后置于n6培养基中进行分化诱导，将获得的分化苗置于含3.3mg/l秋水仙素的生根培养基中诱导生根和加倍培养，长成小苗；最后转移到无激素的ms培养基上生根，长成小植株；再移植到温室里种植，去除单倍和多倍体，保留二倍体植株，成熟后单株收种得dh群体，以dh1表示；
4）种植dh1，群体800-900株，在抽穗成熟期，dh1群体选择茎秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、农艺性状优良的单株收获种子得dh2；
5）实验室内采用小型碾米机对收获的dh2单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株取部分种子测定整精米率，选整精米率高的单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
6）在旱地上稀播5）筛选所得dh2单株，每个株系种植群体80-90株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；成熟期选择稻秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、叶片转色好、全生育期115-130天的株系，从中选择优异单株收获种子得dh3；
7）实验室内采用小型糙米机对收获的dh3单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
8）株系种植上选的dh3单株和籼稻两系不育系s，开花期选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大、株系表现整齐不分离的优异株系2-3个，从中各选优异单株2株挂牌为父本，以s为母本进行杂交，得杂交1代以f1-s表示；
9）种植f1-s和不育系s，开花期以s为母本进行回交，得回交1代以bc1f1-s表示；
10）种植bc1f1-s，收种得bc1f2-s；实验室内采用小型糙米机对收获的bc1f2-s种子进行加工出糙，选糙米外观表现糯米性状的白色不透明的糙米粒；种植上选的bc1f2-s糙米粒，开花期选择花粉不育彻底的单株80-100株挂牌标记，移进温度为23℃的人工气候箱割兜再生，开花期观察花粉育性，选花粉育性好、结实率高的单株20-30个单株收种得bc1f3-s；
11）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f3-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
12）旱地上稀播11）筛选所得bc1f3-s，开花期安排在夏天（白天气温在28-38℃）季节，每个株系群体40-45株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；开花期调查育性，选择花粉表现不育的株系10个，从中选植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的单株各5株，取穗子室内显微镜进行花粉镜检，花粉表现完全不育的单株挂牌标记；
13）将12）挂牌标记单株割兜移到温控人工气候温室种植，从雌雄蕊形成期至幼穗分化期温室的温度控制于20-23.3℃，进行育性筛选，选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的可育单株，成熟期单株收种得bc1f4-s；
14）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f4-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
15）株系种植14）上选的bc1f4-s，在温控人工气候温室中对所选株系的花粉育性、不育转化温度进行鉴定，选择不育起点温度≤23.0℃、不育期败育彻底的株系繁殖种子，即育成酿酒用籼糯两系不育系。
本发明的有益效果：
利用本发明方法可以选育出高产、不育起点温度≤23.0℃、抗旱、抗倒伏、耐储藏的酿酒用籼糯两系不育系；该不育系与相应的恢复系可配组出酿酒用籼糯杂交稻，农民种植每亩可增加经济收入480元以上，稻米适合用于酿酒，酿酒糖价高、固形物多、出酒率高；本发明方法科学高效，易于操作，为选育、利用酿酒用优质杂交糯稻的品种资源提供科学方法和依据，充分发挥我国水稻资源优势，对我国酿酒产业的健康发展起到一定的推动作用。
具体实施方式：
实施例1：
（1）亲本选择：选籼型糯稻保持系嘉农wx2b-p1，旱稻品种原旱稻3号-p2，抗倒伏籼稻品系辐恢838-p3，耐贮藏品系二秋矮1号-p4为杂交亲本，两系不育系“y58s”-s作轮回亲本；
（2）杂交配组及后代种植、选择方法：
1）作杂交：p1×p2→f1-12；p3×p4→f1-34；
