一种含有菊芋叶提取液的组合物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及一种含有菊芋叶提取液的组合物及其制备方法和应用，尤其涉及含有菊芋叶提取液的组合物在防治苹果病毒病方面的应用，属于病毒病防治技术领域。

背景技术：

近年来，受多种因素的影响，病毒病对植物的危害逐年加重，由次要病害上升为主要病害，已成为一种重要病害，主要表现在发病程度重，发病面积多，防治效果不理想，已成为制约产业发展的重要因素之一。目前世界上报道的仅苹果病毒病有39种，我国已检测到17种，造成我国病毒病的病原有病毒和类病毒两种。病毒病是系统性病害，一旦感病则终身带毒，最终导致树体衰弱死亡。

以苹果上病毒病为例，病毒病从症状上可以分为两大类：潜隐性病毒和非潜隐性病毒。潜隐性病毒顾名思义其在果树外观上没有明显的症状表现，但是会造成树体长势衰弱，枝条发芽率降低，嫁接不亲和，分枝能力降低，造成产量降低，最终导致树体死亡；非潜隐性病害症状明显，易于识别，症状表现在叶片和果实上。叶片上的症状多为花叶，也表现为小叶，极大影响果树光合作用，降低产量，严重时导致树体死亡，如图1所示。果实上症状表现多为花果，表面凹凸不平，丧失经济价值，如图2所示。

目前，苹果病毒病的防治措施主要通过预防和切断传播途径为主，辅助喷施植物免疫诱抗剂(蛋白类)，可以激活树体的免疫相关通路，有一定治愈效果。而对于花果病，目前尚未有有效治愈药剂。

技术实现要素：

本发明针对上述问题，提供了一种含有菊芋叶提取液的组合物及其制备方法和应用，试验证明，本发明组合物显著降低病毒基因组的积累，进而降低病毒蛋白的表达，能够有效防治植物病毒病。。本发明的技术方案如下：

一种含有菊芋叶提取液的组合物，包括以下组分：

菊芋叶提取液、含锌化合物和含铜化合物的组合物、聚天门冬氨酸、复合氨基酸、葡聚烯糖、三氮唑核苷、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液、玉米素发酵液、蜂蜡精提醇粉。

优选的，所述含锌化合物选自乙酸锌或柠檬酸锌，所述含铜化合物选自乙酸铜或柠檬酸铜。

本发明组合物还包括辅料，所述辅料为y－环糊精、水杨酸钠、山梨酸钾和吐温80。

进一步的，本发明组合物，包括以下按重份数计的组分：菊芋叶提取液50－100份、含锌化合物和含铜化合物的组合物1－3份、聚天门冬氨酸1－3份、复合氨基酸5－15份、葡聚烯糖0.1－0.3份、三氮唑核苷5－15份、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液5－10份、玉米素发酵液5－10份、蜂蜡精提醇液0.5－3份；y－环糊精10－15份、水杨酸钠0.5－1份、山梨酸钾和吐温800.5－1份；其中，含锌化合物和含铜化合物的重量比为1：99－99：1。

优选的，本发明组合物，包括以下按重份数计的组分：菊芋叶提取液60份、含锌化合物和含铜化合物的组合物2份、聚天门冬氨酸2份、复合氨基酸10份、葡聚烯糖0.2份、三氮唑核苷10份、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液10份、玉米素发酵液5份、蜂蜡精提醇液1份；y－环糊精10份、水杨酸钠0.5份、山梨酸钾和吐温800.5份；其中，含锌化合物和含铜化合物的重量比为1：1。

进一步的，上述组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)将菊芋叶提取液加温至40－50℃，恒温；加入聚天门冬氨酸，搅拌均匀后，再边搅拌边加入复合氨基酸，搅拌至完全溶解，获得混合物a；

(2)向混合物a中缓慢加入柠檬酸，调节液体ph为4－5，持续搅拌；

(3)在搅拌状态下，依次缓慢加入三氮唑核苷和葡聚烯糖，搅拌至完全溶解，停止加温；边搅拌边加入y－环糊精，溶解后持续搅拌30－90min；

(4)稳定冷却至15－25℃，搅拌状态下依次加入植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液、玉米素发酵液和蜂蜡精提醇液(主要成分为正三十烷醇)；

