专利名称：一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种组合物，特别涉及一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物及 其制备方法。
背景技术：
目前现代医学对高血压的治疗药物大体有6类1.利尿剂2. α受体阻滞剂3. β 受体阻滞剂4.钙离子拮抗剂5.血管紧张素转换酶抑制剂6.血管紧张素II受体拮抗剂。 近年来随着大规模抗高血压临床试验的开展和心血管分子生物学研究的进展，高血压的传 统认识得到了更新，循症医学已成为共识。高血压病不仅是血液动力学异常疾病，而且也伴 随脂肪、糖代谢紊乱和心脑肾等靶器官的不良重塑。因此治疗要在有效控制血压水平的同 时，改善上述诸代谢紊乱、预防和逆转靶器官的不良重塑。这是降低心血管并发症的发生和 病死率的关键。虽然在理论研究和临床疗效上都较以前有很大进步。但由于降压药物对代 谢及靶器官损害的影响尚有争论，而且大多都存在着一定的副作用，部分限制了其临床应 用。使高血压的控制不能尽人所愿。
发明内容
本发明的一个目的在于公开一种盐酸贝那普利组合物；本发明的另一个目的在于 公开一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物的制备方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明盐酸贝那普利组合物由如下固体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制 得Ph 6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下 灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜 面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 0.5-2的比例混和，混勻 后在100-12(TC条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积 占培养基体积的5-10%，在20-40°C，培养1-5天，在培养好的麸皮中加入0. 01-0. 5M ph7 Pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至 饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为 粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利 0. 03-0. 2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积 比为1 1. 5-8混合，在转化温度为20-40°C，转化反应时间为12-48小时，即得组合物。本发明盐酸贝那普利的组合物固体发酵方法优选为斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷 却，制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加 入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加 入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取 上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐 酸贝那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以 体积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。本发明盐酸贝那普利组合物还可以由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制 得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件 下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种； 液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使 得每体积份培养基含葡萄糖0. 01-0. 1重量份，牛肉膏0. 01-0. 1重量份，蛋白胨0. 01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10%，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利 0. 03-0. 2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在转化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。本发明盐酸贝那普利组合物液体发酵方法优选为斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后 冷却，制得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉 膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖 0. 05重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重 量份；50体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得 斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液 体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝 那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在 转化温度为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。上述重量份与体积份的关系为克与毫升的关系，即g/ml。利用曲霉CICC 2436产酶水解盐酸贝那普利，其中部分盐酸贝那普利的结构发生 了改变，即盐酸贝那普利的结构类似物。原盐酸贝那普利在酶的作用下形成含盐酸贝那普 利和盐酸贝那普利结构类似物的组合物，该组合物降血压水平优于同浓度盐酸贝那普利。
图1固体发酵对照品一图2固体发酵对照品二
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图3固体发酵曲霉CICC 2436图4固体发酵无新生物产生图5液体发酵对照品一图6液体发酵对照品二图7液体发酵曲霉CICC 2436图8液体发酵无新生物产生下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1菌种筛选(固体发酵)本发明的关键在于筛选到对盐酸贝那普利有转化作用的菌种，筛选实验的过程 为筛选菌种为 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005, CICC 2436供试品制备将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养 基含琼脂0.05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在30°C条件下培养5 天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 1的比例混和， 混勻后在iio°c条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培 养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固 体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶 解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用 水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后 作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化 反应时间为24小时，即得组合物。对照品一制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利 0. Ig,经微孔滤膜无菌过滤后，取滤液0. 5ml，加0. 25ml水，20_40°C反应24h，即得作为对照
P _. ΡΠ O对照品二制备用4个筛选菌种分别按照供试品制备中的方法制备粗酶液，每种 粗酶液 0. 25ml 加 0. 5ml 水，20-40°C反应 24h。色谱柱色谱柱=APOLLOODS-C18 (250 X 4. 6mm, 5 μ m)，检测器:UV (λ = 239nm)流动相A为0. 075% HAc水溶液，B为甲醇。试验结果可知，图一显示盐酸贝那普 利标品；图二显示4个菌分别制备的酶液对照品二，液相图谱表明，4个菌分别制备的酶液 液相图大体相同；图三显示CICC 2436与盐酸贝那普利的酶解反应组合物即本发明组合物 的液相图大体相同，均有新生成物出现(箭头处)，其它菌种与盐酸贝那普利酶转化反应后 无新物质出现。 实验例2菌种筛选(液体发酵)本发明的关键在于筛选到对盐酸贝那普利有转化作用的菌种，筛选实验的过程 为筛选菌种为 CICC 3093，CICC 2203，CICC3005,，CICC 2436供试品制备斜面菌种培养将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基， 使得每体积份培养基含琼脂ο. 05g;在iio°c条件下灭菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在 30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁 加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉膏0. 05g，蛋白 胨0. 04g，硝酸铵0. 03g，硫酸镁0. 04g ；在250ml的三脚瓶中装入50ml的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在 30°C，摇瓶转速150r/min条件下进行摇瓶发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制 备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌 过滤后作为底物；酶反应液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至 每ml发酵培养液中含底物0. 00008g，在转化温度为30°C，转化时间为28小时，即得组合 物。对照品一制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利 0. Ig,经微孔滤膜无菌过滤后，取滤液0. 5ml，加0. 25ml水，20_40°C反应24h，即得作为对照
