一种高油酸油菜品种的培育方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于油菜育种技术领域，具体涉及一种高油酸油菜品种的培育方法。本发 明涉及利用小孢子培养、分子标记辅助选择和气相色谱法相结合选育优良高油酸油菜品系 的方法。
【背景技术】
[0002] 油菜种子中脂肪酸组成直接决定菜籽油的食用品质和营养价值。油酸是一种十八 碳单不饱和脂肪酸。普通油菜种子中油酸含量为17-65%，本发明中的高油酸油菜是指种子 及菜籽油脂肪酸中油酸的比例大于75%的油菜品种及其衍生的菜籽油。
[0003]高油酸食用油，包括高油酸菜籽油，在食用油和工业上有很高的应用价值。高油酸 食用油的氧化稳定性高，在煎炸食物时，高油酸食用油高温不起烟，能够缩短煎炸时间，减 少油吸收过量(Miller等，Genetic control of high oleic acid content in sunflower oil. Crop Sciences，1987,27:923-926)。在日常饮食中，高油酸可降低血液中的低密度脂 蛋白胆固醇的含量，从而有利于阻止动脉血管硬化(Chang等，Effects of the ratio of polyunsaturated and monounsaturated fatty acid on rat plasma and liver lipid concentration · Lipids，1998，33:481-487)。由于油酸的十八碳链长度与柴油组分相似，高 油酸菜籽油可用于生产优质生物柴油，是重要的可再生性能源原料(Piazza等，Rapeseed oil for oleo chemical uses.Eur J Lipid Sci Techno 1,2001,103:405-454)。
[0004] 培育高油酸油菜是国内外油菜育种的主要目标之一。目前在中国还没有高油酸油 菜品种通过审定。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种油菜高油酸品种的培育方法，该 方法利用普通油酸含量（小于69%)的油菜品系或品种与高油酸（种子中油酸含量大于 75%)油菜材料为亲本进行杂交，利用气相色谱分析和小孢子培养的辅助方法，通过杂交在 上述材料的杂交后代中培育出高油酸油菜选系，即获得油酸含量大于78%的非转基因高油 酸油菜材料和品种。
[0006] 本发明的技术方案如下所述：
[0007] (1)以甘蓝型油菜品系甲A177为母本(2012年测定油酸含量65%)【该材料的种子 已于2009年11月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为 CCTCCN0:P200908;该生物材料已在专利号为ZL 2009 102734352,申请公布号为 CN101824472A，即本申请人的专利文献中公开，本申请不需要重新提交生物材料保藏与公 开】与高油酸含量甘蓝型油菜新资源甲H003为父本(2012年测定的油酸含量为80%。申请人 将所述的父本命名为油菜高油酸种子甲H003，Brassica napus L.甲H003,于2016年1月25 日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC N0 P201604)杂交，通过人工去雄，得到F1;
[0008] (2)种植上步所得的FI，取花蕾进行小孢子培养（小孢子培养培养方法参见：余凤 群等，提高甘蓝型油菜小孢子胚状体成苗率的某些培养因素研究，作物学报，1997,23(2): 165-168)获得分离的双单倍体(简称DH系)群体；
[0009] (3)利用高油酸分子标记(例如YQ-Fad2a-1)对DH系群体的每一个株系的幼苗进行 标记分析，可以在苗期获得每个株系的油酸基因型（该分子标记的制备及其应用方法参见 申请人，专利号为ZL 2009102734352文献，申请公布号CN101824472A;申请公布日： 2010.09.08)，通过分子标记分析可以减少花期及后续种子分析的工作量，提高鉴定的准确 性；
[0010] 所用的分子标记引物(YQ_Fad2a-l，本发明中所称的分子标记和分子标记引物为 同一对序列)如下：
[0011] 正向引物5，-CAGTTCACTCTCGGCAGC-3，，
[0012] 反向引物5，-GCAACTCCTTGGACAGCA-3 ' ；
[0013] (4)利用气相色谱仪测定每个株系种子的油酸含量(测定方法参照:杨燕宇等.无 芥酸甘蓝型油菜十八碳不饱和脂肪酸含量的QTL定位.作物学报，（2011) .37(8): 1342-1350)，确认每个初选系的油酸含量；
[0014] (5)种植种子中油酸含量大于75%的DH系，考察各个株系的全株角果数、每角果粒 数、千粒重、单株产量4个性状;筛选得到全株角果数、每角果粒数、千粒重、单株产量4个性 状的优于普通油酸(油酸含量小于69%)含量亲本的株系，获得种子油酸含量大于78%的高 油酸油菜选系和品种。
【附图说明】
[0015]图1:利用分子标记引物(YQ-Fad2a-1)对高油酸FAD2基因在24个DH系材料中油酸 基因型鉴定结果。附图标记说明：编号为2、3、4、5、9、10、11、12、13、15、16、17、18、21、24的样 品，有扩展产物的DH系鉴定为高油酸（油酸含量大于75%)基因型，没有得到扩增产物的个 体(编号为1、6、7、8、14、19、20、22、23样品）为普通低油酸含量(油酸含量小于69%)基因型。
[0016]本发明的积极效果如下：
[0017] (1)本发明利用油酸含量大于75%的甘蓝型油菜品系，通过与油酸含量小于69% 的优良甘蓝型油菜品系或品种为亲本进行杂交，在小孢子培养获得的纯系中进行高油酸分 子标记选择，可以提前分离出高油酸基因型，减少育种工作量;通过对种子脂肪酸的气相色 谱分析并结合后代农艺性状鉴定，可以选育出油酸含量稳定大于78%的非转基因高油酸材 料和品种。
[0018] (2)本发明为选育优良高油酸油菜品种提供了一种简单、快速、有效的方法。利用 该方法可进一步改良菜籽油的品质，提高菜籽油的市场价值，为高端食用油生产企业提供 优质原料，通过降低生产成本，提高企业经济效益和市场竞争力。
【具体实施方式】
[0019] 实施例1
[0020] (1)配制普通油酸含量和高油酸含量的F1组合
[0021] 以甘蓝型油菜品系甲A177为母本(油酸含量65%)【该材料的种子已于2009年11月 20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏号为CCTCC NO : P200908;该生物材料已在专利号为ZL 200910273435