一种利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法与流程

本发明属于儿菜种植技术领域，尤其涉及一种利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法。

背景技术：

儿菜，学名抱子芥(brassicajunceavar.gemmiferalin.)，是十字花科芸薹属芥菜种的一个变种，俗称角儿菜、芽芽菜、抱儿菜等，于1987年由杨以耕、陈才林、苏修富等命名为抱子芥。儿菜幼苗生长到一定阶段，从叶腋处长出的芽不断膨大，形成食用器官儿芽(芽块)。儿菜营养丰富，品质细嫩，味道鲜美，吃法多样，炒、烩、炸、涮、凉拌、作汤、腌泡均可，是西南地区的特色蔬菜之一。儿菜属于两年生植物，播种当年进行营养生长，越冬后翌年春夏季抽苔、开花、结实。儿菜留种主要有两种方法，即大株留种和小株留种。大株留种目标性状选择容易，但由于儿菜普遍存在抗逆性差、茎腐病重等问题，茎及芽块在第一年就可能空心腐烂，造成第二年收获不到种子或是种子质量差；小株留种目标性状选择难，导致儿菜种子纯度不达标。

综上所述，现有技术存在的问题是：儿菜留种方法存在抗逆性差、茎腐病重；目标性状选择难，导致儿菜种子纯度不达标。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法。

本发明是这样实现的，一种利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法，所述利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法用解剖刀切取优良株腋芽，装入尼龙网袋中；将腋芽切分成多个1cm³的小腋芽块，接种在预培养基1/2ms上进行培养，对芽块进行初步筛选，得到无菌、状态良好的芽块；接种在含有0.1mg·l^-1naa和0.3mg·l^-16-ba的诱导培养基上；以培养30d后的不定芽为外植体，在ms增殖培养基上添加0.3mg·l^-16-ba和0.1mg·l^-1naa，得到芽丛，增加幼苗数量，达到扩繁目的，继代培养30d后选择壮苗接入生根培养基中。

进一步，用解剖刀切取优良株腋芽，每株取15-20个腋芽，装入一个尼龙网袋中并编号，经流水冲洗一夜后，放入加有洗洁精的水溶液中搅拌20分钟，脱水后用双蒸水冲洗3-5次。

进一步，所述装入尼龙网袋中后需要：

在超净台中，将儿菜放入70％的酒精溶液中消毒30s，倒去酒精，用无菌水洗3次，再放入加有几滴吐温的2％的次氯酸钠溶液消毒20min，期间不断搅拌，倒掉溶液，用无菌水冲洗4～5遍，得到无菌的外植体；

以1/2ms、ms为基本培养基，所有培养基添加30g/l白砂糖，8g/l琼脂，激素浓度配比按培养阶段进行调整，调节ph＝5.8，在121℃高压灭菌20min。培养温度为25±2℃，每天光照12～14h，光照强度1500～2000lx。

进一步，取出腋芽放在灭过菌的滤纸上，剥去表面1-2层叶片，从腋芽中部横向剖开，将腋芽切分成多个1cm³的小腋芽块，接种在预培养基1/2ms上进行培养；每个培养皿上接种8个外植体。

进一步，预培养后，选择无污染的外植体，接种在含有0.1mg·l^-1naa和0.3mg·l^-16-ba的诱导培养基上，每瓶接种5个外植体。

进一步，以培养30d后的不定芽为外植体，在ms增殖培养基上添加0.3mg·l^-16-ba和0.1mg·l^-1naa，每瓶接种4个外植体；继代培养30d后选择壮苗接入生根培养基中，其余小苗继续进行增殖培养。

进一步，生根培养基以ms为基本培养基，添加0.1mg·l^-1naa；

将获得的带根分生苗，进行2-3天的开瓶炼苗，清洗除去附在根上的培养基，移栽到温室大棚中。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法培育的儿菜。

