拧成鸡蛋大小后，移入泥炭土、黄泥土、珍珠岩等混合的栽培基质中种植；移栽成活率达96%以上，且黄花倒睡莲茎杆木质化明显，叶色深绿，长势好。
[0021](6)田间栽培管理:将幼苗移栽田间，环境温度25 °C，喷雾保湿，保持空气湿度90%，覆盖遮阴率70%遮阳网，每周喷洒I次广谱杀菌剂，每月浇I次两倍MS大量溶液，一年后植株的平均根粗可达0.8 cm。
[0022]步骤(I)中表面消毒处理a为在含有体积浓度为0.1%洗洁精的水中浸泡30 min,流动的水冲洗1.5 h，置于超净工作台上用70 wt.%酒精消毒20 S，无菌水冲洗4次，再用
0.1 Wt.%升萊消毒15 min，无菌水冲洗4次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。
[0023]培养基A 配方为:MS+ 6BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + KT 0.5 mg/L + Sue30 g/L + 琼脂粉 8 g/L, PH 值为 5.8。
[0024]培养基B 配方为:1/4 MS+ IBA 0.2 mg/L + NAA 0.5 mg/L + AC I g/L + Sue 20g/L +琼脂粉9 g/L, PH值为5.9。
[0025]所述的移栽基质配比是:泥炭土:黄泥土:珍珠岩的重量比为3:2:1。
[0026]所述广谱杀菌剂为500倍50%多菌灵与I 000倍70%甲基托布津溶液交替使用。
[0027]实施例2
(1)若选取得是生长健壮的黄花倒睡莲组培苗作为外植体母本用于繁殖，则表面消毒应采用消毒处理b处理，然后直接切取之后进行初代培养；
(2)初代培养-丛生芽诱导与增殖:将已经过消毒处理的多节间茎段接种入培养基A中，多节间茎段横放平铺于培养基中，12天后进行一体化培养；
(3)—体化培养:将经初代诱导的多节间丛生芽切取成1.5 cm长的单芽横放入培养基B中，每瓶接种30棵，光照强度为2000 lx, 10天后开始生根，20天长至6 cm高度后，准备移栽；
(4)炼苗:20天后，将瓶苗从培养室取出放置常规室内4天，第6天将瓶盖打开继续放置2天，期间每天要补充10 ml无菌水至瓶内，第8天后将组培苗轻轻夹出，洗净根部培养基，以备移栽；
(5)移栽:将洗净的黄花倒睡莲组培苗用500ppm多菌灵溶液浸泡30 min后，用稀黄土将其根部包裹成鸡蛋大小后，移栽入泥炭土、黄泥土、珍珠岩等混合的栽培基质中种植；移栽成活率达97%以上，且黄花倒睡莲茎杆木质化明显，叶色深绿，长势好。
[0028](6)田间栽培管理:将幼苗移栽田间，环境温度25°C，喷雾保湿，保持空气湿度95%，覆盖遮阴率70%遮阳网，每周喷洒I次广谱杀菌剂，每月浇I次两倍MS大量溶液(成分配比见附件I )，一年后植株的平均根粗可达0.6 cm。
[0029]步骤(I)中消毒处理b为70 wt.%酒精消毒5 s，无菌水冲洗4次，0.1 wt.%升汞消毒3 min，无菌水冲洗4次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。
[0030]培养基A 配方为:MS+ 6BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + KT 0.5 mg/L + Sue30 g/L + 琼脂粉 8 g/L, PH 值为 5.8。
[0031]培养基B 配方为:1/4 MS+ IBA 0.2 mg/L + NAA 0.5 mg/L + AC I g/L + Sue 20g/L +琼脂粉9 g/L, PH值为5.9。
[0032]所述的移栽基质配比是:泥炭土:黄泥土:珍珠岩的重量比为3:2:1。
[0033]所述广谱杀菌剂为500倍50%多菌灵与1000倍70%甲基托布津溶液交替使用。
[0034]实施例3
(1)表面消毒:取生长健壮、无病虫害的野生黄花倒睡莲植株为外植体，去除叶片后用软毛刷轻刷表皮，将其进行表面消毒处理a后，切成含有4个多节间的茎段备用；
(2)初代培养-丛生芽诱导与增殖:将已经过消毒处理的多节间茎段接种入培养基A中，多节间茎段横放平铺于培养基中，10天后进行一体化培养；
(3)—体化培养:将经初代诱导的多节间丛生芽切取成2.0 cm长的单芽横放入培养基B中，每瓶接种30棵，光照强度为1500 lx, 10天后开始生根，20天长至7 cm高度后，准备移栽；
(4)炼苗:20天后，将瓶苗从培养室取出放置常规室内3天，第6天将瓶盖打开继续放置2天，期间每天要补充12 ml无菌水至瓶内，第8天后将组培苗轻轻夹出，洗净根部培养基，以备移栽；
(5)移栽:将洗净的黄花倒睡莲组培苗用500ppm多菌灵溶液浸泡30 min后，取出，用稀黄土将其根部包裹成鸡蛋大小后，移栽入泥炭土、黄泥土、珍珠岩等混合的栽培基质中种植；
(6)田间栽培管理:将幼苗移栽田间，环境温度25°C，喷雾保湿，保持空气湿度85%，覆盖遮阴率70%遮阳网，每周喷洒I次广谱杀菌剂，每月浇I次两倍MS大量溶液(成分配比见附件I )，一年后植株的平均根粗可达0.7 cm。
[0035]步骤(I)中表面消毒处理a为在含有体积浓度为0.2%洗洁精的水中浸泡30 min,流动的水冲洗2 h，置于超净工作台上用70 wt.%酒精消毒30 S，无菌水冲洗5次，再用0.1wt.%升萊消毒20 min,无菌水冲洗5次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。
