鼓槌石斛种苗商品化生产方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及食药观植物鼓槌石斛种苗商品化生产方法，属于植物生物技术领域。
【背景技术】
[0002]鼓槌石斛（Dendrobium chrysotoxum)为兰科石斛属多年生附生草本植物,别名金弓石斛，是一种集食、药、观赏为一身石斛种类，鼓槌石斛花呈金黄色，茎呈纺锤形，观赏价值极高，既可作切花和盆栽观赏，花又可开发系列鼓槌石斛茶、酒、鲜花饼等产品，鼓槌石斛花资源丰富，据报道含有22个化合物，具有美容明目、安神补血、抗癌解郁、降三高等功效；其茎可药用，具有清热解毒，增强免疫力等功效，由于鼓槌石斛资源花的差异大而颜色多，以唇瓣中心斑块颜色为紫红色最艳丽，茎的长短、粗细差异大而形态多，以中杆茎粗的品质及观赏最佳；近年来，人们过渡采挖，加上自然条件下种子萌发率极低，导致野生资源濒临枯竭，那么选择优良鼓槌石斛进行人工杂交授粉选育出新品种，进行组培快繁育苗，为鼓槌石斛规模化种植提供大量优质种苗，解决市场上原料紧缺，加快创新育种的进程，对其资源的保护及开发利用具有深远的意义。
[0003]近年来，有关鼓槌石斛组培繁殖有一些报道，通过组织培养试验也获得一定的组培苗，但在石斛规模化生产技术上，培育的种苗根细而少，种胚萌发率低75%，污染率高达10%，种苗繁殖周期长（8个月以上），种苗生产成本高达1. 2元/丛，因此，开展鼓槌石斛有性系的组培繁育研究，提高鼓槌石斛种苗商品化生产技术，还存在以下问题：
[0004]1、由于鼓槌石斛种质资源性状上差异较大，而在产量上遗传性比较稳定，茎、叶、花的生长差异明显，鼓槌石斛自然结果，在光照和水肥不足，果荚发育小而不好，品种的纯度性低，导致萌发率低、增殖速度慢、种苗质量差。
[0005]2、目前，鼓槌石斛种苗主要是采用分株繁殖，原材料浪费大，发芽率低，难以满足市场需求；而鼓槌石斛现有的组培技术，是以自然结果的果荚为外植体，种胚萌发率低、种苗生产速度慢、苗黄化严重、增殖倍数低等问题使种苗生产速度慢、生根苗质量差、炼苗和移栽成活率低、生长慢，极大的影响了鼓槌石斛种苗商品化生产的规模和速度。
[0006]加快鼓槌石斛种苗商品化生产速度，降低成本，提高移栽成活率、鲜花产量、增加花观赏价值及有效成份含量是急需解决的问题。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是提供一种鼓槌石斛人工有性杂交授粉育种，培育良种，种苗商品化生产速度快、生产成本低、自然光炼苗和假植培育成活率高、出圃率高的种苗商品化生产方法。
[0008]鼓槌石斛种苗商品化生产方法，包括以下方法步骤：
[0009]良种选育方法：
(1)优良母株选择：
鼓槌石斛的盛花期为4?5月，选择生长健壮花期长、花朵大而艳丽、植株形态美观、有效成分高的优良母株进行种内人工杂交异株异花授粉；
(2)杂交授粉方法:
①工具:直径6cm培养皿一套，7cm小镊子1把，75%酒精和棉球，套袋，标签；
②授粉方法:一般在早上10点以前，镊子用75%酒精消毒后，将花药取出放在培养皿中，再用镊子去掉母本上花朵的药帽，将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内，每授一朵花，镊子、培养皿用75%酒精消毒后才能再使用，每穗花穗授粉5?8朵，授完粉后，用白色无纺布做成口袋套上，挂上标签，2?3天之内不能浇水，加强大田管理，保证充足阳光，提高果实的质量，一般经过150?180天果实成熟。
[0010]基本母液采用改良的MS(无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用)为Ma的制备方法:大量元素配成50倍液(用量20毫克/升)，微量元素配成200倍液(用量5毫克/升)，植物激素配成50倍液，所有药剂用纯净水溶解定容，微量元素用低温保存，母液保存不要超过一个月。
[0011]培养基的配制方法:按培养基的配方要求，称取去皮的马铃薯或香蕉，按马铃薯或香蕉:水(体积比)=1: 3，用果汁机打碎成泥加入定容桶内，量取母液和激素、称取琼脂和白糖，按琼脂粉+白糖:母液+水(混合，体积比)=1: 5，用木棍边搅边加热至沸腾加入定容桶内，用纯净水定容，充分混合均匀，用1摩尔的NaOH (氢氧化钠)和HC1 (盐酸)溶液调PH值5.8-6.0，将培养液倒入不锈钢桶内放在恒温磁力搅拌器(900?1000r/min)不停搅拌，用塑料杯趁热分装，分装标准:小瓶18?20瓶/L，大瓶9?10瓶/L ;培养基厚度:小瓶1.4?1.6cm，大瓶2.0?2.2cm，在123?125°C高温下灭菌20分钟，出锅时拧紧瓶盖，标签注明培养基编号、日期，放置3天后备用。
