选取星油藤当年生带节藤茎为外植体，经75%酒精消毒15秒种后，用无菌水冲洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2?4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上，于26°C条件下全暗培养14天即可诱导形成不定芽，污染率低至7%以下，不定芽诱导率可达95.4%。所述的诱导培养基为:MS+0.4mg/LTDZ+l.6mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+20g/L 蔗糖+4.0g/L 琼脂，pH为 5.8o
[0015](2)继代培养:将步骤(I)获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照14小时，光照强度为20001χ，培养温度为26°C的条件下培养，25天转接一次，增殖系数为8.51。所述的增殖培养基为:MS+1.0mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA+30g/L 蔗糖 +5.5g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0016](3)生根培养:将步骤(2)继代培养长至2?4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在26°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照15小时，光照强度为30001x，培养温度为26°C的条件下培养14天即开始生根，生根率可达97%。所述的生根培养基为:l/2MS+0.4mg/LIBA+l.2mg/L GGR (注:双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研宄开发中心)+18g/L鹿糖+4.0g/L琼脂，pH为5.8。
[0017](4)炼苗移栽:将长至6?8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙(8:1:1)混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为100%。
[0018]实施例3
(I)诱导不定芽:选取星油藤当年生带节藤茎为外植体，经75%酒精消毒20秒种后，用无菌水冲洗4次后置于0.1%的升汞溶液中消毒30分钟，然后用无菌水冲洗6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2?4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上，于28°C条件下全暗培养20天即可诱导形成不定芽，污染率低至2%以下，不定芽诱导率可达87.9%。所述的诱导培养基为:MS+0.3mg/LTDZ+l.5mg/L 6-BA+0.3mg/LNAA+25g/L 蔗糖+4.5g/L 琼脂，pH为 5.8o
[0019](2)继代培养:将步骤(I)获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照15小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养，20天转接一次，增殖系数为7.23。所述的增殖培养基为:MS+1.2mg/L 6-BA+0.4mg/LNAA+30g/L 蔗糖 +3.8g/L 琼脂，pH 为 5.8。
[0020](3)生根培养:将步骤(2)继代培养长至2?4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在28°C条件下全暗培养3天，然后置于每天光照14小时，光照强度为20001x，培养温度为28°C的条件下培养10天即开始生根，生根率可达100%。所述的生根培养基为:l/2MS+0.3mg/LIBA+l.8mg/L GGR (注:双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研宄开发中心)+20g/L鹿糖+4.5g/L琼脂，pH为5.8。
[0021](4)炼苗移栽:将长至6?8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗4天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙(8:1:1)混合成的基质中并定植于大田中，移栽成活率为98%。
【主权项】
1.一种星油藤的组织培养快繁方法，其特征在于包括以下工艺步骤: (1)诱导不定芽:选取星油藤当年生带节藤茎为外植体，经75%酒精消毒5?20秒种后，用无菌水冲洗2?5次后置于0.1%的升汞溶液中消毒10?30分钟，然后用无菌水冲洗3?6次，经无菌滤纸吸干水分后剪切成2?4cm左右的带节藤茎，并接种到诱导培养基上，于25?28°C条件下全暗培养，直至诱导形成不定芽； (2)继代培养:将步骤(I)获得的不定芽从基部切下，接种到增殖培养基上进行继代培养，接种后置于每天光照12?15小时，光照强度为1500?20001x，培养温度为25?28°C的条件下培养，20?30天转接一次； (3)生根培养:将步骤(2)继代培养长至2?4cm的不定芽分切并接种到生根培养基上进行诱导生根，接种后先在25?28°C条件下全暗培养3?5天，然后置于每天光照12?15小时，光照强度为2000?30001x，培养温度为25?28°C的条件下培养至生根； (4)炼苗移栽:将长至6?8cm的生根试管苗的培养瓶瓶盖打开并置于自然光照下炼苗5?7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由泥炭土:农家肥:河沙(8:1:1)混合成的基质中并定植于大田中。
2.根据权利要求1所述的一种星油藤的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(I)所述的诱导培养基为:MS+0.1 ?0.5mg/LTDZ+l.0 ?2.0mg/L 6-BA+0.1 ?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 鹿糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
3.根据权利要求1所述的一种星油藤的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(2)所述的增殖培养基为:MS+1.0 ?2.0mg/L 6-BA+0.1 ?0.5mg/LNAA+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 琼脂，pH 为 5.4 ?5.8。
4.根据权利要求1所述的一种星油藤的组织培养快繁方法，其特征在于步骤(3)所述的生根培养基为:l/2MS+0.1?0.5mg/LIBA+l.0?2.0mg/L GGR (注:双吉尔-GGR，购自北京艾比蒂研宄开发中心)+15?30g/L蔗糖+3.5?6.0g/L琼脂，pH为5.4?5.8。
【专利摘要】本发明公开了一种星油藤的组织培养快繁方法，星油藤（Plukenetia volubilis L.）又名南美油藤、印加果、印加花生等，是大戟科一种多年生木质藤本油料植物，原产于南美洲安第斯山脉地区热带雨林。从星油藤种子中榨取的植物油被认为是世界上最好的植物油，可用于食品、保健、制药、化妆品等方面。目前，星油藤种苗主要通过种子和扦插方式繁育，存在周期长、成本高、效率低下等问题。因此，本发明以星油藤带节茎段为外植体，通过不定芽诱导、增殖、生根、炼苗移栽等过程成功获得了星油藤离体再植株，建立星油藤组织培养快速繁殖技术体系，对于进行星油藤优良品种的快速繁殖和大面积推广、促进星油藤的产业化发展具有重要意义。
【IPC分类】A01H4-00, A01G31-00
【公开号】CN104798684
【申请号】CN201510199663
【发明人】梁钧淞, 莫昭展
【申请人】玉林师范学院
【公开日】2015年7月29日
【申请日】2015年4月25日