本发明的优点及积极效果为：将试管苗移栽至温室大棚，经过低温春化后，试管苗在第二年春天开花并结果，在大棚中收获到种子，可用于接下来的儿菜良种选育。本发明在儿菜消毒时利用低毒的次氯酸钠溶液消毒20min，效果最佳，代替用高毒的升汞消毒，更环保安全；2、已有的儿菜快繁技术，都直接采用种子作为外植体，而本发明利用芽块作为外植体材料，能直接对优良性状个体进行选择，目标个体更明确，同时还可避免因儿菜茎或芽块腐烂无法留种的问题；3、已有的儿菜快繁技术，都是为了利用较少的材料，得到更多的儿菜幼苗，减少种子的成本，而本发明应用于儿菜育种，筛选优良的个体，快速获得儿菜种子，比传统育种方法缩短2～3年的育种年限。

附图说明

图1是本发明实施例提供的利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明选择目标性状优良的单株作为材料进行儿菜组织培养及快繁，越冬后将试管苗移栽到大田，使其不进行营养生长，直接进入生殖生长，以期获得质量好的种子，开展儿菜良种选育，为生产提供优质种子。

实施例1适宜诱导培养基配方的获得

选择预培养后无污染的外植体，接种在含有不同的激素的ms诱导培养基上。最适激素配比的筛选采用随机区组设计，设计添加激素浓度组合6-ba(0.1，0.3,1.0mg·l-1)和naa(0，0.1,0.2mg·l-1)共9个处理，每个处理10瓶，每瓶接种5个外植体。培养10d后调查统计愈伤组织形成率，结果见表1。得到适宜的诱导培养基配方：ms+0.1mg·l^-1naa+0.3mg·l^-16-ba

实施例2适宜生根培养基配方的获得

选择继代培养30d后的壮苗，接种在含有不同的激素的1/2ms生根培养基上。最适激素配比的筛选采用随机区组设计，设计添加激素浓度组合6-ba(0，0.5mg·l-1)和naa(0.1，0.5，1.0mg·l-1)共6个处理。每个处理20瓶，每瓶接种壮苗2株。培养10d后观察统计生根情况。结果见表2。得到适宜的生根培养基配方：ms+0.1mg·l^-1naa

如图1所示，一种利用芽块进行儿菜组织培养及繁殖的方法包括以下步骤：

s101：用解剖刀切取优良株腋芽，每株取15-20个腋芽，装入一个尼龙网袋中并编号，经流水冲洗一夜后，放入加有洗洁精的水溶液中搅拌20分钟左右，脱水后用双蒸水冲洗3-5次，备用；

s102：在超净台中，将儿菜放入70％的酒精溶液中消毒30s，倒去酒精，用无菌水洗3次，再放入加有几滴吐温的2％的次氯酸钠溶液消毒20min，期间不断搅拌，倒掉溶液，用无菌水冲洗4～5遍，得到无菌的外植体，备用；

s103：以1/2ms、ms为基本培养基，所有培养基添加30g/l白砂糖，8g/l琼脂，激素浓度配比按培养阶段进行调整，调节ph＝5.8，在121℃高压灭菌20min。培养温度为25±2℃，每天光照12～14h，光照强度1500～2000lx；

s104：取出腋芽放在灭过菌的滤纸上，剥去表面1-2层叶片，从腋芽中部横向剖开，将腋芽切分成多个1cm3的小腋芽块，接种在预培养基1/2ms上进行培养；每个培养皿上接种8个外植体；

s105：预培养一段时间后，选择无污染的外植体，接种在含有0.1mg·l^-1naa和0.3mg·l^-16-ba的诱导培养基上，每瓶接种5个外植体；7天左右所有的材料开始形成浅绿色颗粒状的愈伤组织，具有分化能力；再过7d左右，开始有不定芽分化出来；

s106：以培养30d后的不定芽为外植体，在ms增殖培养基上添加0.3mg·l^-16-ba)和0.1mg·l^-1naa，每瓶接种4个外植体；继代培养30d后选择壮苗接入生根培养基中，其余小苗继续进行增殖培养；

s107：生根培养基以ms为基本培养基，其中添加0.1mg·l^-1naa，7d左右长出白色粗壮实根；

s108：将获得的带根分生苗，进行2-3天的开瓶炼苗，清洗除去附在根上的培养基，移栽到温室大棚中，一星期后观察，全部成活。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。