[0012]瓶苗培育:
(1)外植体选择与消毒:
将成熟未开裂的果荚用0.01 %洗衣粉冲洗干净后，经75 %酒精浸泡60秒，用0.1 %HgC12 (升汞)灭菌20分钟，然后用无菌水冲洗5?6次，过滤纸吸干水分；
(2)培养基与培养条件:
①原球茎诱导培养:切开消毒过的果荚，将种子接种于l/2Ma+NAA(a-萘乙酸)0.1毫克/升+2%马铃薯泥培养基上进行诱导培养，暗培养5d，再转入光照培养，5d后，种胚漫漫吸水膨大，逐渐撑破种皮，形成针尖样淡绿色原球茎，培养45天后，诱导大量的类原球茎或分化小苗；
②增殖分化培养:将分化的小苗接种于3/4Ma+6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.1毫克/升+ΝΑΑ0.2毫克/升+8%马铃薯泥+2%香蕉泥培养基中进行增殖分化培养，苗间距1.5?2cm，2?3株/丛，培养50天后，长成高2?3cm丛生苗，叶2?4片；
③壮苗生根培养:将2?3cm高的丛生苗接种于3/5Ma+IBA(吲哚丁酸)0.2毫克/升+NAA (c [_萘乙酸)0.5毫克/升+AC (活性炭)0.5克/升+3 %马铃薯泥+7 %香蕉泥培养基中进行壮苗生根培养，苗间距2?2.5cm, 1?2株/丛，培养60天后，每丛苗高4?6cm，根长3_4cm,生根数6?8条/株；
④培养条件:白糖20克/升，琼脂粉4克/升，PH值5.8?6.0，培养温度25±2°C，光照强度1600?20001x，光照时间12小时/天。
[0013]假植培育: (1)炼苗:选取生根苗株高3?5cm，根长3cm以上，将瓶苗置于荫蔽度75%的塑料大棚内炼苗20d，苗瓶之间间隔1?2cm，通风透气，控制好光照；
(2)栽培基质:杂木屑:树皮屑:腐质土(混合，体积比)=1:1:1，假植前l-2d，将基质配比好，均匀铺在苗床上，苗床的标准(高80cm、宽120cm、长10m)，用0.1 %?0.2 %高猛酸钾等消毒液将基质淋透消毒处理，基质厚度为8?10cm,下层4cm为粗基质，上层4cm为细基质；
(3)移栽:移栽时将瓶苗取出，洗净根上附着的培养基，用0.05%精甲、咯菌腈+0.1%百毒剂+0.01%硫酸铜混合液浸泡lOmin，捞起放在透气塑料筐中晾干至根部发白后移栽，按3株/丛，株行距5cmX 5cm，移栽时根基部与基质平，根不能外露，苗不能睡倒在基质上，根据天气情况，掌握浇水次数，保持基质湿润，控制好光照，移栽10d后，可结合浇水喷一些低浓度叶面肥，培育60?90d后即可出圃移栽；
(4)出圃:将抽新根发新叶达到标准的苗，轻轻拔起，不要伤根，按10丛/捆，用2cm宽的报纸条缠紧，整齐放进纸箱内，标明出苗日期和数量。
[0014]本发明技术方案具有以下有益效果:
选用鼓槌石斛良种进行快繁；采用改良的基本培养基Ma与标准基本培养基MS相比无水氯化钙、铁盐浓度减半、肌醇不用；附加物马铃薯和香蕉去皮直接打成泥，可减少用量，提高营养成分，琼脂粉、糖、母液加热至沸腾，有利于培养基均匀溶解，降低污染率，本方法有效解决了鼓槌石斛优良种苗的来源和种苗纯度性，与常规种苗组培快繁相比，种胚萌发率提高到98%以上，生产成本降低20%，生长周期缩短了 60天，污染率降低5%，炼苗、移栽成活率提高到95%以上；种苗假植培育60?90天，可出售或规模化栽培，与分株繁殖种苗种植相比，本发明培育鼓槌石斛种苗种植的每丛新抽生的幼芽增加5?7株。
【具体实施方式】
[0015]鼓槌石斛种苗商品化生产方法，包括以下方法步骤:
[0016]良种选育方法:
(1)优良母株选择:
鼓槌石斛的盛花期为4?5月，选择生长健壮花期长、花朵大而艳丽、植株形态美观、有效成分高的优良母株进行种内人工杂交异株异花授粉；
(2)杂交授粉方法:
①工具:直径6cm培养皿一套，7cm小镊子1把，75%酒精和棉球，套袋，标签；
②授粉方法:一般在早上10点以前，镊子用75%酒精消毒后，将花药取出放在培养皿中，再用镊子去掉母本上花朵的药帽，将父本的花药小心放入母本花朵的柱头窝内，每授一朵花，镊子、培养皿用75%酒精消毒后才能再使用，每穗花穗授粉5?8朵，授完粉后，用白色无纺布做成口袋套上，挂上标签，2?3天之内不能浇水，加强大田管理，保证充足阳光，提高果实的质量，一般经过150?1