一种节能型海水鱼育苗方法

专利名称：一种节能型海水鱼育苗方法
一种节能型海水鱼育苗方法技术领域
本发明属于海水鱼类育苗技术领域，特别涉及一种提高大菱鲆育苗率和免疫 力，促进大菱鲆快速生长、改善水质、节水节能、绿色低碳的新型海水鱼育苗新方法。
背景技术：
大菱鲆Mcophthalmus maximus)由于生长速度快、肉味鲜美、市场前景广阔而成为我国近几年来备受推崇的养殖品种。1999年人工育苗成功，目前国内在山东、河 北、辽宁等沿渤海地区已形成养殖高潮，人工苗种需求量很大，目前育苗成活率普遍偏 低，即使在欧洲国家商业育苗场，育苗成活率也只有20% 30%。国内厂家育苗成活率 更低，严重制约着大菱鲆养殖业的发展。
大菱鲆在仔鱼期非常脆弱，而且苗种存在严重的质量问题一、白化率很高， 平均高达20%左右，甚至个别厂家达到50% ； 二、出现较高的畸形率，诸如脊椎(身 体)弯曲，鳃盖残缺，右眼反射不灵敏等；三、变态死亡率高。四、病害多；大菱鲆对 细菌很敏感，细菌病是仔鱼期危害最大的疾病，在商业育苗第一个月内平均成活率只有 10% 50%。以往大菱鲆育苗的困难点主要是开口初期和仔鱼“开鳔”。开鳔期间会 有较大损失，死亡率在50%以上。据报道2007年10月 2008年3月期间，各地育苗场 的大菱鲆育苗均受到了各种疾病的严重威胁，总体上的育苗成活率比上年有较大幅度的 下降。
苗期的病害传染速度快，死亡率高，如果没有及时采取适当的预防措施，有时 死亡率可达90%以上。目前，主要靠抗生素类药物来进行防治。一般在仔鱼期主要用 青霉素、四环素、氯霉素，在稚鱼期用四环素等来预防治疗和治疗，不但容易形成抗药 性，而且易在鱼体内残存，使鱼苗质量下降。
“温室+深井水育苗”是目前大菱鲆育苗最普遍的模式。这种育苗模式需要大 量的水循环，地下井水的过度开采使用，不仅浪费资源和能源，导致水资源枯竭，还会 严重影响地质概况，为地质灾害埋下隐患。大量的养殖废水排放，也造成海洋水体的严 重污染。
蛭弧菌是一类具有裂解能力的细菌，它的生活史可分为脱离宿主细菌、具有鞭 毛、自由游泳的游泳体状态和在宿主细菌内生长发育的蛭质体状态。蛭弧菌游泳体侵入 宿主的周质空间的同时失去鞭毛，蛭弧菌游泳体侵入宿主时，在宿主细胞壁上产生一个 孔隙，当蛭弧菌侵入到宿主的周质空间后孔隙重新封闭。游泳体失去鞭毛，和宿主细胞 一起被称为"蛭质体"。与游泳体相比，蛭质体不仅具有制备、保存更为方便，环境耐 受力强，作用时间虽略慢但更久的特点，同时还具有潜在的灭活疫苗功能。当蛭弧菌游 泳体入侵宿主细胞后，宿主细胞的呼吸作用(respiration)很快被停止。蛭弧菌也进入蛭 质体状态，开始分泌多种酶，消解宿主细胞的大分子为小分子物质，进而整合为自身的 营养物质，使自身生长，变长。最终，长条状的蛭质体分成很多短的节段，长出鞭毛， 重新成为游泳体。之后，它们分泌必需的酶类，破壁而出，再次成为脱离宿主细菌、具有鞭毛、自由游泳的游泳体。在此蛭质体发育期间，蛭弧菌并不改变宿主细胞的表面结 构，使原宿主仍具有抗原作用，可刺激生物体，产生免疫应答反应。这一潜在功能使得 应用蛭弧菌蛭质体用于大菱鲆的育苗中，可有效预防细菌病的产生，提高苗种的成活率等。
已有的研究表明，作为一种有益微生物制剂，无论是在食品工业还是在(海洋) 水产养殖等领域，蛭弧菌的应用均是安全的。例如在国外，Lenz and Hespell(1978) 研究发现，蛭弧菌及对动物及人的细胞不具侵染性[Lenz R.W., Hespell R.B.Attempts to grow bedellovibrios micurgically-injected into animal cells.Archives of Microbiology, 1978, 119(3) 245-248]。在国内，林茂等O006)研究了蛭弧菌对鱼类细胞的作用，发现它对 鱼类细菌没有侵染作用[林茂，杨先乐，薛晖，曹海鹏，邱军强。蛭弧菌BDH2102对鱼 类细胞及病原菌的作用。微生物学通报，2006，33(1) 7-11]。
到目前为止，国内外尚未有大菱鲆幼体发育过程中使用蛭弧菌蛭质体的研究报 道。发明内容
