的转基因种子。最优选的外源基因源自苏云金芽孢杆菌 (B.thuringiensis) 〇
[0153] 令人感到意外地是，在化学昆虫防治剂存在的情况下，该细菌孢子不仅可保留其 杀线虫和/或杀真菌活性，还具有增强植物根系定殖的能力。这种增强能力导致其杀线虫 和/或杀真菌活性的扩增，因而，生长势得到改善，转而使产量得到提高。
[0154] 下述非限制性实施例的描述将能更彰显本发明的优点。下述实施例仅为本发明优 选的实施例。如下述实施例所述，根据本发明的组合物，通过组合农业上有效量的至少一种 环保的生物控制剂和至少一种昆虫防治剂可意外地改善整体植物的生长势和产量。这些意 想不到的效果归功于生物控制剂的杀线虫和/或杀真菌特性和昆虫防治剂的根际增强特性 的组合。下述实施例中进一步说明，在化学昆虫防治剂存在的情况下，该细菌孢子令人意外 得不仅可保留其杀线虫和/或杀真菌活性，还具有增强植物根系定殖的能力。这种增强能力 导致其杀线虫和/或杀真菌活性的扩增，因而，生长势得到改善，转而使产量得到提高。
[0155] 实施例1
[0156]设计试验证明某些细菌具有定殖根系的能力。在该特定的试验中，将未经处理的 棉花种子和用坚强芽孢杆菌(B.firmus)(-种生物控制剂)处理过的棉花种子种植到经高 温灭菌去除天然菌群的土壤中。三周后，收集幼苗。使用无菌水和拍击式均质机处理根系， 收集根系细菌。
[0157]在含有多种细菌的所有样品中，只有种子经过处理的根系中分离出了坚强芽孢杆 菌(B.firmus)。本实验表明，当坚强芽孢杆菌用作种子处理剂时，能在根际生长和繁殖。
[0158] 实施例2
[0159] 然后改变收获方式进行实施例1的试验。收获时，取种子经过处理的植物的一半根 系，然后再用无菌水中漂洗30s，将全部根系直接置于胰蛋白大豆琼脂培养基上，而非均质 机中。在种子未经处理的样本中仍然没有分离到B.firmus，而在种子经过处理的样品未漂 洗根系中分离到了 B.firmus，其与获得的优势细菌种类不一致。然而，经漂洗的根系中不仅 分离到了B.firmus，而且证明了其为优势细菌种类。本实验证明当使用B.firmus作为种子 处理剂时，其不仅能在根际生长和繁殖，事实上，还具有定殖根系的能力。还利用其它农业 上的有益细菌进行类似的试验以证明根部的定殖作用。
[0160]为进一步证明分离自该试验的经漂洗根系的细菌与用于原始处理的菌种和菌株 相同，进行500bp的DNA分析和RNA比对。测试结果表明，该收获的细菌不仅为相同菌种，还具 有无与来自用于播种处理的细菌无法区分的RiboPrint图案。
[0161] 实施例3
[0162] 开展一项可证明通过使用新烟碱类杀虫剂可获得根系增强的试验。在此试验中， 用杀真菌剂和三种常用新烟碱类杀虫剂中的一种处理棉花种子。这三种新烟碱类杀虫剂 为：吡虫啉（商品名GAUCH0600@375mg ai/种子）；噻虫胺（商品名PONCHO 600@375mg ai/种 子）；噻虫嗪(商品名CRUISER@34mg ai/种子）。
[0163] 表1 「01641 L u I oa」 U1KL1'衣Λ、」职
[0166] 种植50颗分别来自四种处理的种子。植物生长于室内、温控的人工气候箱的标准 土壤上，未发现明显的疾病或昆虫压力。栽植28天收获幼苗并利用课MRMzo?根部分析系 统进行分析。其在发芽上无明显的差异。
[0167] 表1中，通过平均各类别加括号的中数的10次重复分析每种处理40~45棵植物比 较长度、表面积、体积和尖端/分支/交叉。基于最小显著差数(LSD)以及误差幅度为0.05，结 果表明，虽然在类别和处理间具有差异，但与基础处理相比，在四个类别中，全部新烟碱类 杀虫剂均能提供统计学上显著的生长反应，。
