草莓移栽苗组培方法
【专利摘要】草莓移栽苗组培方法，步骤包括：A、草莓外植体的选取，B、消毒灭菌，C、抗褐化培养，D、愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养，E、扩繁培养，F、生根培养，G、炼苗和移栽。其有益效果是，草莓苗组培程序简单，可在同一培养基中同时进行愈伤组织诱导、丛芽发生和增殖培养；组培周期短、繁殖系数高，整个快速繁殖过程只需三种培养基就解决了褐化现象、愈伤组织、丛芽发生和增殖、以及生根问题；试管苗不定根诱导未添加植物激素，炼苗移栽成活率高，生长迅速；种苗可保持同一基因型，繁殖后代不易褐化、病毒积累很少；抑制褐化的组培方法，成本低、时间短、育出的苗品质好且成活率高，性状稳定，能满足草莓高品质种苗的工厂化生产需求。
【专利说明】
草莓移栽苗组培方法
技术领域
[0001 ]本发明属于草莓苗组织培养技术领域，涉及一种草莓移栽苗组培方法。
【背景技术】
[0002]草莓传统上主要以匍匐茎和分株方式进行繁殖，这两种繁殖方式均存在周期长、系数低等问题。长期无性繁殖容易造成病毒在草莓植株体内积累，致使草莓种性退化，产量逐年降低。利用组织培养技术进行脱毒、快速繁殖是解决这些问题的有效途径。但现有的组织培养技术中，组培苗的整体应用处于较低水平，草莓组培苗外植体褐化现象严重、繁殖系数低、组培周期长、移栽成活率低，影响了草莓的产业化发展。
【发明内容】
[0003]本发明针对现有技术中，草莓苗组织培养技术存在褐化现象严重、繁殖系数低、组培周期长、移栽成活率低的问题，提供一种草莓移栽苗组培方法，其技术方案是:
一种草莓移栽苗组培方法，包括以下步骤:
A、草莓外植体的选取:选择长势良好、无病虫害、无畸形的健壮草莓植株，取其匍匐茎带节茎段，用手术刀切割为约2?3 cm长，获得草莓外植体；
B、消毒灭菌:将外植体先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再将外植体用质量比为10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，轻微震荡搅动后，流水冲洗30 min，置于超净工作台上的器皿中；再用质量比为50%的维生素C溶液浸泡3 min，用体积比为75%乙醇溶液处理10?15 s，再经质量比为0.1%的萊水溶液消毒8?10 min，最后用无菌水冲洗5?6次，每次不低于3 min，在整个消毒过程中充分摇动器皿；
C、抗褐化培养:在每升蒸馏水中加入20000~30000mg的硫代硫酸钠，100?150 mg的维生素C，1.0?5.0mg的活性炭，I.0~10 mg的氯化钠，30000 mg的鹿糖和5300 mg的琼脂粉配制成培养基I，培养基I的PH值在5.4-5.8之间；
将经消毒灭菌的外植体接入培养基I中进行培养，间隔7 d后，将外植体转接到另一个相同的新鲜培养基I中进行培养，外植体共转接3次完成抗褐化处理；
D、愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养:在每升蒸馏水中加入1.0-1.5mg的6-苄胺基嘌呤，0.1?1.0 mg的萘乙酸，0.05?0.1 mg的2 ,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5300?5500 mg的琼脂制成培养基Π，培养基Π的PH值在5.4-5.8之间；
将C中得到的外植体接入到培养基Π中，在光照度为1500?2000 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22 ± I °C的条件下进行愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养，5 d后在其节部和基部出现愈伤组织；10 d后愈伤组织迅速增殖，其表面开始出现绿色芽点；15 d后分化出不定芽丛；
E、扩繁培养:将D步骤中15d后分化出不定芽丛进行无菌分切，切成4-6株一丛，分别转接到另一个相同的新鲜培养基Π中，进行扩繁，培养30 d后，扩繁培养出种苗；
F、生根培养:在每升蒸馈水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5300-5500 mg的琼脂粉配制成培养基m，培养基m的PH值在5.4-5.8之间；
