苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基与流程

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基。

背景技术：

传统组培过程繁杂的技术环节，都是围绕防止污染而制定的，控制污染成了组培中的首要技术，不能把污染率降低到可以接受的范围，也就意味着这项工艺不能进行下去，而影响污染的因素多种多样，如外植体的种类，取材的季节、时间、预处理方法，消毒药剂的种类，浓度，消毒时间以及消毒方法，培养基和器皿的灭菌，操作人员、工作坏境的要求等都与污染密切相关，因此，使得污染问题十分复杂，很难防治，成为限制组培产业化的重要原因之一。

技术实现要素：

组培过程中的污染，主要表现为培养基的污染。营养丰富的培养基为细菌、真菌提供了适宜的滋生场所，因此，只要将培养基改造成既保证植物组织正常生长，又具有杀菌、抗菌功能的培养基，菌类一旦失去滋生场所，就不会对组培过程造成危害。

解决了污染问题，使组培过程脱离严格的无菌坏境，从根本上简化组培环节，进行开放式组织培养是完全可能的，而关键是找到一种能够添加到培养基的抑菌剂。不经高压灭菌，使培养基成分免遭破坏，接种免超净工作台；还可利用不耐热的一次性航空杯等代替组培瓶，方便运输，从而简化组培环节，降低组培成本，提高组培效率，建立一套完整可行的开放式组织培养模式。

抑菌剂的种类很多，如多菌灵，大蒜素，青霉素，百菌清，神仙水，山农一号等。由于苹果组培苗未进行过开放式培养，此试验的主要目的是探究苹果生根开放式培养的可能性，通过观察记录苹果组培苗在开放式培养过程中的污染情况、生长情况、生根情况，找到合适的抑菌剂和容器。

本发明的目的在于公开了苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法。

本发明的第二个目的在于公开了用于上述开放式培养方法的培养基。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，包括下述步骤：

(1)选取苹果矮化砧木p3组培苗和苹果矮化砧木mark组培苗；

(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木p3组培苗和苹果矮化砧木mark组培苗转接到含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基中进行生根培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；所述生根培养基的组成为1/2ms中加入iba2.0mg/l、糖30g/l和琼脂6g/l；所述生根培养基未经高温灭菌。0.01％～0.015％是神仙水在生根培养基中的浓度。

上述技术方案所述的苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法，其中：盛放生根培养基的容器为航空杯。

用于苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法的培养基，其中：所述培养基为含有0.01％～0.015％神仙水的生根培养基；所述生根培养基的组成为1/2ms中加入iba2.0mg/l、糖30g/l和琼脂6g/l；所述生根培养基未经高温灭菌。

本发明具有以下有益效果：

1、本发明通过在生根培养基中加入抑菌剂神仙水，保证植物组织正常生长，又具有杀菌、抗菌功能。菌类一旦失去滋生场所，就不会对组培过程造成危害。

2、本发明通过在生根培养基中加入抑菌剂神仙水，解决了污染问题，使组培过程脱离严格的无菌坏境，从根本上简化组培环节，进行开放式组织培养是完全可能的，而关键是找到一种能够添加到培养基的抑菌剂。不经高压灭菌，使培养基成分免遭破坏，接种免超净工作台；还可利用不耐热一次性航空杯等代替组培瓶，方便运输，从而简化组培环节，降低组培成本，提高组培效率，建立一套完整可行的开放式组织培养模式。

附图说明：

1、图1为苹果矮化砧木p3组培苗在含有0.01％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。

2、图2为苹果矮化砧木mark组培苗在含有0.01％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。

3、图3为苹果矮化砧木p3组培苗在含有0.015％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。

4、图4为苹果矮化砧木mark组培苗在含有0.015％神仙水的生根培养基中开放培养生长情况。

5、图5为苹果矮化砧木p3组培苗在山农一号(0.01％)饭盒中的苗情。

6、图6为苹果矮化砧木p3组培苗在山农一号(0.01％)航空杯中的苗情。

7、图7为苹果矮化砧木p3组培苗在神仙水(0.015％)饭盒中的苗情。

具体实施方式：

为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法及所用培养基作进一步的说明。

实施例1：苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法：

(1)选取苹果矮化砧木p3组培苗和苹果矮化砧木mark组培苗；

(2)将步骤(1)选取的苹果矮化砧木p3组培苗和苹果矮化砧木mark组培苗转接到含有0.01％神仙水的生根培养基中进行生根培养；所述生根培养基的组成为1/2ms中加入iba2.0mg/l、糖30g/l和琼脂6g/l；所述生根培养基未经高温灭菌；盛放生根培养基的容器为航空杯。