[0168] 实施例4
[0169] 接下来的试验用来证明通过结合生物杀线虫剂和非杀线虫新烟碱类杀虫剂可获 得意想不到的杀线虫效果。用基础杀真菌包和生物杀线虫剂吡虫啉（商品名GAUCH0 6000 62.5gm AI/100kg)，或其组合处理大豆种子(S2743-4RR品种）。然后将该种子种入标准土壤 及感染大豆包囊线虫的土壤内。28天后收割植物（~50棵植物/处理/ 土壤类型），并通过高 度比较和WinRhio根部分析系统分析(长度、表面积、体积、尖端、分支和交叉(T/F/C))。
[0170] 表2
[0171]
[0172] 1. )NI_新烟碱类杀虫剂;2. )NI (SCN)_新烟碱类杀线虫剂w/大豆包囊线虫;3. )BN-生物杀线虫剂;4. )BN(SCN-)_生物杀线虫剂w/大豆包囊线虫;5. )NI/BN-新烟碱类杀虫剂和 生物杀线虫剂;6.)NI/BN(SCN)_新烟碱类杀虫剂和生物杀线虫剂w/大豆包囊线虫。
[0173] 表2的最后一列是比较在大豆包囊线虫压力下，各处理组的平均差异百分比。单独 使用上述新烟碱类杀虫剂处理的植物的地上部分和地下部分均造成发育迟滞以及53%的 总平均降低。生物杀线虫剂呈现低于半数差异百分比的线虫控制效果，为23%。最佳的整体 处理为生物杀线虫剂和杀虫剂的组合，在整体植物发育上只有8%的差异。
[0174] 单独使用无直接杀线虫活性的杀虫剂似乎可影响及加强生物杀线虫剂的杀线虫 活性。
[0175] 实施例5
[0176] 当分析产量数据时必须考虑许多因素，由于即使在同一地块，环境条件和有无不 同的疾病/线虫/昆虫压力也会存在波动，比较研究比较难以进行。虽然存在可变性，通过足 够大量的数据组也可表现出变化模式。
[0177] 表3列举了来自10个田间试验的平均值，该田间试验用来比较化学杀真菌剂对照 (基础处理)和基础处理与生物杀真菌剂、新烟碱类杀虫剂以及生物杀真菌剂和新烟碱类杀 虫剂的组合。表3除了植物栽植于已知线虫感染的区域以及使用生物杀线虫剂替代生物杀 真菌剂之外，还包括7个来自于类似试验方案的田间试验。17个田间试验包含2007年间两个 试验方案的收集的全部数据的平均值。
[0178] 表3
[0179]
[0180] FC =杀真菌剂对照;BF =生物杀真菌剂;BN=生物杀线虫剂;NI =新烟碱类杀虫剂 [0181] 利用计算协同作用的Golby公式的方程式(参考1964年4月11日S.R.Golby的论文 "除草剂组合物的协同和拮抗反应的计算"，马里兰州，马里兰大学帕克学院，农学系马里兰 农业试验中心，科学论文编号为A1271)，利用单独使用生物控制剂的产量增长率(P1)和单 独使用新烟碱类杀虫剂的产量增长率(P2)来计算生物控制剂和新烟碱类杀虫剂组合的预 期产量增长率(E)。
[0182] E = P1+P2-(P1(P2)/100)
[0183] 上述试验使用这一公式计算，该杀真菌试验中，组合处理的预期的增长率为 1.99% (然而实际为3.93%)，杀线虫剂试验中，组合处理的预期增长率为4.95(然而实际为 5.27%)〇
[0184] 已公开了本发明的主题，显而易见的是可根据本发明可作出许多的改良、取代和 变化。应了解本发明除了特定具体实施例之外，可利用其它方式被执行。此类的改良、取代 和变化仍属于本发明的范围内。当用于下述的权利要求时，冠词如"一"、"该"等对其后的主 词而言均隐含单数或复数的意思。
【主权项】