取E步骤中高3~4 Cm的健壮种苗，接种于培养基m中，放在光照度为1500?2000 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22±1 °C的条件下培养，培养45 d后获得苗壮根粗的生根苗；
G、炼苗和移栽:取6?8 cm高的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗3 d后，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将幼苗上残留培养基清洗干净，放入浓度为0.1-0.2%的多菌灵溶液中消毒2?3 min后，移栽至消毒后的沙土基质中保温保湿培养，生长30 d后，即得移栽苗。
[0004]本发明有益效果是:
1、用组织培养技术在培养室内可实现周年生产，既节约了土地资源，又提高了经济效益，克服了传统繁殖方式无法周年进行生产的难点。
[0005]2、解决了草莓属植物快速繁殖中易出现的褐化现象，种苗成活率和质量得到了提尚O
[0006]3、消除褐化后的外植体在同一培养基中同步进行愈伤组诱导、不定芽丛分化，大大缩短了草莓的体外繁殖周期，解决了前人未能同步诱导愈伤组织和芽丛分化的问题。
[0007]4、所有种苗可保持同一基因型背景，易于标准化、工厂化操作，有效地提高了种苗质量，可为大面积推广种植提供统一标准的优良种苗，解决了传统草莓繁殖后代易褐化、病毒积累多，性状不稳定而导致的种苗品质不一的难题。
[0008]5、试管苗不定根诱导未添加植物激素，炼苗移栽成活率高，且生长迅速，效果很好。
[0009]6、使用三种培养基分别进行抗褐化处理，愈伤组织、丛芽发生和增殖处理以及生根处理，解决草莓苗不同生长时期存在的技术问题，解决问题的针对性强、效果好。
[0010]7、所使用的抑制褐化的方法，成本低、时间短、育出的苗品质好且成活率高，能将优良性状固定下来，能满足草莓高品质种苗的工厂化生产需求。
【具体实施方式】
[0011 ]实施例一:一种草莓移栽苗组培方法，包括以下步骤:
A、草莓外植体的选取:选择长势良好、无病虫害、无畸形的健壮草莓植株，取其匍匐茎带节茎段，用手术刀切割为约3 cm长，获得草莓外植体；
B、消毒灭菌:将外植体先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再将外植体用质量比为10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，轻微震荡搅动后，流水冲洗30 min，置于超净工作台上的器皿中；再用质量比为50%的维生素C溶液浸泡3 min，用体积比为75%乙醇溶液处理13 S，再经质量比为0.1%的萊水溶液消毒9 min，最后用无菌水冲洗5次，每次4 min，在整个消毒过程中充分摇动器皿；
C、抗褐化培养:在每升蒸馈水中加入25mg的硫代硫酸钠，130 mg的维生素C，3.0 mg的活性炭，5 mg的氯化钠，30000 mg的鹿糖和5300 mg的琼脂粉配制成培养基I，培养基I的PH值为5.6;
将经消毒灭菌的外植体接入培养基I中进行培养，间隔7 d后，将外植体转接到另一个相同的新鲜培养基I中进行培养，外植体共转接3次完成抗褐化处理；
D、愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养:在每升蒸馏水中加入1.3mg的6-苄胺基嘌呤，
0.5 mg的萘乙酸，0.08 mg的2,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5400 mg的琼脂制成培养基Π，培养基Π的PH值为5.6;
将C中得到的外植体接入到培养基Π中，在光照度为1800 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22 °C的条件下进行愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养，5 d后在其节部和基部出现愈伤组织，得愈率为98.87%;10 d后愈伤组织迅速增殖，其表面开始出现绿色芽点；15 d后分化出不定芽丛，芽丛分化率100%; 20 d后丛芽发生系数可达6.32;
E、扩繁培养:将D步骤中15d后分化出不定芽丛进行无菌分切，切成5株一丛，分别转接到另一个相同的新鲜培养基Π中，进行扩繁，培养30 d后，平均繁殖系数达12.86，扩繁培养出种苗；