2）种植杂种一代f1-12、f1-34，开花期作杂交f1-12/f1-34，获得复交一代，以f1-1234表示；
3）种植f1-1234，开花期取幼穗，73wt%酒精消毒，8.2℃下处理4天；超净工作台上剥离幼穗，0.1wt%hgcl2溶液消毒10分钟，无菌水清洗5次，吹干花药表面水分后接种于sk3培养基上诱导愈伤组织，接种量为2400个花药；愈伤组织继代1次后置于n6培养基中进行分化诱导，将获得的分化苗置于含3.3mg/l秋水仙素的生根培养基中诱导生根和加倍培养，长成小苗；最后转移到无激素的ms培养基上生根，长成小植株；再移植到温室里种植，去除单倍和多倍体，保留二倍体植株，成熟后单株收种得dh群体，以dh1表示；
4）种植dh1，群体800株，在抽穗成熟期，dh1群体选择茎秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、农艺性状优良的单株收获种子得dh2；
5）实验室内采用小型碾米机对收获的dh2单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株取部分种子测定整精米率，选整精米率高的单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
6）在旱地上稀播5）筛选所得dh2单株，每个株系种植群体80株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；成熟期选择稻秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、叶片转色好、全生育期115-130天的株系，从中选择优异单株收获种子得dh3；
7）实验室内采用小型糙米机对收获的dh3单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
8）株系种植上选的dh3单株和籼稻两系不育系s，开花期选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大、株系表现整齐不分离的优异株系2个，从中各选优异单株2株挂牌为父本，以s为母本进行杂交，得杂交1代以f1-s表示；
9）种植f1-s和不育系s，开花期以s为母本进行回交，得回交1代以bc1f1-s表示；
10）种植bc1f1-s，收种得bc1f2-s；实验室内采用小型糙米机对收获的bc1f2-s种子进行加工出糙，选糙米外观表现糯米性状的白色不透明的糙米粒；种植上选的bc1f2-s糙米粒，开花期选择花粉不育彻底的单株80株挂牌标记，移进温度为23℃的人工气候箱割兜再生，开花期观察花粉育性，选花粉育性好、结实率高的单株20个单株收种得bc1f3-s；
11）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f3-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
12）旱地上稀播11）筛选所得bc1f3-s，开花期安排在夏天高温季节（白天气温在28-38℃），每个株系群体40株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；开花期调查育性，选择花粉表现不育的株系10个，从中选植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的单株各5株，取穗子室内显微镜进行花粉镜检，花粉表现完全不育的单株挂牌标记；
13）将12）挂牌标记单株割兜移到温控人工气候温室种植，从雌雄蕊形成期至幼穗分化期温室的温度控制于20℃，进行育性筛选，选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的可育单株，成熟期单株收种得bc1f4-s；
14）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f4-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
15）株系种植14）上选的bc1f4-s，在温控人工气候温室中对所选株系的花粉育性、不育转化温度进行鉴定，选择不育起点温度≤23.0℃、不育期败育彻底的株系繁殖种子，即育成酿酒用籼糯两系不育系-酒稻-1s。
酒稻-1s高产、不育起点温度≤22.8℃、抗旱、抗倒伏、耐储藏。酒稻-1s与糯稻恢复系嘉糯恢2号配组的籼糯杂交稻，亩产670公斤，农民种植每亩可增加经济收入490元，稻米适合用于酿酒，酿酒糖价高、固形物多、出酒率高。
实施例2：
（1）亲本选择：选籼型糯稻保持系嘉农wx2b-p1，高产抗逆性强的旱稻品种原旱稻3号-p2，粗秆、抗倒伏籼稻品系辐恢838-p3，耐贮藏水稻品系二秋矮1号-p4为杂交亲本，两系不育系广占63s-s作轮回亲本；
（2）杂交配组及后代种植、选择方法：
1）作杂交：p1×p2→f1-12；p3×p4→f1-34；
