专利名称：一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种藻类育苗方法，具体地说是一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法。
背景技术：
鼠尾藻自然繁育是通过生殖托(繁育器官)产生生殖细胞，经过有性生殖的方式发育成鼠尾藻幼苗。由于其生殖细胞发育的同步性差，因此生殖细胞发育为幼苗的比例较低，不适合大规模育苗生产。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是提供一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法，它能够解决鼠尾藻幼苗繁育的数量较低的问题，可用于生产性育苗。
一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法，其主要是根据海藻体细胞发育的全能性，利用海藻工具酶分解鼠尾藻组织，游离出体细胞或体细胞原生质体，然后将其附着于育苗基上，培养出鼠尾藻幼苗。
所述的海藻工具酶是利用海洋贝类或棘皮动物的消化腺提取制得；在使用前还需向提取后的海藻工具酶溶液中添加甘露醇、山梨醇、葡萄糖或蔗糖为渗透剂。
本发明利用体细胞或体细胞原生质体直接进行育苗，无须培育鼠尾藻生殖成熟的藻体；体细胞可直接发育成植株(体细胞原生质体再生细胞壁转化为体细胞，再由体细胞分化为植株)，无须生殖细胞发育的过程，因而育苗周期短。
相对于有性生殖育苗技术，本发明的优点是无须生殖细胞的有性生殖过程，可直接发育成植株，缩短了育苗周期；并且鼠尾藻苗种繁育效率高，适合于大规模育苗生产。
具体实施例方式
下面通过实施例进一步说明本发明。
本实施例实验材料为鼠尾藻，其直接获得于自然海域。
本实施例是以培育鼠尾藻体细胞幼苗为目的。其关键在于证实利用体细胞或体细胞原生质体再生植株的可行性。
1.取帽贝或海参的消化腺，用组织捣碎机粉碎，按照1∶1的质量比添加淡水或海水，用高速冷冻离心机12000转/分钟、4℃离心10-20分钟后取上清液，或者放置4℃冰箱内静置过夜后过滤取上清液；获得的上清液即为海藻工具酶(粗酶)溶液。
2.向海藻工具酶溶液中添加甘露醇作为渗透剂(也可选用山梨醇、葡萄糖、蔗糖)，使其浓度为0.6-1.0mol/L。
3.选取鲜活的鼠尾藻，用大量的洁净海水冲洗，洗去藻体附着的泥沙等杂质，去掉假根、叶片等部位，仅保留“茎”部，用天平称重5-10g备用；在常温下，将鼠尾藻迅速研磨或剪切成细小的组织块或小的分枝。
4.在15-35℃下，将细小的组织块或小的分枝浸没在海藻工具酶溶液中1-3个小时，期间用玻璃棒进行搅拌。
5.用200-400目筛绢过滤，其滤得的溶液中即含有鼠尾藻体细胞和体细胞原生质体，静置30分钟或用低速离心机以400转/分钟的低速离心5分钟，倒去上层溶液，用洁净的海水重新悬浮沉淀，制成鼠尾藻体细胞和体细胞原生质体悬液，将其倒入一个较大的容器中，并用海水稀释到103个细胞/ml的浓度。
6.将育苗器(或育苗帘等育苗基质)完全浸入到细胞悬液中，静置30分钟以上时间，使鼠尾藻体细胞和体细胞原生质体充分附着在育苗器上，然后将育苗器取出，在18-25℃条件下进行室内大水体培养(光照可采用自然光)，静置或充气培养3-5天，即可在显微镜下观察到鼠尾藻多列细胞幼苗。
权利要求
1.一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法，其特征是利用海藻工具酶分解鼠尾藻组织，游离出体细胞或体细胞原生质体，然后将其附着于育苗基上，培养出鼠尾藻幼苗。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征是所述的海藻工具酶是利用海洋贝类或棘皮动物的消化腺提取制得。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征是在提取后的海藻工具酶溶液中添加渗透剂。
4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征是所述的渗透剂为甘露醇、山梨醇、葡萄糖或蔗糖。
全文摘要
本发明公开了一种基于体细胞育苗技术的鼠尾藻苗种繁育方法，其主要是根据海藻体细胞发育的全能性，利用海藻工具酶分解鼠尾藻组织，游离出体细胞或体细胞原生质体，然后将其附着于育苗基上，培养出鼠尾藻幼苗。相对于有性生殖育苗技术，本发明的优点是无须生殖细胞的有性生殖过程，可直接发育成植株，缩短了育苗周期；并且鼠尾藻苗种繁育效率高，适合于大规模育苗生产。
文档编号C12N5/04GK1806526SQ20051013635
公开日2006年7月26日 申请日期2005年12月23日 优先权日2004年12月24日
发明者刘涛, 崔竞进, 王翔宇 申请人:中国海洋大学