优选的，所述植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液中植物免疫蛋白的含量为0.1％(质量分数)、玉米素发酵液中玉米素含量为200ppm；

(5)搅拌状态下，加入含锌化合物和含铜化合物的组合物，至完全溶解；

(6)搅拌状态下加入山梨酸钾和吐温，搅拌均匀，且完全溶解，即得防治病毒病的组合物。

进一步的，所述菊芋叶提取液的制备方法：

鲜菊芋叶100份洗净粗粉碎，加入到预先加入5份乙酸乙酯的装有350－400份去离子水的搅拌反应釜中，常温下搅拌浸泡3天，甩干，捞出，再加入新鲜菊芋叶100份浸泡3天，浸提3次；过滤浸清液后加入水杨酸钠5份，即得菊芋叶提取液。

进一步的，本发明还包括组合物在防治病毒病的应用方法，兑水喷雾使用，每千克水中含本发明组合物0.5－15ml。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

本发明相较于现有技术中的产品对病毒病具有非常好的防治效果，室内试验证明，本发明组合物明显降低病毒基因组复制的积累同时降低蛋白的表达，减轻植物病毒病的症状表型；本发明组合物对苹果花脸病毒病的矫正防效达到83.3％，而常规对照区防效为72％；已发生葡萄病毒病的植株经过喷施本发明组合物后，病毒病症状较对照明显改善，已经停长的生长点开始抽芽生长，新生成叶片平展，无花叶畸形现象，且植株可以正常进行光合作用。

附图说明

图1为苹果花叶症状；

图2为苹果花果症状；

图3为施用本发明组合物对黄瓜花叶病毒的防治效果图；

图4为系统叶片northernblot检测cmv基因组和westernblot检测cmv表达蛋白图；

图5为本发明组合物对苹果花脸病毒病的防治效果图；

图6为本发明组合物对葡萄扇叶病毒病的防治效果图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

本发明中所使用的的化合物、药剂等除特殊说明，均为市购。

实施例1：一种用于防治病毒病的组合物及其制备方法

组合物包括以下组分：菊芋叶提取液60份、含乙酸铜和乙酸锌的组合物2份、聚天门冬氨酸2份、复合氨基酸10份、葡聚烯糖0.2份、三氮唑核苷10份、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液10份、玉米素发酵液5份、蜂蜡精提醇液1份；y－环糊精10份、水杨酸钠0.5份、山梨酸钾和吐温800.5份；其中，乙酸铜和乙酸锌的重量比为1：1。

上述组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)菊芋叶提取液的制备：鲜菊芋叶100份洗净粗粉碎，加入到预先加入5份乙酸乙酯的装有370份去离子水的搅拌反应釜中，常温下搅拌浸泡3天，甩干，捞出，再加入新鲜菊芋叶100份浸泡3天，浸提3次；过滤浸清液后加入水杨酸钠5份，即得菊芋叶提取液：

(2)将菊芋叶提取液加温至45℃，恒温；加入聚天门冬氨酸，搅拌均匀后，再边搅拌边加入复合氨基酸，搅拌至完全溶解，获得混合物a；

(3)向混合物a中缓慢加入柠檬酸，调节液体ph为4.5，持续搅拌；

(4)在搅拌状态下，依次缓慢加入三氮唑核苷和90％葡聚烯糖，搅拌至完全溶解，停止加温；边搅拌边加入y－环糊精，溶解后持续搅拌80min；

(5)稳定冷却至20℃，搅拌状态下依次加入植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液、玉米素发酵液和蜂蜡精提醇液(主要成分为正30烷醇)；

所述植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液中植物免疫蛋白的含量为0.1％(质量分数)、玉米素发酵液中玉米素含量为200ppm；

