一种检测海带夏苗制冷水工艺中品种混杂的方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及经济褐藻海带品种混杂领域，具体的说是一种检测海带夏苗制冷水工 艺中品种混杂的方法。
【背景技术】
[0002] 海带为典型的冷水性海藻，在我国海域中，由于夏季海水溫度偏高，其无法在自然 海域中完成生活史过程。自20世纪50年代，我国海带夏苗培育技术的突破，促进了海带养 殖规模的迅速扩大。夏苗技术是将夏季高溫海水进行人工降溫处理，将海水溫度维持在适 合海带生存的5-12C，从而在室内完成海带幼苗培育的过程。为节约制冷成本，海带育苗企 业在生产中将制冷水循环使用。因此，如果共用的循环水系统中同时培育两个W上的品种 时，就可能造成品种混杂的问题。在实际海带育苗生产中，品种混杂现象是否存在一直没有 建立行之可效的技术方法进行检测。
【发明内容】
[0003] 本发明目的在于提供一种检测海带夏苗制冷水工艺中品种混杂的方法。
[0004] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 阳〇化]一种检测海带育苗中品种混杂的方法，将接种雌配子体克隆的苗绳分别置于培养 基或海带育苗制冷水循环系统内培养，置于培养基内获得孤雌生殖抱子体，海带育苗制冷 水循环系统内培养获得后代抱子体，检测制冷水循环系统内苗绳上的后代抱子体形态特征 W及基因型，与孤雌生殖抱子体进行比较，确定育苗过程中品种是否混杂。
[0006] 其中，苗绳上的后代抱子体形态特征比较，孤雌生殖的抱子体崎形率较高，而正常 受精形成的抱子体形态正常。孤雌生殖的抱子体在SSR位点仅能获得单一性的等位基因片 段，而受精形成的后代抱子体在SSR位点上能够表现出多态性特征。
[0007] 所述后代抱子体是将接种雌配子体克隆的苗绳置于海带育苗制冷水循环系统内 培养，使单克隆雌配子体苗绳经历育苗系统内海带夏苗培育过程中的配子体发育阶段（卵 子和精子排放W及后续的受精过程），形成后代抱子体。
[0008] 进一步的说，将单克隆雌配子体和苗绳在低光条件下共同充气培养，直到雌配子 体牢固附着于苗绳上，完成单克隆雌配子体苗绳的接种；将接种有雌配子的苗绳培养直到 配子体形成卵囊，完成单克隆雌配子体苗绳的发育培养；而后将一部分苗绳置于育苗系统 制冷水循环系统内，使单克隆雌配子体苗绳经历海带夏苗培育过程中的配子体发育阶段 (卵子和精子排放W及后续的受精过程），形成后代抱子体，另一部分苗绳置于烧杯中培 养，使单克隆雌配子体苗绳完成孤雌生殖生活史，形成孤雌生殖抱子体；待两种苗绳上的抱 子体长至3-5cm，检测制冷水系统内苗绳上的后代抱子体的形态特征与基因型，与孤雌生殖 抱子体的形态特征与基因型进行比较，确定海带育苗制冷水系统内培育的海带品种是否混 杂。
[0009] 所述营养生长的海带单克隆雌配子体，采用高速打碎机破碎至3-10个细胞，将 打碎的雌配子与育苗绳共同充气培养，置于PES培养基中，于10-12°C，光强10-20ymol photonsm-2s-1，光周期为12:12(L:D)的条件下，直到雌配子体牢固附着于苗绳上，完成 单克隆雌配子体苗绳的接种；将上述接种有雌配子的苗绳置于PES培养基中，于10-12°C， 光强50-60]imolphotonsm-2S-1，光周期为12:12(L:D)的条件下，直到配子体形成卵囊， 完成单克隆雌配子体苗绳的发育培养。
[0010] 所述将一部分形成卵囊的单克隆雌配子苗绳，在海带夏苗培育过程中配子体发 育阶段，转移到生产育苗的制冷水循环系统的入水槽和育苗池内，使单克隆雌配子体苗绳 度过海带苗帘由配子体向抱子体大规模转化阶段，形成后代抱子体，直至抱子体长度为 3-5cm〇
[0011] 所述将另一部分形成卵囊的单克隆雌配子体苗绳，继续培养在烧杯中，置于PES 培养基中，于l〇-12°C，光强50-60]imolphotonsm-2S-1，光周期为12:12(L:D)的条件下， 直到卵囊排卵，完成单克隆雌配子体的孤雌生殖生活史，形成孤雌生殖抱子体，直至抱子体 长度为3-5畑1。
[0012] 所述入水槽地势高于育苗池，使制冷水依据地势特点，从高处流向低处，优先流过 入水槽。
[0013] 所述育苗系统内自然海水经过沙滤后，输入到降溫池，降溫后输入到冷水储存池， 之后累入到入水槽，顺势流进育苗池，海水流经育苗池中的海带苗帘，汇集后经第二套过滤 池再次输入到降溫池降溫，之后进入育苗循环水系统中，再次使用。
[0014] 本发明所具有的优点：
[0015] 1.本发明充分考虑制冷水循环的路径特点，利用入水槽与育苗池为阶梯势流水系 统，且地势高于育苗池，通过检测入水槽处放置的雌配子体苗绳能否获得外源抱子体，可W 反映育苗池海带苗帘上的品种混杂问题。
[0016] 2.本发明采用孤雌生殖抱子体形态崎形而受精抱子体形态正常的特点，确定在地 势高的入水槽处放置的单克隆雌配子体苗绳产生了形态正常的受精抱子体。
[0017] 3.本发明依据单克隆雌配子与孤雌生殖抱子体微卫星位点等位基因片段单一，而 受精抱子体的微卫星位点等位基因具有多态性，进一步证实了入水槽处放置的单克隆雌配 子体苗绳形成了受精抱子体。 阳〇1引【附图说明】书
[0019]图1为本发明实施例提供的海带夏苗工艺中的低溫水循环系统示意图。
【具体实施方式】 阳〇2〇] 实施例1
[0021] 将长期保存的营养生长的丝状海带单克隆雌配子体（雌配子体的获取W及生长 t青青参考LiJin邑，P曰n邑Sh曰ojun,Sh曰nTifen邑，LiuFen邑，G曰0Suqin.Zoospore-derived monoeciousgametophytesinUndariapinnatifida(Phaeophyceae).ChineseJournal ofOceanologyandLi皿ology. 2014. 32 (2): 365-371.文献中的记载），置于高速打碎机 中，W2000r/min的速率将丝状雌配子体破碎至3-10个细胞。随后，将打碎的雌配子与50cm 的苗绳共同充气培养在1L的烧杯中，置于PES培养基中，于溫度12 °C，光强10-20ymol photonsm-2s-1，光周期为12:12(L:D)的光照培养箱中培养。
[0022] 待到雌配子体牢固附着于苗绳上时，将培养光线提高至50-60ymolphotonsm-2 s-l，W使雌配子体发育形成卵囊。随后，在海带夏苗培育过程中的配子体发育阶段（卵子 和精子排放W及后续的受精过程），将已经完成发育并形成卵囊的一部分苗绳转移到生产 育苗的水循环系统内，分别放置在育苗池中和育苗池的入水槽处（请参考图1所示）。另一 部分苗绳继续在培养箱中培养，使其完成孤雌生殖生活史过程。每组设置=个重复。
[0023] 待到海带育苗池中的苗帘完成由配子体到抱子体的转化后，将放置于