[0036]培养基A 配方为:MS+ 6BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + KT 0.5 mg/L + Sue30 g/L + 琼脂粉 8 g/L, PH 值为 5.8。
[0037]培养基B 配方为:1/4 MS+ IBA 0.2 mg/L + NAA 0.5 mg/L + AC I g/L + Sue 20g/L +琼脂粉9 g/L, PH值为5.9。
[0038]所述的移栽基质配比是:泥炭土:黄泥土:珍珠岩的重量比为3:2:1。
[0039]所述广谱杀菌剂为500倍50%多菌灵与1000倍70%甲基托布津溶液交替使用。
[0040]以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
【主权项】
1.基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:取黄花倒睡莲植株为外植体，经过表面消毒、初代培养、一体化培养、炼苗、移栽，最终获得黄花倒睡莲组培苗。2.根据权利要求1所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:所述方法具体包括以下步骤: (1)表面消毒:取生长健壮、无病虫害的野生黄花倒睡莲植株为外植体，去除叶片后用软毛刷轻刷表皮，将其进行表面消毒处理a后，切成含有2-4个多节间的茎段备用；若选择生长健壮的黄花倒睡莲组培苗用于繁殖，则采用消毒处理b后直接切取后进行初代培养； (2)初代培养-丛生芽诱导与增殖:将已经过消毒处理的多节间茎段接种入培养基A中，多节间茎段横放平铺于培养基中，10-15天后进行一体化培养； (3)—体化培养:将经初代诱导的多节间丛生芽切取成1.5-2.0 cm长的单芽横放入培养基B中，每瓶接种30棵，光照强度为1500-3000 lx, 10天后开始生根，20天长至6_8 cm高度后，准备移栽； (4)炼苗:20天后，将瓶苗从培养室取出放置常规室内3-5天，第6天将瓶盖打开后继续放置2天，期间每天要补充10-15 ml无菌水至瓶内，第8天后将组培苗轻轻夹出，洗净根部培养基，以备移栽； (5)移栽:将洗净的黄花倒睡莲组培苗用500ppm多菌灵溶液浸泡30 min后，取出，用稀黄土将其根部包裹成鸡蛋大小后，移栽，放入基质为泥炭土、黄泥土、珍珠岩等按一定配比组合的栽培基质中种植； (6)田间栽培管理:将幼苗移栽田间，环境温度24-26°C，喷雾保湿，保持空气湿度85-95%，覆盖遮阴率70%遮阳网，每周喷洒I次广谱杀菌剂，每月浇I次两倍MS大量溶液，一年后植株的平均根粗可达0.5-0.8 cmo3.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:步骤(I)中表面消毒处理a为在含体积浓度为0.1-0.2%洗洁精的水中浸泡30 min,流动的水冲洗1-2 h，置于超净工作台上用70 wt.%酒精消毒20-30 S，无菌水冲洗3_5次，再用0.1 Wt.%升萊消毒10-20 min，无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。4.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:步骤(I)中消毒处理b为70 wt.%酒精消毒5 S，无菌水冲洗3-5次，0.1 wt.%升汞消毒3 min，无菌水冲洗3-5次后，用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。5.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:培养基A配方为:MS+ 6BA 1.5 mg/L + NAA 0.05 mg/L + KT 0.5 mg/L + Sue 30 g/L +琼脂粉8 g/L，PH值为5.8。6.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:培养基 B 配方为:1/4 MS+ IBA 0.2 mg/L + NAA 0.5 mg/L + AC I g/L + Sue 20 g/L +琼脂粉9 g/L，PH值为5.9。7.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:所述的移栽基质配比是:泥炭土:黄泥土:珍珠岩的重量比为3:2:1。8.根据权利要求2所述的基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，其特征在于:所述广谱杀菌剂为50%多菌灵与70%甲基托布津交替使用。
【专利摘要】本发明提供一种基于多节间茎段一体化培育黄花倒睡莲组培苗方法，取黄花倒睡莲植株为外植体，经过表面消毒、初代培养、一体化培养、炼苗、移栽，最终获得黄花倒睡莲组培苗。本发明提供了一种采用多节间茎段作为外植体，同时采用专项研究出的独立配方使其在一代的培养基中完成增殖、生根等过程，利用它们一体化的方法来培育出黄花倒睡莲组织培养苗。本方法提高繁殖系数的同时，保存了苗木的优质性来满足引种推广的需求；这种黄花倒睡莲组织培养技术能在较短的30-50d内，繁殖出大量具有保持母本优良品质的黄花倒睡莲植株。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN104996298
【申请号】CN201510389439
【发明人】张君诚, 张杭颖
【申请人】三明学院
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2015年7月6日