(6)搅拌状态下，加入乙酸铜和乙酸锌，至完全溶解；

(7)搅拌状态下加入山梨酸钾和吐温，搅拌均匀，且完全溶解，即得防治病毒病的组合物。

实施例2：一种用于防治病毒病的组合物及其制备方法

组合物包括以下组分：菊芋叶提取液80份、含柠檬酸锌和柠檬酸铜的组合物3份、聚天门冬氨酸1份、复合氨基酸13份、葡聚烯糖0.1份、三氮唑核苷7份、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液7份、玉米素发酵液8份、蜂蜡精提醇液2份；y－环糊精12份、水杨酸钠0.8份、山梨酸钾和吐温800.7份；其中，柠檬酸锌和柠檬酸铜的重量比为1：3；

上述组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)菊芋叶提取液的制备：鲜菊芋叶100份洗净粗粉碎，加入到预先加入5份乙酸乙酯的装有400份去离子水的搅拌反应釜中，常温下搅拌浸泡3天，甩干，捞出，再加入新鲜菊芋叶100份浸泡3天，浸提3次；过滤浸清液后加入水杨酸钠5份，即得菊芋叶提取液：

(2)将菊芋叶提取液加温至40℃，恒温；加入聚天门冬氨酸，搅拌均匀后，再边搅拌边加入复合氨基酸，搅拌至完全溶解，获得混合物a；

(3)向混合物a中缓慢加入柠檬酸，调节液体ph为5，持续搅拌；

(4)在搅拌状态下，依次缓慢加入三氮唑核苷和90％葡聚烯糖，搅拌至完全溶解，停止加温；边搅拌边加入y－环糊精，溶解后持续搅拌40min；

(5)稳定冷却至25℃，搅拌状态下依次加入植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液、玉米素发酵液和蜂蜡精提醇液(主要成分为正30烷醇)；

所述植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液中植物免疫蛋白的含量为0.1％(质量分数)、玉米素发酵液中玉米素含量为200ppm；

(6)搅拌状态下，加入乙酸铜和乙酸锌，至完全溶解；

(7)搅拌状态下加入山梨酸钾和吐温，搅拌均匀，且完全溶解，即得防治病毒病的组合物。

实施例3：一种用于防治病毒病的组合物及其制备方法

组合物包括以下组分：菊芋叶提取液90份、乙酸锌和柠檬酸铜的组合物3份、聚天门冬氨酸3份、复合氨基酸14份、葡聚烯糖0.3份、三氮唑核苷8份、植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液6份、玉米素发酵液8份、蜂蜡精提醇液1份；y－环糊精11份、水杨酸钠1份、山梨酸钾和吐温801份；其中，乙酸锌和柠檬酸铜的重量比为2：1。

上述组合物的制备方法，具体步骤如下：

(1)菊芋叶提取液的制备：鲜菊芋叶100份洗净粗粉碎，加入到预先加入5份乙酸乙酯的装有350份去离子水的搅拌反应釜中，常温下搅拌浸泡3天，甩干，捞出，再加入新鲜菊芋叶100份浸泡3天，浸提3次；过滤浸清液后加入水杨酸钠5份，即得菊芋叶提取液：

(2)将菊芋叶提取液加温至40℃，恒温；加入聚天门冬氨酸，搅拌均匀后，再边搅拌边加入复合氨基酸，搅拌至完全溶解，获得混合物a；

(3)向混合物a中缓慢加入柠檬酸，调节液体ph为4，持续搅拌；

(4)在搅拌状态下，依次缓慢加入三氮唑核苷和90％葡聚烯糖，搅拌至完全溶解，停止加温；边搅拌边加入y－环糊精，溶解后持续搅拌60min；

(5)稳定冷却至20℃，搅拌状态下依次加入植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液、玉米素发酵液和蜂蜡精提醇液(主要成分为正30烷醇)；