为克服上述现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种节能型海水鱼 育苗方法；该育苗方法有效地降低了大菱鲆发病率、畸形率和白化率，成活率高，苗种 质量好，改善水质，节水节能，绿色低碳。
本发明的目的通过下述技术方案来实现一种节能型海水鱼育苗方法，包括以 下操作步骤
(1)亲鱼的选择
从养殖的2龄大菱鲆成鱼中选择体形完整、色泽正常、健康活泼、体表光亮、 生长速度快和体重在1.6 2.2kg的亲体作为亲鱼；
(2)亲鱼强化培养
将亲鱼按雌雄2 1的比例，在亲鱼培育池中进行培育；在培育池中加入蛭弧菌 蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的起始浓度达10 107pfu/ml;饵料在投入培育池 前用浓度为10 107pfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15 30min ；
(3)采卵、受精和孵化
大菱鲆经强化培养达到性成熟后，采集卵子和精液，进行人工受精；将受精卵 放入装有海水的育苗池中；在育苗池中加入蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质 体的起始浓度达10 107pfu/ml ；受精卵经过3 5天孵化出初孵仔鱼；
(4)布池
在培苗池中加入蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的起始浓度达 10 107pfu/ml ；将初孵仔鱼放入培苗池内进行培育，初孵仔鱼的布池密度为2 3万粒/ 3/m ；
⑶投饵
投喂的饲料包括轮虫、卤虫无节幼虫、卤虫和颗粒饲料；饲料在投入培苗池前 用浓度为10 l(fpfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15 30min ；
(6)每隔5 40天换掉池水(全池)一次，换水后重新添加蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中蛭弧菌蛭质体的浓度达10 107pfo/mL ；鱼苗经过80 90天的饲养，进入养 成阶段。
步骤( 所述亲鱼优选从进口鱼苗的养殖过程中优选健康、生长快速的鱼苗作 为亲鱼。
步骤( 所述培育池中的水经过精细过滤的；所述饵料每日投喂3次；所述亲 鱼池中水温控制在19 20°C，光照调控在1500 25001ux，光照时间是前2周每天9 11小时，两周后每天19 20小时，经过2 3个月的温光调控，亲鱼达到性成熟。
步骤(3)所述育苗池是长为4m，宽为3m，深为1.5m的长方形水泥池，池内设 置6个气石，微充气。
步骤(4)所述培苗池中培育苗种过程中的水温为18 20°C，盐度为沈 观％0， pH为8.0 8.2，溶解氧5.0 7.0mg/L ；苗种培育期间不断充气，前10天充气量控制在 20 40L/h/m2，仔鱼开鳔后逐渐增加充气量至50 70L/h/m2。
步骤(5)所述投饵是第9 15日龄投喂轮虫，投喂密度为10个/ml ；第10 25日龄投喂卤虫无节幼虫，投喂密度为由0.2个/mL ；第20 35日龄投喂卤虫，投喂密 度为到1个/mL ；第35日龄以后投喂颗粒饲料，颗粒饲料的投喂量为lg/ml。
步骤⑵ (5)所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,所述蛭弧菌于 2009年8月7日保藏于湖北省武汉市珞珈山武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏 编号为 CCTCC NO: M 209172。
对所述蛭弧菌BDFM05进行负染后于电子显微镜下进行形态观察BDFM05 呈单细胞，椭圆形，大小为1.43X0.53um，端生鞭毛，鞭毛长度至少2um ；所述蛭弧菌 BDFM05以双层平板法于培养三天可形成直径2 3mm的透明圆形噬菌斑。
所述蛭弧菌蛭质体菌液按照以下方法制备得到