P _. ΡΠ O对照品二制备用4个筛选菌种分别按照供试品制备中的方法制备粗酶液，每种 粗酶液 0. 25ml 加 0. 5ml 水，20-40°C反应 24h。色谱柱色谱柱=APOLLOODS-C18 (250 X 4. 6mm, 5 μ m)，检测器:UV (λ = 239nm)流 动相A为0. 075% HAc水溶液，B为甲醇。试验结果可知，图四显示盐酸贝那普利标品；图6液体发酵显示4个菌分别制备的 酶液对照品二，液相图谱表明，4个菌分别制备的酶液液相图大体相同；图7液体发酵显示 CICC 2436与盐酸贝那普利的酶解反应组合物即本发明组合物的液相图大体相同，均有新 生成物出现(箭头处)，其它菌种与盐酸贝那普利酶转化反应后无新物质出现。实验例3药效学实验采用体外血管紧张素转换酶抑制剂的抑制作用比较试验，比较同一浓度本发明组 合物(实施例1制备)对大鼠降脂能力的对比实验，血管紧张素转换酶抑制剂主要的药理 作用是抑制血管紧张素转换酶活性，减少血管紧张素II的生成，减少缓激肽的水解，导致 血管舒张，血容量减少血压下降。试验方法见《药理学实验指南-新药发现和药理学评价》 Α. 1. 1. 101、试验动物雄性SD大鼠，体重180 220g。试验动物由北京维通利华实验动物 技术有限公司提供。2、试验药物A、盐酸贝那普利底物加酶液培养12_48h后的混合物(实施例1组合物)B、与A同浓度盐酸贝那普利底物加与酶液体积相同的水培养12_48h的混合物)实验结果如下表(A组B组给药量相同，按体积算)表IA和B降血压水平比较试验
_血管紧张素转换酶抑制作用%_A75 8082 78 83
B60 5561 51 53实验动物共5组，每组10只小鼠，造模及试验方法见《药理学实验指南_新药发现 和药理学评价》Α. 1. 1. 10 ；上表表明对血管紧张素转换酶的抑制作用比较试验中，A组比B 组的抑制率更高些，所以本发明组合物降压能力高于盐酸贝那普利。实验例4药效学实验
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同实验例3的实验方法，试验药物A为盐酸贝那普利底物加酶液培养12_48h后的 混合物(实施例6组合物)，实验数据表明A组的降血压的能力要高于B组，这表明A组中 酶转化盐酸贝那普利后得到的盐酸贝那普利的结构类似物体内降血压的能力要优于盐酸 贝那普利。表2A和B降血压水平比较试验
_血管紧张素转换酶抑制作用%_ 应用微生物酶或微生物细胞进行的合成技术被称为微生物转化，它们在迅猛发展 的化合物的合成和转化方面扮演着越来越重要的角色，而且微生物酶转化技术普遍具有环 境友好，作用条件温和等优势；此外，生物催化剂具有高度的选择性，包括化学选择性，区域 选择性，对映体选择性和非对映体选择性；微生物转化较化学手段转化有以下优点条件 温和，设备简单，公害少，反应速率较快，比较环保。下述实施例均能实现本发明所述实验例的效果。
具体实施例方式实施例1 盐酸贝那普利的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照 重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜 面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸 铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液 作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利 O.lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 4混 合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。实施例2 盐酸贝那普利的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 6的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 03g ；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养好的 麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml 含盐酸贝那普利0. 04g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以 体积比为1 7混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合物。实施例3 盐酸贝那普利的组合物固体发酵
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斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 08g ；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方 法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽 汁按照重量体积比为1 1. 8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌后冷 却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养好的 麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵 培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透 析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml 含盐酸贝那普利0. 09g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以 体积比为1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合物。实施例4 盐酸贝那普利的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 8的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. Ig ；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法 制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁 按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后冷却， 接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好的麸皮 中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养 液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析， 离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含 盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体 积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。实施例5 盐酸贝那普利的组合物固体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph 8的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. Ig ；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法 制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁 按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后冷却， 接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38C，培养3天，在培养好的麸皮 中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养 液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析， 离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每ml含 盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体 积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合物。实施例6 盐酸贝那普利的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 05g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨， 硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉膏 0. 05g，蛋白胨0. 04g，硝酸铵0. 