000粒以 上，将选取的种子用〇. l%Hgcl消毒lOmin，然后用蒸馏水冲洗4-5次，之后浸种、催芽， 直至种子破胸、露白即可； S2沙培基质准备：将大小均匀且消毒后的细沙装在培养皿/箱中，使细沙高度为 1.5~2.0cm ;之后往培养皿中加入配制好的浓度为0.5%盐溶液至细沙湿润、种子萌发即 可，3次重复，每个重复能够播种2000粒以上；每个重复要根据培养皿/箱的大小可以设置 多个培养皿；所述浓度为0.5%盐溶液由5g Nacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成； S3盐胁迫培育幼苗：将破胸露白的Y4-2AB种子均匀播种在培养皿内的沙培基质上， 然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿/箱放置在人工气候箱中，温 度保持28~30°C，湿度保持70~75% ;3~5d后培养皿/箱中保持0. 5%盐浓度的薄水 层，同时每12h更换一次0. 5%盐溶液。
[0016] S4幼苗生长观察记载：连续观察记载出苗后至3~4叶期的Y4-2AB的幼苗生长 情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量，而在盐胁迫 条件下生长正常的秧苗数量，所述3~4叶期播种后15d左右； S5计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为Y4-2AB实际纯度；所述 受检样品纯度计算公式是如下： 受检样品纯度（%) = (供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数）/供检样品幼苗 总株数XI00。
[0017] 经过试验发现，三年间Y4-2AB种子纯度检验结果与田间种植鉴定纯度结果对照 比较，二者的结果高度一致，见如下表1、2、3。
[0018] 表1第一年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表
表2第二年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表
表3第三年利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表
由表1、表2、表3可知，经t测验：各年度利用耐盐性检测Y4-2AB种子纯度与田间种 植鉴定纯度结果之间的差异不显著，说明两种不同方法检测的纯度结果的一致性。同时也 说明利用不同油菜品种耐盐性的差异不仅可以鉴定两系不育系Y4-2AB的真实性和种子纯 度的检验，而且相对于田间种植鉴定方法，其纯度检测准确、快捷、实用。
[0019] 应当理解的是，本发明提供的方法不仅可以通过幼苗形态鉴定与Y4-2AB固有的 高耐盐性结合起来检测种子纯度，也可以用于鉴定耐盐性较好的其他油菜两型系不育系种 子纯度的鉴定，于本领域的技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些 改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
【主权项】
1. 一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在于，包括如下步骤： S1浸种催芽； S2沙培基质准备； S3盐胁迫培育幼苗； S4幼苗生长观察记载； S5计算受检样品纯度。2. 根据权利要求1所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述步骤S1具体按照以下方式实施： 选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的Y4-2AB种子，将选取的种子用0. l%Hgcl 消毒lOmin，然后用蒸馏水冲洗4-5次，之后浸种、催芽，直至种子破胸、露白即可。3. 根据权利要求2所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述步骤S2具体按照以下方式实施： 将大小均匀且消毒后的细沙装在培养皿/箱中，使细沙高度为1. 5~2. 0cm ;之后往培 养皿中加入配制好的浓度为0.5%盐溶液至细沙湿润、种子萌发即可，3次重复，每个重复能 够播种所选种子的三分之一；每个重复要根据培养皿/箱的大小可以设置多个培养皿。4. 根据权利要求3所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述浓度为0.5%盐溶液由5g Nacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成。5. 根据权利要求3所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述步骤S3具体按照以下方式实施： 将破胸露白的Y4-2AB种子均匀播种在培养皿内的沙培基质上，然后用消毒过的细沙 进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿/箱放置在人工气候箱中，温度保持28~30°C，湿 度保持70~75% ;3~5d后培养皿/箱中保持0. 5%盐浓度的薄水层，同时每12h更换一 次0. 5%盐溶液。6. 根据权利要求5所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述步骤S4具体按照以下方式实施： 连续观察记载出苗后至3~4叶期的Y4-2AB的幼苗生长情况，统计连续出现叶尖发生 卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量，而在盐胁迫条件下生长正常的秧苗数量， 所述3~4叶期播种后15d。7. 根据权利要求6所述的一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，其特征在 于，所述步骤S5具体按照以下方式实施： 受检样品纯度为3次重复平均值，即为Y4-2AB实际纯度；所述受检样品纯度计算公式 是如下： 受检样品纯度（%) = (供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数）/供检样品幼苗 总株数XI00。
【专利摘要】本发明公开了一种油菜两型系不育系Y4-2AB种子纯度检测方法，通过在0.5%盐浓度胁迫条件下，将两系不育系Y4-2AB种子在实验室培育幼苗，出苗后至3-4叶期，观察记载幼苗生长情况，出现不发苗或者发苗后连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎焉、生长减缓症状的、说明不耐盐即为杂株；而在盐=浓度胁迫条件下生长正常的，说明耐盐即为Y4-2AB，从而计算出Y4-2AB种子纯度。该检测方法通过幼苗形态鉴定与Y4-2AB固有的高耐盐性结合起来检测种子纯度，也可以用于鉴定耐盐性较好的其他油菜两型系不育系种子纯度的鉴定，具有准确、快捷、简单实用、省时省工的优点。
【IPC分类】A01G31/00, A01G7/06
【公开号】CN105284564
【申请号】CN201510649602
【发明人】万林生, 孙红芹, 倪正斌, 单忠德, 严国红, 孙明法, 姚立生, 王爱民, 朱国永, 唐红生, 张桂云, 施伟, 刘凯
【申请人】江苏沿海地区农业科学研究所
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年10月10日