一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法
【专利摘要】本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其中，用薄荷精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，熏蒸是将薄荷精油与灰葡萄孢菌置于同一密闭空间；植物精油作为一种纯天然的抑菌剂在体外能抑制微生物生长繁殖或具有杀灭作用，而薄荷精油作为一种广谱高效、抑菌性强、安全无毒、性能稳定的天然抑菌物质自然成为生物防治研究的重要内容，与现有技术相比，该发明的优点在于，操作简单易行，低剂量高效能。
【专利说明】
一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法
技术领域
[0001] 本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方 法。
【背景技术】
[0002] 葡萄是一种重要的经济作物，在农业经济中的占主导地位。中国作为主要葡萄生 产国之一，种植面积和产量的居世界前列。但是，灰葡萄孢菌(BoiiTMs Ciioerea)，作为一 种广寄主性的、能够引起200多种已知植物灰霉病的坏死营养型病原真菌，成为葡萄采后主 要的病原微生物，严重的缩短了葡萄采后的贮藏寿命，造成严重的经济损失，因此精油作为 一种天然无公害的抗菌素而被人们广泛的挖掘和研究。
[0003] 薄荷精油，存在于芳香植体内的天然化合物，由类黄酮、有机酸、醌类、薄荷醇等物 质组成，它可以被用于医学、食品和化妆品行业，能有效的抑制灰葡萄孢菌引起的灰霉病的 病害，而由于其组分的化学及物理性质，使采用直接接触法和熏蒸法的抑制效果明显不同。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，解决了目前直接 接触法抑制率低的技术问题。
[0005] 为此，本发明提供了 一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，用薄荷精油对灰 葡萄孢菌进行熏蒸，所述熏蒸是将薄荷精油与灰葡萄孢菌置于同一密闭空间。上述一种利 用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，用薄荷精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，具体包括如下步 骤:步骤一、制备PDA平板，即将融化的PDA培养基冷却倒板，直至培养基凝固；步骤二、用无 菌的打孔器在待测灰葡萄孢菌平板上取菌块，并放入所述步骤一中的PDA平板的内；步骤 三、将无菌的滤纸片放在所述PDA平板盖子的内表面;步骤四、在所述步骤三中的滤纸片上 加入薄荷精油；步骤五、盖好所述HM平板的盖子并将其封口，将所述PDA平板倒置，放入 生化培养箱中培养，观察抑菌效果。上述一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步 骤二中的待测灰葡萄孢菌在培养七天后方进行取菌块动作，所述菌块的直径为5_。上述一 种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步骤五中的生化培养箱的温度为28°C，培养 时间为7天。上述一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，所述步骤一中的融化的PDA培 养基冷却倒板温度为45°C至60°C。
[0006] 本发明的有益效果是:植物精油作为一种纯天然的抑菌剂在体外能抑制微生物生 长繁殖或具有杀灭作用；而薄荷精油作为一种广谱高效、抑菌性强、安全无毒、性能稳定的 天然抑菌物质自然成为生物防治研究的重要内容，与现有技术相比，该发明的优点在于，操 作简单易行，低剂量高效能。
[0007] 以下将结合附图及实施例对本发明做进一步详细说明。
【附图说明】
[0008] 图1是本发明熏蒸法和直接接触法的薄荷精油用量与灰葡萄孢菌平均抑制率的对 比折线图。
【具体实施方式】
[0009] 为进一步阐述本发明达成预定目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及实 施例对本发明的【具体实施方式】、结构特征及其功效，详细说明如下。