03g，硫酸镁0. 04g ；50ml的培养基，在110°C条件下，灭菌30 分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那 普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利 用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底 物0. 00008g，在转化温度为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。实施例7 盐酸贝那普利的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是6. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 09g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨， 硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 02g，牛肉膏 0. 9g，蛋白胨0. 04g,硝酸铵0. 02g，硫酸镁0. 07g ；60ml的培养基，在102°C条件下，灭菌38 分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7 %，在24°C，转速220r/ min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那 普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. 05g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应 利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含 底物0. 00008g，在转化温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。实施例8 盐酸贝那普利的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是6. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 09g ；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨， 硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为6. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 02g，牛肉膏 0. 9g，蛋白胨0. 04g,硝酸铵0. 02g，硫酸镁0. 07g ；60ml的培养基，在102°C条件下，灭菌38 分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7 %，在24°C，转速220r/ min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那 普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. 05g，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应 利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含 底物0. 00008g，在转化温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。实施例9 盐酸贝那普利的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得 Ph是7. 5的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 04g ；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制得 斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨， 硝酸铵，硫酸镁加入水中制得pH为7. 5的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 08g，牛肉膏 0. 05g，蛋白胨0. 03g，硝酸铵0. 04g，硫酸镁0. 02g ；70ml的培养基，在117°C条件下，灭菌24 分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的7%，在36°C，转速105r/ min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那 普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利 用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养液中含底 物0. 00004g，在转化温度为34°C，转化时间为43小时，即得组合物。实施例10 盐酸贝那普利的组合物液体发酵斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每ml培养基含琼脂0. 04g ；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每ml培养基含葡萄糖0. 05g，牛肉 膏0. Olg，蛋白胨0. 06g，硝酸铵0. 04g，硫酸镁0. 02g ；IOOml的培养基，在108°C条件下，灭 菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的10 %，在30°C，转速 105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐 酸贝那普利，制成的溶液每ml含盐酸贝那普利0. lg，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶 反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每ml发酵培养 液中含底物0. 00004g，在转化温度为40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
权利要求
一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0.02 0.1重量份；在100 120℃条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20℃ 40℃条件下培养3 7天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1∶0.5 2的比例混和，混匀后在100 120℃条件下，灭菌20 40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的5 10％，在20 40℃，培养1 5天，在培养好的麸皮中加入0.01 0.5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均匀至完全溶解，在4℃条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利0.03 0.2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1∶1.5 8混合，在转化温度为20 40℃，转化反应时间为12 48小时，即得组合物。
2.如权利要求1所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°C条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按 照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接 入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入 0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入 硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上 清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸 贝那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体 积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。
3.如权利要求1所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 03重量份；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 04重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗 酶液与底物以体积比为1 7混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合 物。
4.如权利要求1所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 08重量份；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 09重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗 酶液与底物以体积比为1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合 物。
