利用七叶一枝花根茎快速繁殖育苗方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及药用植物育苗工程领域，具体地说是针对七叶一枝花根茎进行分割快速诱导出幼苗的繁殖方法。
【背景技术】
[0002]七叶一枝花是多年生草本植物，别名独脚莲、一枝箭、草河车等。野生七叶一枝花分布在湖南、云南、四川、贵州等省份，主产区为湖南的湘西、云南的滇中、滇西和滇西北地区，生长在海拔为1400?3100m，年平均气温为10?13°C，年降雨量850?1200mm的冷凉山区，多生于常绿阔叶林、针阔混交林、山坡阴湿处及灌木丛山地。七叶一枝花从种子萌发生长发育5?6年后，才进入生殖生长期。由于生长缓慢，多年的大量采挖使野生七叶一枝花资源面临枯竭。
[0003]七叶一枝花以根茎入药，秋季采收。其性微寒味苦，有小毒，归肝经，具有清热解毒，消肿止痛，凉肝定惊等功效，主治疔疮痈肿，咽喉肿痛，毒蛇咬伤，跌打伤痛，惊风抽搐等症。现代药理研究证明，七叶一枝花有止血、祛痰和抑菌、镇静镇痛、抗早孕杀灭精子、抗细胞毒等作用，临床用于治疗功能性子宫出血、神经性皮炎、外科炎症以及肿瘤等，具有显著的疗效。国内以七叶一枝花为主要原料的产品有云南白药系列、宫血宁、热毒清、抗病毒颗粒、季德胜蛇药片、七叶一枝花解毒酊等，产值40亿元。
[0004]由于制药企业对七叶一枝花原料大量的需求，使得七叶一枝花野生资源长期过度无序地采挖，野生药材的供应量不断减少，已不能满足国内以七叶一枝花为原料的制药企业的生产需求。七叶一枝花从播种到收获利用需八年以上的时间，制药企业为获取更多原料，大幅度提高七叶一枝花收购价格，现在好的产品收购价格已达700元/kg以上，是五年前的16?30倍。收购价格上涨再刺激农民过度的采挖，采挖速度远远超过了野生资源繁殖生长的速度，导致七叶一枝花成为稀缺资源。七叶一枝花的稀缺已成为制约相关制药企业规模生产和可持续发展的瓶颈。进行七叶一枝花人工栽培，保证药材有效供应，满足制药企业需求，造福人类健康，已势在必行。但人工栽培七叶一枝花存在一些急待攻克的关键技术。
[0005]七叶一枝花种子休眠程度高、萌发缓慢、出苗率低等生物学特征限制，种子种苗繁殖难度大；根茎繁殖不仅因使用营养体繁殖，七叶一枝花根茎需求量大，使野生资源锐减，而且会使种质退化，抗逆性下降；至今为止，对七叶一枝花的组织培养方面尚未取得令人满意的结果。缺乏高效的种苗繁殖技术和完善的种苗繁育标准体系，缺乏七叶一枝花优质种苗供给是制约七叶一枝花栽培快速发展的关键因素。
[0006]为了解决市场供需矛盾，进行七叶一枝花人工驯化，发展人工栽培，一些学者开展了七叶一枝花种苗繁育的研究。
[0007]孟繁蕴等(2006)研究发现七叶一枝花种子休眠和发育过程中种子内源激素ABA含量显著下降，与休眠解除有较大的相关性，GA3，IAA, ZR含量逐渐升高，变化趋势与七叶一枝花分化和发育一致。黄玮等(2008)进一步探讨七叶一枝花种子休眠机理，研究结果表明七叶一枝花种子不存在吸水障碍，与休眠无关，内源激素ABA和GA3在七叶一枝花种子休眠与萌发中发挥重要作用。陈翠等研究不同温度、不同播种方式(播种时间、覆土厚度、地膜覆盖)等因素对七叶一枝花种子萌发和出苗的影响，结果表明，七叶一枝花种子胚后熟和萌发的最适温度在18?20°C，在此温度下处理3?4个月以后，转至O?10°C低温处理2?4个月，可在翌年4月出苗；适宜的播种时间是4月份以前，育苗土覆盖厚度为Icm左右，播种后用黑色地膜进行覆盖，可提高出苗率。
[0008]陈翠等在相同种植条件下，对来源于云南省23份七叶一枝花种源进行了物候期、形态特征及经济性状的观察、分析与评价。结果表明，不同地理种源的七叶一枝花生长物候期、形态特征及经济性状园地理来源不同有一定的差异。
