昆虫线虫保湿剂及昆虫线虫保存方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种能够将昆虫线虫常温下长期保存并且方便携带使用的保湿剂，同 时提供了利用该保湿剂保存线虫的方法。
【背景技术】
[0002] 昆虫线虫（InsectNematode)是能够寄生于昆虫体内的线虫。根据其侵染过程 中是否有共生菌的参与将其分为昆虫病原线虫和昆虫寄生线虫两大类。昆虫线虫隶属线 形动物门（Nemathelminthes)、线虫纲（Nematoda)，主要包括小杆目（Rhabditida)、索线目 (Mermithida)等 8 目；斯氏科（Steinernematidae)、异小杆科（Heterorhabditidae)VJizP 科（Rhabditidae)等 28 科。其中昆虫病原线虫（Entomopathogenicnematodes,EPNs)主 要包括斯氏线虫科（Steinernematidae)及异小杆科（Heterorhabditidae)线虫。昆虫寄 生线虫中对小杆科（Rhabditidae)线虫研究较多。
[0003] 昆虫线虫全球分布广泛，栖息于平原、大海、淡水、温泉、山脉等地。昆虫线虫与昆 虫具有兼性寄生、专性寄生等关系，对寄主产生致死、不孕、延缓羽化、降低产卵力、诱导病 发组织等直接或间接的影响。昆虫线虫作为重要的害虫生防因子目前已经成为国际生物防 治领域的研究热点，其具有寄主广泛、强致死率等特点，对土栖性和钻蛀性害虫的防治效果 持平甚至优于市售农药，并且其对人畜、植物及有益生物安全。昆虫线虫的诸多优点加速了 这类生物农药的产业化步伐。
[0004] 尽管昆虫线虫作为一种应用前景广阔的新型生物杀虫剂，但是它的存活率受环境 温湿度影响较大，对光照敏感，常温储存货架期短，这些缺点是其推广应用的主要障碍因 素。国内外学者在应用昆虫线虫防治害虫的实践中通常将低温储存的昆虫线虫水悬浮原液 当天带到田间稀释，然后马上施用，这种离不开低温的操作方法给施用农户带来了极大的 不便，难于大面积推广，尤其在广东、海南这些亚热带、热带地区。为此，昆虫线虫工作者研 究了利用多种材料作为载体或助剂将人工培养出的昆虫线虫制成制剂，以满足产品的实验 室原种保存、产业化和商品化的要求，但这些剂型在线虫产品存活率、保存、运输、应用等方 面仍然存在一些问题。如，实验室水剂低温或液氮储存保种，但此方法有需低温、供养难、储 存浓度有限、适用性差等缺点；用矿物油制成油剂或用海绵法储存，虽有原料易得、应用操 作简单、可保湿等优点，但矿物油有毒性、长期大量储存供氧难；海绵法线虫释出损失大，此 两种剂型仅限实验室规模小量储存。商业上大量储存方法中用吸附剂法使线虫吸附脱水， 此法虽操作简便、原料易得，但其储存稳定性差，易堵塞喷管；凝胶剂储存法操作简便，可使 线虫部分脱水，储存稳定性好，但其供氧难，工艺复杂，线虫释出麻烦，易堵塞喷管。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述领域中的缺陷，提供了一种能够常温下长期保存和运输昆虫线虫 并且便于农户使用的保湿剂。
[0006] 同时还提供该保湿剂的使用方法。
[0007] 昆虫线虫保湿剂，由下列固体物组份制成水粘稠液，其中固体物为昆虫体：昆虫代 谢产物：寡糖：分子量小于10000的聚丙烯酸聚合物=10-1000条：l〇-l〇〇〇〇gl-300g: 0.l-5g，所述水：固体物=10-500:0. 1-5。
[0008] 所述昆虫体：昆虫代谢产物：寡糖：聚丙烯酸聚合物=100-500条：500-5000g: 50~200g：l~2g〇
[0009] 所述聚丙烯酸聚合物为[(C3H3O2Na)a7 (C3H4O2)。.丄。
[0010] 所述昆虫线虫为小杆科线虫、异小杆科线虫或斯氏科线虫，