在含有宿主菌的DNB(dilute nutrient broth)液体培养基中接入蛭弧菌，于20 35°C> 150 300rpm 培养 36 48h，培养液经 4°C 6000 8000rpm 离心 15 20η ι 后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，沉淀即是蛭质体；
所述宿主菌为嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)；所述DNB液体培养基是将营养肉汤0.相、酪蛋白酸水解物0. 和酵母精提物O.lg溶于IOOOml蒸馏水中，调节pH 值至7.2 7.6。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果
(1)本发明采用蛭弧菌蛭质体预防和调节、环境调控相结合的方案，平均育苗成 活率达到48%以上，白化率降至4%，畸形率降至3%，长达40天不用换水，节约了成 本，大大提高了经济效益。
(2)本发明亲鱼培育时在水中和饵料中添加蛭弧菌蛭质体菌液，促进了亲鱼的营 养吸收和快速生长，保证性腺发育正常、培育出优良的受精卵。
(3)本发明在仔鱼阶段加强水质、水温、光照等环境因素的调控，并在水体和饲 料中投放一定浓度的蛭弧菌蛭质体菌液，改善了水质，提高了育苗成活率和种苗的免疫 力，降低了白化率和畸形率，防止了病害的发生。
(4)蛭弧菌蛭质体相对于蛭弧菌游泳体而言，制备比较简单，易保存。用蛭弧菌 蛭质体来育苗，不仅具有蛭弧菌的作用，还具有灭活的疫苗的作用。
(5)本发明所述蛭弧菌蛭质体在大菱鲆的应用中安全性好蛭弧菌蛭质体通过 裂解而消除致病菌的方法是生物方法，绿色、安全、无污染；蛭弧菌可侵染、裂解宿主 细菌的特性使之适合作为抑止或清除生物体及其环境中致病菌的生物净化因子，且其在 裂解完宿主细菌后，会因饥饿而自动消亡，从而克服了抗生素滥用带来的副作用。现有 的研究表明蛭弧菌对鱼类无毒性作用，对人类无致病性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于 此。
实施例1 提高大菱鲆育苗成活率的新养殖方法，具体步骤如下
1、亲鱼选择
在山东省某养殖场，从40000只养殖的2龄大菱鲆Mcophthalmus maximus)成鱼中选择体形完整、色泽正常、健康活泼、体表光亮、生长速度快、体重在1.6-2.21 的亲 体600条作为亲鱼。雌雄合理搭配，以避免近亲授精，防止种质退化。
2、亲鱼强化培育
亲鱼按照雌雄2 1比例进行优选。亲鱼在35m2的培育池中进行强化培养， 平均4条/m2。培育池中的水先经过二级砂滤，剧烈曝气后使用的。加入一定浓度为的 蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中的菌体浓度分别达到10、ΙΟ3、105、l(fpfo/ml。所用配合 饲料中同时添加亲鱼性腺发育所必须的卵磷脂和不饱和脂肪酸。投饵前，所用饲料要用 浓度为10、ΙΟ3、105、107pfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡30η ι，分批投饵，每日投喂3 次。
温度和光照控制亲鱼池中水温控制在19 20°C，光照调控在20001ux，在合 适的光照调控和营养强化培育条件下，加上蛭弧菌蛭质体的作用，亲鱼性腺发育加快， 经过2个月的温光调控，亲鱼即可达到成熟产精产卵。蛭弧菌蛭质体促进了亲鱼的营养 吸收和快速生长，保证性腺发育正常、培育出优良的受精卵。
3、进行采卵、受精、孵化
大菱鲆在上述条件下培育至性成熟以后，将雌雄分开，分别采集精液和卵子， 人工受精。受精后，将沉浮卵分开，将孵卵(受精卵)1000g移入孵化箱内进行孵化。受 精卵在14°C进行孵化，经过3天的时间完成孵化，获得初孵仔苗。
4、育苗用水的处理
在育苗池中注入经砂滤、沉降的海水，达到有效水位后，加入适量的蛭弧菌蛭 质体菌液，并加大曝气，混合均勻，使水体中蛭弧菌蛭质体浓度分别达到10、IO3, 105、 107pfu/mL。
5、布池