苹果矮化砧木p3组培苗的开放培养生长情况见图1所示。苹果矮化砧木mark组培苗的开放培养生长情况见图2所示。

实施例2：苹果矮化砧木组培苗生根阶段开放式培养方法：

本实施例的过程与实施例1相同，区别在于：神仙水的浓度为0.015％。

苹果矮化砧木p3组培苗的开放培养生长情况见图3所示。苹果矮化砧木mark组培苗的开放培养生长情况见图4所示。

以下通过具体试验例对本发明的开放式培养方法和所用培养基具有的有益效果作进一步的说明。

试验例1：

一、试验材料：

1、材料：

苹果矮化砧木p3和mark组培苗。来自北京市海淀区植物组织培养技术实验室组培瓶苗。

2、抑菌剂：

山梨酸钾，南通奥凯生物技术开发有限公司；

山农一号，济南普朗特生物科技有限公司三型；

神仙水，北京振泰园艺设施有限公司。

3、容器：

一次性航空杯、一次性塑料饭盒。

二、试验方法：

1、抑菌剂筛选试验：选取基本一致的组培瓶苗转接到含不同抑菌剂的生根培养基(所述生根培养基的组成为1/2ms培养基中加入iba2.0mg/l、糖30g/l和琼脂6g/l)中，生根培养基不进行高温消毒；其中生根培养基中含有的抑菌剂浓度分别为：山梨酸钾2.5％、山农一号0.01％、山农一号0.015％、神仙水0.01％和神仙水0.015％。

每种抑菌剂处理5瓶、每瓶6株，共计处理30株，重复3次，以不加抑菌剂正常高温消毒的生根培养基为对照。

2、容器筛选试验：每次试验选不同类型容器各5个进行生根培养基的配制，重复3次。

3、观察记录：每周观察记录组培苗的生长情况、植株高矮、叶片大小及颜色、污染情况和生根时间等内容；四周后统计生根情况，重点统计生根条数和根的长度。

4、抗菌培养基的制备：培养基煮好后，根据不同培养目的，加入不同浓度的抑菌剂，然后，分装到一次性航空杯和一次性塑料饭盒，航空杯用pe保鲜膜封口，饭盒用盖子封口。

5、在相对干净的接种室内，用75％的酒精将接种台面和手擦干净，揭开封口膜一角，用已灭菌的接种器具，把组培瓶苗接种到含不同抑菌剂的生根培养基，然后再将杯口封严即可。

6、将已接好的植物材料置于培养架培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d；培养过程中，及时清理污染的组培苗，减少污染源。

三、结果与分析：

1、不同抑菌剂对组培苗污染和生根的影响：

在开放式培养过程中，不同抑菌剂对苹果矮化砧木p3组培苗和苹果矮化砧木mark组培苗的污染和生根情况均有影响。

1.1不同抑菌剂对苹果矮化砧木p3和mark组培苗的污染影响：

表1开放式培养过程中不同抑菌剂的污染情况(％)

从表1中可以看出，效果最好的抑菌剂是神仙水，组培苗的污染率为0；其次是山农一号，组培苗的污染率在0～25％之间；最差的是山梨酸钾，污染率为100％。

1.2不同抑菌剂对苹果矮化砧木p3和mark组培苗的生根情况影响：

表2开放式培养过程中不同抑菌剂的生根情况(％)

从表2中可以看出，抑菌剂能影响苹果矮化砧木组培苗生根，对不同品种组培苗生根的影响也有差异。开放式培养过程中加入0.01％～0.015％山农一号和神仙水，可以促进苹果矮化砧木p3组培苗生根，生根率最高达到96.7％，比对照提高13.4个百分点；加入0.01％～0.015％神仙水，可以促进苹果矮化砧木mark组培苗生根，生根率最高达到100％，比对照提高10个百分点。

2、不同容器对组培苗污染和生根的影响：

表3苹果矮化砧木p3组培苗开放式培养过程中不同容器的污染和生根情况

从表3中可以看出，开放式培养过程中，不同容器的污染率主要取决于抑菌剂种类。在加入0.01％山农一号作为抑菌剂的情况下，一次性塑料饭盒的污染率高于一次性航空杯；加入0.015％神仙水的情况下，不同容器中苹果矮化砧木组培苗的污染率无差异。但是在一次性塑料饭盒中生长的组培苗叶片发黄，不易生根，易死苗。

苹果矮化砧木p3组培苗在山农一号饭盒中的苗情如图5所示；苹果矮化砧木p3组培苗在山农一号航空杯中的苗情如图6所示；苹果矮化砧木p3组培苗在神仙水饭盒中的苗情如图7所示；苹果矮化砧木p3组培苗在神仙水航空杯中的苗情如图3所示。

初步试验结果表明：以一次性航空杯为容器，添加0.01％～0.015％神仙水为抑菌剂，可以进行苹果矮化砧木p3和mark组培苗生根阶段的开放式培养。可提高生根率，简化培养程序，降低苗木生产成本，值得进一步推广应用。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。