5.如权利要求1所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下固体发酵方法制备 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 1重量份；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规 方法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦 芽汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后 冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好 的麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶 液与底物以体积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合 物。
6.一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭菌， 灭菌后冷却，常规方法制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌 种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按照重量体积比为1 0.5-2的比例混和，混勻后在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培 养基体积的5-10%，在20-40°C，培养1-5天，在培养好的麸皮中加入0. 01-0. 5M ph7pbs 缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入硫酸铵至饱 和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上清液作为 粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利 0. 03-0. 2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积 比为1 1. 5-8混合，在转化温度为20-40°C，转化反应时间为12-48小时，即得组合物。
7.如权利要求6所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦芽汁按 照重量体积比为1 1的比例混和，混勻后在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接 入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基的8%，在30°C，培养3天，在培养好的麸皮中加入0. 3M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发酵培养液中加入 硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀，透析，离心取上 清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸 贝那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体 积比为1 4混合，在转化温度为30°C，转化反应时间为24小时，即得组合物。
8.如权利要求6所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 6的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 03重量份；在105°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在35°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.5的比例混和，混勻后在105°C条件下，灭菌35分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在35°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 5M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 04重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗 酶液与底物以体积比为1 7混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为40小时，即得组合 物。
9.如权利要求6所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 08重量份；在115°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常 规方法制得斜面并接种，在25°C条件下培养6天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与 麦芽汁按照重量体积比为1 1.8的比例混和，混勻后在120°C条件下，灭菌25分钟，灭菌 后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的9%，在25°C，培养2天，在培养 好的麸皮中加入0. 4M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 09重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗 酶液与底物以体积比为1 3混合，在转化温度为25°C，转化反应时间为18小时，即得组合 物。
10.如权利要求6所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 1重量份；在104°C条件下灭菌，灭菌后冷却，常规 方法制得斜面并接种，在38°C条件下培养4天，作为斜面菌种；固体发酵培养将麸皮与麦 芽汁按照重量体积比为1 0.7的比例混和，混勻后在117°C条件下，灭菌32分钟，灭菌后 冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养基体积的6%，在38°C，培养3天，在培养好 的麸皮中加入0. 07M ph7pbs缓冲液浸泡过夜，得固体发酵培养液；粗酶液的制备固体发 酵培养液中加入硫酸铵至饱和，搅拌均勻至完全溶解，在4°C条件下放置过夜，离心取沉淀， 透析，离心取上清液作为粗酶液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每 体积份含盐酸贝那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶转化反应将粗酶液与底物以体积比为1 3混合，在转化温度为28°C，转化反应时间为38小时，即得组合 物。
11.一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭 菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种；液体 发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使得 每体积份培养基含葡萄糖0.01-0. 1重量份，牛肉膏0.01-0. 1重量份，蛋白胨0.01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10%，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利 0. 03-0. 2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在转化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。
12.如权利要求11所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重量份；50 体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种 体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培 养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利0. 1 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度 为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。
13.如权利要求11所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是 6. 5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 09重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 02重量份，硫酸镁0. 07重量份； 60体积份的培养基，在102°C条件下，灭菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌 种体积占培养基的7%，在24°C，转速220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利5`0. 05重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将 底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物`0. 00008重量份，在转化 温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。