将初孵仔鱼放入培苗池内进行培育，初孵仔鱼的布池密度为2万粒/m3，苗种培 育过程中的水温为18 20°C，盐度为洸 沘％。，PH为8.0 8.2，溶解氧5.0 7.0mg/ L，苗种培育期间不断充气，前10天充气量控制在20 40L/h/m2，仔鱼开鳔后逐渐增加 充气量至50 70L/h/m2。
6、投饵
投喂的饲料包括轮虫、卤虫无节幼虫、卤虫和颗粒饲料。9 15日龄投喂轮 虫，投喂密度为10个/ml，第10 25日龄投喂卤虫无节幼虫，投喂密度为由0.2个/ mL ；第20 35日龄投喂卤虫，投喂密度为到1个/mL; 35日龄以后投喂颗粒饲料，颗 粒饲料的投喂量为lg/ml。要少投勤投，吃饱即可。投饵前，饵料都分别用浓度为10、 IO3, 105、107pfo/mL的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡30η ι。
7、管理
育苗期间的温度、光照可控，随时观察，及时清除池底部的沉淀物及水表面的 杂物，及时分苗。试验设置不同的全池水换水频率5天换水一次、10天换水一次、15 天换水一次、20天换水一次、25天换水一次、30天换水一次、35天换水一次、40天换水 一次，每次全池换水后加蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中的菌体浓度达到10 107pfo/ml。 加菌方法为用相应的池水稀释菌液后，均勻泼洒全池，并加大曝气，从而使菌液混合 均勻。鱼苗经过80 90天的饲养，即可进入养成阶段。
8、试验结果分析
试验按以下方式分组，在试验结果时分别测量各组的成活率、白化率、畸形率 及免疫活性指标和水质情况；
平均分为A-D 4个试验组，B、C、D每个试验组有8个小组，分别为Bi、Cl、 Dl ； B2、C2、D2 ； 、B3、C3、D3 ； B4、C4、D4 ； B5、C5、D5 ； B6、C6、D6 ；B7、C7、D7 ； B8、C8、B8 ； B1-D8 每小组再分为 4 组，即 B1-1 Bl-4···D8-1 D8-4，每组2个重复。试验的处理如下
A组工厂流水育苗模式，投喂正常饲料；
B组在水中泼洒蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体浓度分别达到 10、ΙΟ3、105、107pfo/ml,投喂的颗粒饲料未经蛭弧菌浸泡；
C组水体中不泼洒蛭弧菌，但投喂的颗粒饲料为经浓度为10、ΙΟ3、105、 107pfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡后的；
D组在水中加入蛭弧菌蛭质体菌液，使菌体浓度分别达到10、ΙΟ3、105、 107pfu/ml,同时分别投喂浓度为10、ΙΟ3、105、107pfti/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡后的颗粒饲料；
Bi、CUDl组每5天换(全池)水一-次，换水后重新加菌；
B2、C2、D2组每10天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B3、C3、D3组每15天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B4、C4、D4组每20天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B5、C5、D5组每25天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B6、C6、D6组每30天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B7、C7、D7组每35天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
B8、C8、D8组每40天换(全池)水-一次，换水后重新加菌
Bl-1、Cl-1、D1-1-D8-1投放的菌液浓度为10pfo/mL ；
Bl-2、Cl-2、D1-2…D8-2投放的菌液浓度为103pfu/mL ；
Bl-3、Cl-3、D1-3…D8-3投放的菌液浓度为105pfu/mL ；