[0010] 实施例1: 一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，用薄荷精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，所述 熏蒸是将薄荷精油与灰葡萄孢菌置于同一密闭空间，用薄荷精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸， 具体包括如下步骤： 步骤一、制备两组HM平板，即将融化的PDA培养基冷却至50°C倒板，直至培养基凝固， 分为PDA平板A组和PDA平板B组，每组中设置三个PDA平板，分别为Al、A2、A3和BI、B2、B3;步 骤二、用无菌的打孔器在培养7天的待测灰葡萄孢菌平板上打取六块直径为5mm的菌块，并 分别放入所述步骤一中的两组PDA平板内；步骤三、取六片无菌滤纸片，并分别放在所述两 组PDA平板的六个盖子的内表面;步骤四、在所述步骤三中的TOA平板A组的三片滤纸片上 各加入Iul薄荷精油;步骤五、盖好两组PDA平板的盖子并将其封口，将两组PDA平板倒置， 放入28°C的生化培养箱中培养。
[0011] 步骤六、培养7天后，测量PDA平板Al、A2、A3和PDA平板BI、B2、B3中菌落直径，通过 公式，抑制率=(c-t)/c X 100%，分别对应计算抑制率，并且计算平均抑制率，其中，t为HM平 板A组中菌落直径，即经过薄荷精油熏蒸处理后的菌落直径，c为TOA平板B组中菌落直径，即 没有经过薄荷精油熏蒸处理的菌落直径。
[0012] 实施例2: 在实施例1的基础上，另制备四组PDA平板，每组设置三个PDA平板，与实施例1不同之处 在，步骤四中，四组HM平板中的滤纸片上加入的薄荷精油量分别为2ul、3ul、4ul、5ul，培养 7天后分别与实施例1中PDA平板B组进行对比，并分别计算每一组抑制率和抑制率平均值， 五组PDA平板的试验结果如表1所示： 表1
实施例3: 直接接触法处理灰葡萄孢菌的具体步骤如下： 融化的PDA培养基冷却到50 °C左右，加入一定体积的薄荷精油到培养基中充分混合，使 其达到浓度梯度100111/1、200111/1、300111/1、400111/1、500111/1后倒板，每一浓度均准备三 个平板，待培养基凝固后，将直径为5mm的灰葡萄孢菌菌块放入平板中央，另准备三个培养 基中不添加薄荷精油的平板为对照，后放入28°C生化培养箱中培养7天后观察抑菌效果，以 实施例1步骤六中公式计算每一组抑制率和抑制率平均值，试验结果如表2所示：
表2 试验结论:熏蒸法中每个平板培养基为30ml，实际添加薄荷精油量即为Iul、2ul、3ul、 4ul、5ul;直接接触法中薄荷精油加入培养基中配成浓度梯度100ul/L、200ul/L、300ul/L、 400ul/L、500ul/L，每皿也为30ml，经换算每皿实际添加精油量为3ul、6ul、9ul、12ul、15ul， 即直接接触法添加薄荷精油量为熏蒸法的三倍，两者抑菌效果对比折线图如图I所示，经对 比可知薄荷精油熏蒸法能够以低剂量，高功效达到抑菌效果。
[0013]以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在 不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的 保护范围。
【主权项】
1. 一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于：用薄荷精油对灰葡萄孢菌 进行熏蒸，所述熏蒸是将薄荷精油与灰葡萄孢菌置于同一密闭空间。2. 根据权利要求1所述的一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 用薄荷精油对灰葡萄孢菌进行熏蒸，具体包括如下步骤:步骤一、制备TOA平板，即将融化的 PDA培养基冷却倒板，直至培养基凝固；步骤二、用无菌的打孔器在待测灰葡萄孢菌平板上 取菌块，并放入所述步骤一中的roA平板的内；步骤三、将无菌的滤纸片放在所述PDA平板盖 子的内表面;步骤四、在所述步骤三中的滤纸片上加入薄荷精油；步骤五、盖好所述PDA平 板的盖子并将其封口，将所述PDA平板倒置，放入生化培养箱中培养，观察抑菌效果。3. 根据权利要求2所述的一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步骤二中的待测灰葡萄孢菌在培养七天后方进行取菌块动作，所述菌块的直径为5_。4. 根据权利要求2所述的一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步骤五中的生化培养箱的温度为28°C，培养时间为7天。5. 根据权利要求2所述的一种利用薄荷精油抑制灰葡萄孢菌的方法，其特征在于:所述 步骤一中的融化的PDA培养基冷却倒板温度为45 °C至60 °C。
【文档编号】A01P3/00GK105961448SQ201610291144
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年5月5日
【发明人】任雪艳, 宋丹丹, 孔庆军, 土丽丹, 翟欣, 尹雪峰, 江国山
【申请人】陕西师范大学