2）种植杂种一代f1-12、f1-34，开花期作杂交f1-12/f1-34，获得复交一代，以f1-1234表示；
3）种植f1-1234，开花期取幼穗，73wt%酒精消毒，8.2℃下处理4天；超净工作台上剥离幼穗，0.1wt%hgcl2溶液消毒10分钟，无菌水清洗5次，吹干花药表面水分后接种于sk3培养基上诱导愈伤组织，接种量为2600个花药；愈伤组织继代1次后置于n6培养基中进行分化诱导，将获得的分化苗置于含3.3mg/l秋水仙素的生根培养基中诱导生根和加倍培养，长成小苗；最后转移到无激素的ms培养基上生根，长成小植株；再移植到温室里种植，去除单倍和多倍体，保留二倍体植株，成熟后单株收种得dh群体，以dh1表示；
4）种植dh1，群体900株，在抽穗成熟期，dh1群体选择茎秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、农艺性状优良的单株收获种子得dh2；
5）实验室内采用小型碾米机对收获的dh2单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株取部分种子测定整精米率，选整精米率高的单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
6）在旱地上稀播5）筛选所得dh2单株，每个株系种植群体80-90株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；成熟期选择稻秆粗壮、株型紧凑、有效分蘖数在10-12个、稻谷粒长8.0mm以上、结实率达86%以上、叶片转色好、全生育期115-130天的株系，从中选择优异单株收获种子得dh3；
7）实验室内采用小型糙米机对收获的dh3单株种子进行加工出糙，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
8）株系种植上选的dh3单株和籼稻两系不育系s，开花期选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大、株系表现整齐不分离的优异株系3个，从中各选优异单株2株挂牌为父本，以s为母本进行杂交，得杂交1代以f1-s表示；
9）种植f1-s和不育系s，开花期以s为母本进行回交，得回交1代以bc1f1-s表示；
10）种植bc1f1-s，收种得bc1f2-s；实验室内采用小型糙米机对收获的bc1f2-s种子进行加工出糙，选糙米外观表现糯米性状的白色不透明的糙米粒；种植上选的bc1f2-s糙米粒，开花期选择花粉不育彻底的单株100株挂牌标记，移进温度为23℃的人工气候箱割兜再生，开花期观察花粉育性，选花粉育性好、结实率高的单株30个单株收种得bc1f3-s；
11）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f3-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
12）旱地上稀播11）筛选所得bc1f3-s，开花期安排在夏天高温季节（白天气温在28-38℃），每个株系群体45株，播种完浇透水，之后不再浇水，播种后25天对秧苗进行抗旱性筛选，去除分蘖差、植株细弱、叶片发黄的苗，选分蘖力强、植株生长旺盛、叶片绿的稻苗，移植到水田；开花期调查育性，选择花粉表现不育的株系10个，从中选植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的单株各5株，取穗子室内显微镜进行花粉镜检，花粉表现完全不育的单株挂牌标记；
13）将12）挂牌标记单株割兜移到温控人工气候温室种植，从雌雄蕊形成期至幼穗分化期温室的温度控制于23.3℃，进行育性筛选，选择植株茎秆粗壮、叶片直立、剑叶短、单株穗数多、穗头大的可育单株，成熟期单株收种得bc1f4-s；
14）实验室内采用小型碾米机对收获的bc1f4-s单株种子进行加工筛选，选糙米粒长7.2mm以上、糙米率＞80%、糙米表现糯米性状的白色不透明且没有分离的单株；上选单株种子进行高温耐储藏性筛选，选择耐储藏单株；上选耐储藏单株稻米进行直链淀粉含量和糊化温度测定，选择直链淀粉含量＜1.2%、糊化温度(碱值)＜7.0、胶稠度100mm的单株；
15）株系种植14）上选的bc1f4-s，在温控人工气候温室中对所选株系的花粉育性、不育转化温度进行鉴定，选择不育起点温度≤23.0℃、不育期败育彻底的株系繁殖种子，即育成酿酒用籼糯两系不育系-酒稻-2s。
酒稻-1s高产、不育起点温度≤22.6℃、抗旱、抗倒伏、耐储藏。酒稻-2s与糯稻恢复系嘉糯恢2号配组的籼糯杂交稻，亩产682公斤，农民种植每亩可增加经济收入485元，稻米适合用于酿酒，酿酒糖价高、固形物多、出酒率高。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。