[0011] 所述昆虫线虫为小杆线虫Rhabditis(Oscheius)chongmingensis，樱桃异小杆线 虫Heterorhabditisbeicherriana或小卷蛾其万氏线虫Steinernemacarpocapsae。
[0012] 所述昆虫体为鳞翅目或/和鞘翅目幼虫体。此类物质能够为昆虫线虫在少量代谢 过程中提供氮源，延长其保存时间。
[0013] 所述寡糖为异麦芽糖、甘露寡糖、木二糖、木三糖中的一种或几种。此糖类物质能 够为昆虫线虫在少量代谢过程中提供碳源，延长其保存时间。
[0014] 该昆虫线虫保存方法，将昆虫线虫接种于上述保湿剂中，接种量为2000-50000条 /ml〇
[0015] 优选接种量为2000-10000条/ml。
[0016] 所述接种后置于2_8°C下保存。此环境温度能够减少昆虫线虫的代谢，从而抑制或 减少线虫的活动而诱导休眠，高浓度的昆虫线虫悬浮液存放时间不宜过长，以防止线虫沉 降底层线虫缺氧而死亡。
[0017] 所述2-8°C下保存4-8小时后再常温保存。
[0018] 实验表明，本发明的保湿剂可以使昆虫线虫在常温下保存至2-5个月，存活率达 80-90%，适用于昆虫线虫在常温下运输保存，而不失活性，同时不会对施用土壤产生任何 副作用。
【具体实施方式】
[0019] 现结合实施例对本发明作进一步的详述。
[0020] 本发明提供了一种昆虫线虫保湿剂，固体物为昆虫体：昆虫代谢产物：寡糖：高分 子材料（分子量小于10000的聚丙烯酸聚合物）[(C3H3O2Na)U(C3H4O2)。.3]"按200条：700g: 60 :1. 5g比例配制而成，然后混合均匀，加入定量的清水（I:200加水量）搅拌均匀，得到水 粘稠液。该粘稠制剂能够给昆虫线虫提供营养和湿度环境，延长其保存时间。
[0021] 昆虫线虫的保存方法：新制备的线虫，按2000条-10000条/ml的浓度保存在5°C 冰箱中4-8小时，此环境温度能够减少昆虫线虫的代谢，从而抑制线虫的活动而诱导休眠， 高浓度的昆虫线虫悬浮液存放时间不宜过长，以防止线虫沉降底层线虫缺氧而死亡。根据 以上操作步骤得到昆虫线虫悬浮液，接种到保湿剂中。昆虫线虫接种后可以直接在常温下 保存，也可以一直在低温下保存，或低温保存4个小时左右后，再常温下保存，如昆虫线虫 保湿剂组成物装入塑封袋中，12-28°C变温下（2-6月室温）保存，确保常温运输过程中的活 性。
[0022] 所用昆虫线虫有以下3种，各代表1个科的线虫一一
[0023] 1、本发明专利第一发明人从内蒙古棉田土壤中采集、分离、纯化、鉴定、可公 开的小杆线虫Rhabditis(Oscheius)chongmingensisTumian(Liu Qizhi, Zden"ek M.Zhang Lijuan, Vladimir P. and Dong Lamei. 2012. Re-description of Oscheius chongmingensis(Zhang et al.,2008)(Nematoda:Rhabditidae)and its entomopathogenicity. Nematology, 14(2):139-149. )〇
[0024] 2、本发明专利第一发明人从北京顺义樱桃园采集、分离、纯化、鉴定的樱桃异小杆 线虫Heterorhabditis beicherriana (Li Xingyue, Liu Qizhi*, Nermut J. , Puza, V. and Mracek Z. 2012. Heterorhabditis beicherriana n.sp. (Nematoda:Heterorhabditidae), a new entomopathogenic nematode from the Shunyi district of Beijing, China. Zootaxa, 3569:2