14.如权利要求11所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph 是7. 5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷 却，制得斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏， 蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖 0. 08重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 03重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重 量份；70体积份的培养基，在117°C条件下，灭菌24分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得 斜面菌种体积占培养基的7%，在36°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液 体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝 那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在 转化温度为34°C，转化时间为43小时，即得组合物。
15.如权利要求11所述的盐酸贝那普利组合物，其特征在于由如下液体发酵方法制备斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是 7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 01重量份，蛋白胨0. 06重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量份； 100体积份的培养基，在108°C条件下，灭菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面 菌种体积占培养基的10%，在30°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体发 酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普 利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源， 将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转 化温度为40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
16.一种具有降血压作用的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6-8的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 02-0. 1重量份；在100-12(TC条件下灭 菌，灭菌后冷却，制得斜面并接种，在20°C --40°C条件下培养3-7天，作为斜面菌种；液体 发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6-8的培养基，使得 每体积份培养基含葡萄糖0.01-0. 1重量份，牛肉膏0.01-0. 1重量份，蛋白胨0.01-0. 06 重量份，硝酸铵0. 01-0. 05重量份，硫酸镁0. 01-0. 08重量份；20-100体积份的培养基，在 100-120°C条件下，灭菌20-40分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种体积占培养 基的5-10%，在20-40°C，转速100-250r/min条件下进行发酵，培养1_5天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利0. 03-0. 2重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00003-0. 0001重 量份，在转化温度为20-40°C，转化时间为5-48小时，即得组合物。
17.如权利要求16所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 05重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在30°c条件下培养5天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 03重量份，硫酸镁0. 04重量份；50 体积份的培养基，在110°C条件下，灭菌30分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌种 体积占培养基的8%，在30°C，转速150r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵培 养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利0. 1 重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将底物 添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化温度 为30°C，转化时间为28小时，即得组合物。
18.如权利要求16所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是6. 5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 09重量份；在110°C条件下灭菌，灭菌后冷却， 制得斜面并接种，在22°C条件下培养6天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋 白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为6. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 02 重量份，牛肉膏0. 9重量份，蛋白胨0. 04重量份，硝酸铵0. 02重量份，硫酸镁0. 07重量份； 60体积份的培养基，在102°C条件下，灭菌38分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面菌 种体积占培养基的7%，在24°C，转速220r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液体发酵 培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普利 0. 05重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源，将 底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00008重量份，在转化 温度为29°C，转化时间为9小时，即得组合物。
19.如权利要求16所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7. 5的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在108°C条件下灭菌，灭菌后冷 却，制得斜面并接种，在37°C条件下培养4天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏， 蛋白胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为7. 5的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖 0. 08重量份，牛肉膏0. 05重量份，蛋白胨0. 03重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重 量份；70体积份的培养基，在117°C条件下，灭菌24分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得 斜面菌种体积占培养基的7%，在36°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养3天，作为液 体发酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝 那普利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶 源，将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在 转化温度为34°C，转化时间为43小时，即得组合物。
20.如权利要求16所述的盐酸贝那普利组合物的制备方法，其特征在于该方法为 斜面菌种培养选曲霉CICC 2436进行菌种培养，将琼脂加入4度的麦芽汁，制得Ph是7的培养基，使得每体积份培养基含琼脂0. 04重量份；在116°C条件下灭菌，灭菌后冷却，制 得斜面并接种，在34°C条件下培养3天，作为斜面菌种；液体发酵将葡萄糖，牛肉膏，蛋白 胨，硝酸铵，硫酸镁加入水中制得PH为8的培养基，使得每体积份培养基含葡萄糖0. 05重 量份，牛肉膏0. 01重量份，蛋白胨0. 06重量份，硝酸铵0. 04重量份，硫酸镁0. 02重量份； 100体积份的培养基，在108°C条件下，灭菌21分钟，灭菌后冷却，接入斜面菌种，使得斜面 菌种体积占培养基的10%，在30°C，转速105r/min条件下进行发酵，培养5天，作为液体发 酵培养液；底物的制备用水溶液溶解盐酸贝那普利，制成的溶液每体积份含盐酸贝那普 利0. 1重量份，经微孔滤膜无菌过滤后作为底物；酶反应利用液体发酵培养液作为酶源， 将底物添加到液体发酵培养液中，至每体积份发酵培养液中含底物0. 00004重量份，在转 化温度为40°C，转化时间为25小时，即得组合物。
21.如权利要求1-5、11-15任一所述的盐酸贝那普利组合物在制备降血压药物中的应用。8
全文摘要
本发明公开了一种盐酸贝那普利组合物及其制备方法，制备过程包括固体发酵法和液体发酵法两种，本发明利用曲霉CICC 2436产酶水解盐酸贝那普利，其中部分盐酸贝那普利的结构发生了改变，即盐酸贝那普利的结构类似物，原盐酸贝那普利在酶的作用下形成含盐酸贝那普利和盐酸贝那普利结构类似物的组合物，该组合物降血压水平优于同浓度盐酸贝那普利。
文档编号C12R1/66GK101899485SQ20091008511
公开日2010年12月1日 申请日期2009年5月31日 优先权日2009年5月31日
发明者刘春丽, 巩金妹, 段震文, 薛岚, 郭树仁 申请人:北京北大维信生物科技有限公司