[0009]荣林姚对七叶一枝花的无性繁殖技术进行研究，以培养种苗。方法采用根茎分割法繁殖。结果根茎分割法繁殖出苗率高(98%)。结论根茎分割法可缩短七叶一枝花的生长周期，其应用可为七叶一枝花规模化种植提供良好的种源。陈翠等研究七叶一枝花种苗繁育技术。在对七叶一枝花种苗繁育技术多年试验研究的基础上，总结了七叶一枝花有性和无性繁育技术。通过种子胚后熟催芽处理，当年出苗率达到30%以上，种子育苗5年开花结果可移栽作种苗，根茎单重达到8?15g ;带顶芽的切段当年可移栽，成苗率达到90%以上，不带顶芽的切段第3年开花结果成苗，成苗率达到78%以上，根茎单重达到7?12g。
[0010]通过此技术可实现七叶一枝花种苗的规范化快速生产，促进七叶一枝花的产业化栽培和发展。李群等以MS培养基为基本培养基，附加不同种类和浓度的生长调节物质，对不同器官，不同取材时期的七叶一枝花外植体进行愈伤组织的诱导培养研究。结果表明:
6-BA和IAA有利于愈伤组织的诱导；生长期的幼芽组织是较适宜的培养器官，其愈伤组织的诱导频率达26.7%。至今为止，对七叶一枝花的组织培养方面尚未取得令人满意的结果。
[0011]公开号为CN102726144A的中国专利介绍了一种打破重楼种子休眠期的方法，属于生物技术领域。本发明所采用的技术方案具体步骤如下:(I)首先保证重楼种子的环境温度在15-25°C，湿度在60-70% ; (2)将重楼种子置于35°C温水中浸泡36小时；(3)将处理后的重楼种子，置于培养皿中，45万伏高压环境中，每天5-7次，每次持续2小时；(4)45天种子开始萌发，60天后苗高3-5cm，约90天，可移栽至暖棚管理。本发明打破自然条件下重楼种子I年多的休眠期，使其能在短短的两个月内萌发，减短了重楼的生长周期，对作为国家濒危野生药用植物的重楼繁殖生长具有巨大的促进意义。
[0012]公开号为CN104686133A的中国专利介绍了一种滇重楼快速育苗方法，其特征在于，包括如下步骤:在种子成熟前30天准备苗床，选择腐殖质较多的土地，先清除杂草，然后深翻20?25cm，暴晒10天以上，之后施入腐熟的堆肥或圈肥1500Kg/亩，在打细土块时混入土中；用塑料薄膜搭建拱棚，拱棚宽3米，高1.5米，塑料薄膜外再盖90%遮阳网，然后将拱棚周围棚布用土压实；在拱棚的中间和两侧各留宽30cm的通道，理两个高10cm、宽1.2米的畦；种子完全成熟，果皮完全裂开，种皮变红时才采收果实，保证种子中的胚发育成熟，将果实整个剪下，装入干净清洁的盛具中，集中后戴灭过菌的塑胶手套剥下种子，放于干净器皿中；在大棚内的畦面上用手或条锄勾出深6cm的小沟，沟距1cm ;然后直接将刚剥出的新鲜种子播种于沟内，株距5cm，然后撒少许多菌灵或百菌清于畦面；再将畦面抹平，保持种子的深度为3cm ;最后再在畦面盖一薄层干松针，以松针盖住土面为宜；盖好松针后，用喷壶或有喷头的水管浇一次透水，浇水控制水压防止冲出种子或者使表土板结，浇完水后，将拱棚严实封闭，之后视土壤的湿度每隔10?15天浇一次水，土壤潮湿为止，育苗期除底肥外，不施肥或仅取少量复合肥溶解于喷壶中浇水时喷施；每隔5天检视一次，有杂草尽早拔除，在早晨10点以前或下午4点以后进棚，其间始终保持拱棚处于密封状态，一般播种后15天种皮就会自然褪去，30天种子即开始萌动，60天种子的根就能长到3?5cm，90天后部分种子长出地上部分，约80%的种子在次年4月之前出苗，另有20%第三年出苗。
[0013]公开号为CN104255216A的中国专利介绍了一种重楼种子育苗的方法，其特征在于包含如下步骤:翻耕苗床，翻耕深度1cm?15cm左右，并将土块碾碎至I?2cm，并捡去石块和杂草，平整作畦。畦面宽110cm，沟宽25cm，沟深20cm。苗床上搭3?4层遮荫网。选饱满，成熟，无病害、霉变和损伤的千粒重为40?70克的重楼种子，将其与干净的细砂以重量比2: I混合，搓擦除去外种皮，洗净，用代森锰锌80%可湿性粉剂500倍液(wt/wt)对种子进行伤口消毒，后用70mg/kg生根粉溶液浸种子I小时，埋入湿砂中，25°C?35°C处理24h?72h后，等重楼种子生根后播种，在此期间要注意保湿。处理种子以重量比3:1播入腐殖土和细砂播种。种子上覆盖1.5?2cm薄土层，再盖一层细碎草以保水分。
[0014](4)苗期管理:苗期保持育