F、生根培养:在每升蒸馈水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5400 mg的琼脂粉配制成培养基m，培养基m的PH值为5.6;
取E步骤中高4 cm的健壮种苗，接种于培养基ΙΠ中，放在光照度为1800 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22 °C的条件下培养，培养45 d后获得苗壮根粗的生根苗，其生根率可达100%;
G、炼苗和移栽:取7cm高的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗3 d后，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将幼苗上残留培养基清洗干净，放入浓度为0.15%的多菌灵溶液中消毒3 min后，移栽至消毒后的沙土基质中保温保湿培养，生长30 d后，即得移栽苗，成活率可达98%。
【主权项】
1.草莓移栽苗组培方法，其特征在于，包括以下步骤: A、草莓外植体的选取:选择长势良好、无病虫害、无畸形的健壮草莓植株，取其匍匐茎带节茎段，用手术刀切割为约2?3 cm长，获得草莓外植体； B、消毒灭菌:将外植体先用自来水清洗表面的泥土和灰尘，再将外植体用质量比为10%的洗衣粉溶液浸泡10 min，轻微震荡搅动后，流水冲洗30 min，置于超净工作台上的器皿中；再用质量比为50%的维生素C溶液浸泡3 min，用体积比为75%乙醇溶液处理10?15 s，再经质量比为0.1%的萊水溶液消毒8?10 min，最后用无菌水冲洗5?6次，每次不低于3 min，在整个消毒过程中充分摇动器皿； C、抗褐化培养:在每升蒸馏水中加入20000?30000mg的硫代硫酸钠，100?150 mg的维生素C，1.0?5.0mg的活性炭，I.0~10 mg的氯化钠，30000 mg的鹿糖和5300 mg的琼脂粉配制成培养基I，培养基I的PH值在5.4-5.8之间； 将经消毒灭菌的外植体接入培养基I中进行培养，间隔7 d后，将外植体转接到另一个相同的新鲜培养基I中进行培养，外植体共转接3次完成抗褐化处理； D、愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养:在每升蒸馏水中加入1.0-1.5mg的6-苄胺基嘌呤，0.1?1.0 mg的萘乙酸，0.05?0.1 mg的2 ,4-二氯苯氧乙酸，30000 mg的鹿糖，5300?.5500 mg的琼脂制成培养基Π，培养基Π的PH值在5.4-5.8之间； 将C中得到的外植体接入到培养基Π中，在光照度为1500?2000 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22 ± I °C的条件下进行愈伤组织诱导，丛芽发生和增殖培养，5 d后在其节部和基部出现愈伤组织；10 d后愈伤组织迅速增殖，其表面开始出现绿色芽点；15 d后分化出不定芽丛； E、扩繁培养:将D步骤中15d后分化出不定芽丛进行无菌分切，切成4-6株一丛，分别转接到另一个相同的新鲜培养基Π中，进行扩繁，培养30 d后，扩繁培养出种苗； F、生根培养:在每升蒸馈水中加入1.0mg的活性炭，10000 mg的鹿糖，5300-5500 mg的琼脂粉配制成培养基m，培养基m的PH值在5.4-5.8之间； 取E步骤中高3?4 cm的健壮种苗，接种于培养基ΙΠ中，放在光照度为1500?2000 lx，光照时间为12 h/d，温度控制在22±1 °C的条件下培养，培养45 d后获得苗壮根粗的生根苗； G、炼苗和移栽:取6?8cm高的生根苗，连培养瓶一起置于室温下炼苗3 d后，打开瓶盖，从培养基中取出幼苗，将幼苗上残留培养基清洗干净，放入浓度为0.1-0.2%的多菌灵溶液中消毒2?3 min后，移栽至消毒后的沙土基质中保温保湿培养，生长30 d后，即得移栽苗。
【文档编号】A01H4/00GK105961201SQ201610320663
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月16日
【发明人】黄衡宇, 李继祥, 王元忠, 张, 李培源
【申请人】玉溪市六合农业科技发展有限公司