一种连香树离体快速繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及农业生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种连香树离体快速繁殖方法。
【背景技术】
[0002]连香树(又名五君树、山白果、紫荆叶木等，
为第三纪孑遗单种植物，间断分布于中国和日本，为我国二级保护珍稀濒危植物。由于连香树的味芳香，百米之内便可闻见，如果是大树，则越摇越香，因此，称之为“连香树”。连香树的用途十分广泛，树干可用于造纸，根、茎、叶及果均有较高的药用价值，其树皮煎水服用，可治疗感冒、痢疾，树叶可可用作提取香料的原料。连香树树干通直，树形优美，花白色、小而美观，且有淡香。叶形奇特，秀丽别致，秋季叶片变成黄或红色，因此是城乡、庭院绿化以及园林造景中观赏价值很高的园林绿化树种和行道树种。连香树木材材质优良、纹理通直、结构细致、质地坚硬，是世界珍贵用材和重要的造币树。因此，连香树有较高的经济、观赏、药用及科研价值。
[0003]目前，连香树的繁殖主要依靠常规的繁殖方法，繁殖周期长且繁殖速度慢，很难满足科研及市场对连香树苗木的需求。植物组培快繁技术能够在短时间内快速大量繁殖，并获得基因型一致的优良苗木，大大加快育苗进程，为珍稀濒危树种种质资源的保存开辟一条新的途径。目前关于连香树植物组织培养方面的研究鲜有报道，而本发明通过丛生芽诱导与增殖、再生幼苗诱导生根等关键技术环节，大大提高连香树繁殖系数，为实现连香树组织培养工厂化生产提供技术支持。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供出一种连香树离体快速繁殖方法，本发明以连香树带腋芽的茎段为外植体，经过外植体处理、诱导培养、增殖、生根、炼苗及移栽等过程建立了连香树离体快速繁殖体系，提高连香树的增殖系数，从而实现了本发明的目的。
[0005]本发明的一种连香树离体快速繁殖方法，包括以下的步骤:
(I)外植体采集及处理:从野外采回的I年生带腋芽茎段用自来水将表面的灰尘冲洗干净，再用1%?3%的滴露进行喷洒后置于人工气候箱以25?28°C温度、70%?90%的湿度、每天光照12?16小时，光照强度为1500?30001x条件下进行水培3?5天，在水培期间每天换一次水。
[0006](2)诱导培养:将步骤(I)处理后外植体的大叶片剪去并切成3?4cm左右长的茎段，先用加有2?3滴滴露的洗衣粉溶液浸泡处理10?30min后流水冲洗I?3h，于超净工作台中用75%乙醇消毒30?60s后用无菌水洗3?5次,再用0.1%升萊溶液消毒10?25min,用无菌水冲洗4?6次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行丛生芽诱导培养。接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养直至形成丛生芽。
[0007](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的丛生长至2?3cm高时，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照12?16小时，光照强度为2000?30001x，置于培养温度为25?28°C的条件下培养直至形成更多的丛生芽。
[0008](4)生根培养:将步骤(3)的丛生芽长至3?4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25?28°C条件下全暗培养I?3天，然后置于每天光照14?16小时，光照强度为3000?50001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根。
[0009](5)炼苗移栽:将高约6?7cm的生根试管苗的培养瓶盖半开炼苗3?5天，再全开瓶盖加入适量的自来水并置于自然光照下炼苗5?7天，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土和黄沙泥混合成的基质中并定植于大田中。
[0010]上述步骤(2)所述的诱导培养基为:MS+0.1?1.0mg/L6-BA+l.0?3.0mg/L2, 4-D+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0011]上述步骤(3)所述的增殖培养基为:MS+1.0?3.0mg/L6-BA+0.1?1.0mg/LNAA+1.0 ?5.0mg/LGA3+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
[0012]上述步骤(4)所述的生根培养基为:l/2MS+0.5?1.5mg/LNAA +1.0?5.0mg/LIBA+0.1 ?0.5mg/L6-BA+0.5 ?1.0g/LAC+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为
5.4 ?5.8。
[0013]本发明的优点是 '连秀俄iCercidiphyllum j'apoflic應)为我国二级保护珍稀漸危植物，具有很高的科研、药用及观赏价值。目前，连香树较多采用扦插、嫁接及种子繁殖，但这些繁殖方法繁殖率低、繁殖周期长，远不能满足园林绿化及科研等的苗木需求，而本发明以连香树带腋芽的茎段为外植体，经过外植体处理、诱导培养、增殖、生根、炼苗及移栽等过程建立了连香树离体快速繁殖体系，提高连香树的增殖系数，从而实现其工厂化育苗。
【具体实施方式】
[0014]以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。
[0015]实施例1:
(I)外植体采集及处理:从野外采回的I年生带腋芽茎段用自来水将表面的灰尘冲洗干净，再用1%的滴露进行喷洒后置于人工气候箱以25°C温度、70%的湿度、每天光照12小时，光照强度为15001x条件下进行水培3天，在水培期间每天换一次水。
[0016](2)诱导培养:将步骤(I)处理后外植体的大叶片剪去并切成3?4cm左右长的茎段，先用加有2滴滴露的洗衣粉溶液浸泡处理1min后流水冲洗lh，于超净工作台中用75%乙醇消毒30s后用无菌水洗3次,再用0.1%升萊溶液消毒1min,用无菌水冲洗4次后用无菌滤纸吸去水分后接种到诱导培养基中进行丛生芽诱导培养。接种后先在25°C条件下全暗培养I天，然后置于每天光照12小时，光照强度为20001χ，置于培养温度为25V的条件下培养直28天即可形成丛生芽，诱导率为78.3%。所述的诱导培养基为:MS+0.1mg/L6-BA+1.0mg/L2, 4_D+19g/L 蔗糖 +3.7g/L 琼脂，pH 为 5.6。
[0017](3)增殖培养:将步骤(2)培养得到的丛生长至2?3cm高时，从基部切取芽并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25°C条件下全暗培养I天，然后置于每天光照12小时，光照强度为20001x，置于培养温度为25°C的条件下培养，增殖系数为6.33。所述的增殖培养基为:MS+1.0mg/L6-BA+0.lmg/LNAA+2.0mg/LGA3+30g/L 蔗糖 +3.8g/L 琼脂，pH为 5.6。
[0018](4)生根培养:将步骤(3)的丛生芽长至3?4cm高时，切割成单芽并接种到生根培养基上进行生根培养