1. 一种包含坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)CNCM 1-1582孢子和昆虫防治剂的组合 物，其中所述昆虫防治剂选自噻虫胺； 其中 基于包含1011个/g孢子的孢子形成细菌的制剂，所述孢子形成细菌与所述昆虫防治剂 的比例为100:1-1:100; 所述昆虫防治剂为基于整个制剂的l%w/w至约80%w/w。2. 如权利要求1所述的组合物，还包含一种杀真菌剂。3. 如权利要求2所述的组合物，其中，所述杀真菌剂选自：嘧菌酯、啶酰菌胺、B Y F 14182、多菌灵、萎锈灵、咪唑菌酮、咯菌腈、氟吡菌胺、氟嘧菌酯、氟喹唑、粉唑醇、种菌唑、异 菌脲、异噻菌胺、精甲霜灵、甲霜灵、戊菌隆、咪鲜胺、丙硫菌唑、吡唑醚菌酯、嘧霉胺、硅噻菌 胺、戊唑醇、福美双、甲苯氟磺胺、三唑醇、咪唑嗪、肟菌酯、杀铃脲、灭菌唑。4. 根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，还包括异黄酮和土壤接种剂。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，还包括活性成分或生物控制剂。6. -种处理方法，包括将权利要求1-5中任一项所述的组合物施用至种子、植物或植物 生长的土壤或期望植物生长的土壤。7. -种包含权利要求1-5中任一项所述组合物的种子处理制剂。8. 用于浸润或沟施的包含权利要求1-5中任一项所述组合物的喷雾制剂。9. 处理植物的方法，包括提供至少一种权利要求2-5中任一项所述的组合物并将该组 合物施用至植物的步骤，所述组合物包含 a) 基于整个制剂，l%w/w至约80%w/w的所述昆虫防治剂或所述杀真菌剂 b) 基于包含1011个/g孢子的孢子形成细菌的制剂，所述孢子形成细菌与所述昆虫防治 剂或杀真菌剂的比例为100:1-1:100。10. 如权利要求9所述的方法，其中将组合物施用至土壤、种子、果实和/或植物或植物 的一部分。11. 如权利要求10所述的方法，其中，所述种子选自大豆、小麦、大麦、水稻、油菜、甜菜、 番茄、架豆、胡萝卜、棉花和玉米种子。12. 如权利要求9所述的方法，其中将所述组合物在种子发芽之前施用至土壤和/或直 接施用至与植物根部接触的土壤或期望植物生长的土壤。
【专利摘要】本发明通过组合农业上有效量的至少一种环保型生物控制剂和至少一种昆虫防治剂和/或杀真菌剂，提供了一种能改善整体植物的生长势和产量的组合物。本发明提供的组合物对植物寄生性线虫和真菌特别有效。本发明组合物在减少昆虫压力的同时，还可增强植物根系，并改善根际内生物控制剂的建立，从而增强其有效性。应用本发明的组合物可从整体上降低植物寄生性线虫或真菌导致的作物损失，而且这种降低效果远大于单独使用各组分所产生的预期效果。本发明还提供使用本发明组合物的方法。而且，根据本发明的组合物表现出杀虫、杀线虫、杀螨或杀真菌的协同活性。
【IPC分类】A01N51/00, A01G13/00, A01P5/00, A01P7/02, A01P3/00, A01C1/00, A01N63/00, A01P7/04
【公开号】CN105580844
【申请号】CN201610125520
【发明人】乌弗姆·安德施, 保罗·哈文·埃文斯, 贝恩德·施普林格, 凯文·巴格, 詹妮弗·里格斯, 纪渝·罗伊·陈
【申请人】拜耳知识产权有限责任公司
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2009年4月7日
【公告号】CA2720554A1, CN102065697A, EP2259685A2, EP2259685B1, EP2698063A1, EP2700317A1, EP2918172A1, US20110110906, US20150125434, WO2009124707A2, WO2009124707A3, WO2009124707A8