所述植物免疫蛋白(疫霉菌属)提取液中植物免疫蛋白的含量为0.1％(质量分数)、玉米素发酵液中玉米素含量为200ppm；

(6)搅拌状态下，加入乙酸铜和乙酸锌，至完全溶解；

(7)搅拌状态下加入山梨酸钾和吐温，搅拌均匀，且完全溶解，即得防治病毒病的组合物。

试验例1：室内试验

黄瓜花叶病毒(cmv，cucumbermosaicvirus)是目前已知的寄主范围最广的植物病毒之一。本试验采用本发明组合物喷施接种cmv的植株，以测定本发明组合物对cmv的防治效果。试验设3个处理，健康植株、对照组(接种cmv未喷施本发明物)和处理组(接种cmv后喷施本化合物)，每个处理重复3次。喷施28天后，对照组植株产生轻微花叶和严重皱缩，株高明显降低；处理组叶片逐渐伸展，无花叶症状，如图3所示。

利用northernblot和westernblot分别检测对cmv的rna和蛋白的积累水平的影响，系统叶片总rna的northernblot检测结果表明，喷施28天后显著降低cmv基因组的积累水平，如图4所示；系统叶片cp蛋白的westernblot检测结果表明，喷施化合物28后，显著降低cmvcp的表达水平。

综上所述，喷施本发明组合物显著降低cmv基因组复制的积累同时降低蛋白的表达，能够有效防治黄瓜花叶病毒病。。

试验例2：本发明组合物对苹果病毒病的防治

1.供试作物

苹果——长富2号，晚熟条红红富士品种。

2.试验地点

试验安排在烟台市牟平区宁海街道城北村。苹果园乔化种植，果实套袋管理，株行距3米×4米，树龄25年，黏壤土，往年苹果花脸病毒病较重，管理水平中等偏上。

3.试验设计和安排

试验设试验区、常规对照区和空白对照区三个处理，试验区喷施本发明组合物，常规对照区喷施市场上购买植物免疫蛋白，其中各选择往年苹果花脸病毒病较重的苹果树4株作为试验区和常规对照区，选择往年苹果花脸病毒病较重的苹果树3株作为对照区，各处理苹果树随机选择。

4.试验时间和方法

在苹果盛花期，使用背负式喷雾器喷施本发明组合物100倍液、植物免疫蛋白100倍液，重点喷施部位为苹果花器；每株数喷施药液3公斤。

5.调查方法

于苹果摘袋后10天左右，苹果着色后，调查发病情况。调查方法：每个处理调查3株树，每株数按东、西、南、北、中五个方向随机调查40个果实，共200个果实，统计病果数，并分别记载病级，分析防治效果。

病果分级标准：共分5级。

0级，无病果；

1级，有商品价值，凹凸或花脸面积占整个果实面积5％以下；

3级，有商品价值，凹凸或花脸面积占整个果实面积6％－10％；

5级，无商品价值，凹凸或花脸面积占整个果实面积10％以上；

结果与分析由表1可见，苹果树喷施本发明组合物后，苹果花脸病毒病显症率较空白对照显著下降，病果率仅有14％，其中病果具有商品价值的占9％，如图5所示，仅有5％的病果没有商品价值。常规对照区病果率25％，其中病果具有商品价值的占13.3％，如图5所示。本发明组合物对苹果花脸病毒病的矫正防效达到83.3％，常规对照区防效为72％，处理区防治效果显著优于常规对照区。

表1苹果花脸病防治效果表

试验例3：本发明组合物对葡萄病毒病的防治

1.供试作物

葡萄——阳光玫瑰，晚熟品种。

2.试验地点

试验安排在烟台市牟平区宁海街道城北村。葡萄篱架栽培，当年定植，管理水平中等偏上。

3.试验设计和安排

试验设试验区和对照区两个处理，其中选择定植后具有病毒病症状植株作为试验区(本发明组合物施药区)，选择其中4株作为对照区，各处理随机选择。

4.试验时间和方法

在葡萄苗期，使用背负式喷雾器分别喷施本发明组合物和植物核糖核酸营养剂100倍液，重点喷施部位为生长点处。

结果与分析

葡萄病毒病表现为叶片畸形，小叶，不能进行光合作用，顶端生长点坏死，不能进行生长。喷施本发明组合物后，毒病症状较对照明显改善，表现在生长点开始生长，新生成叶片平展，无花叶症状，植株可以正常进行光合作用，如图6所示。