Bl-4、Cl-4、D1-4...D8-4投放的菌液浓度为IOVVmL ；
鱼体免疫指标的测定方法如下
1、溶菌酶活力测定血清溶菌酶活性通过浊度比色法测定(EllisAE.Lysozyme assays.[M]//Stolen J S, Fletcher T C， Anderson D P, etal.Techniques in Fish Immunology I.USA SOS Publications, 1990 101-103.)实验条件下，每mL血清每η η吸光值减少0.001为1个酶活性单位(U)。
2、酚氧化酶(PO)活力的测定
酚氧化酶活性测定采用Herndndez-L0pez 等(Hemdndez-L0pez J, Gollas-Galvan Τ.Vargas-Albores F.Activation of the prophenoloxidase system ofthe brown Penaeus californiensis Holmes[J].Comp Biochem Physiol, 1996.113C 61-66.)的方法。以实验条件 下，每mL血清每min吸光增加0.001，定义为1个酶活性单位(U)。
3、超氧化物歧化酶(SOD)活力
超氧化物歧化酶(SOD)活力按邓碧玉等改进的连苯三酚自氧化法进。(邓碧 玉，袁勤生，李文杰.改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法[J].生物化 学与生物物理进展，1991，18(2) 163 163)
4、感染实验
感染试验于预先消毒的盛有1吨砂滤海水(盐度四 30%。)的水池中进行。 从实验A组、Bl-1、B1-2…D8-3、D8-4共97组中每个组随机取大菱鲆100只，体重 10士 Ig/条。用无菌ImL注射器经大菱鲆腹腔注射O.lmL浓度为108cfo/mL嗜水气单胞 菌(Aeromonas hydrophila，购于广东省微生物所菌种保藏中心，编号GIM1.172)，对大菱 鲆进行感染。试验水温保持在18 20°C，流水养殖，每天保持8个水交换量，充气培 养。人工感染后，记录大菱鲆的体表变化、运动、摄食及死亡情况。连续观察10天， 最终计算成活率，采用相对存活率(Relative Percent Survival，RPS)计算式
RPS(% ) = (1-免疫组死亡率/对照组死亡率)X 100%
成活率、白化率、畸形率及免疫活性指标的测定结果见表一 表四
从表中可以看出，A组成活率、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶 活力最高分别达到26.30%、1.586U/mL、99.98U/mL、1.787U/mL。 白化率、畸形率最 低分别为10.44%、9.06%；与A组相比，B、C、D组的成活率、溶菌酶活力、超氧化物 歧化酶活力、酚氧化酶活力都有明显的提高，白化率、畸形率明显降低。说明在常规的 育苗方式下，不换水会影响大菱鲆幼苗的成活率、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、 酚氧化酶活力。在相同的换水周期下，随着蛭弧菌蛭质体的浓度升高，成活率、溶菌酶 活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力都在逐渐升高，白化率、畸形率明显降低； 说明蛭弧菌蛭质体的浓度越高，大菱鲆幼苗的免疫力越强，成活率越高，患病机率越 小。Bl-I B8-1…D1-4 D8-4之间的成活率、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚 氧化酶活力、白化率、畸形率几乎无明显差异。在水中或者是在饲料中添加浓度为10 107pfu/ml蛭弧菌蛭质体菌液，5-40天之间不换水，对育苗成活率、溶菌酶活力、超氧化 物歧化酶活力、酚氧化酶活力白化率、畸形率影响不明显，均可提高成活率和免疫力。
感染实验的结果显示，A组的相对存活率(Relative :Percent Survival，RPS)为0， 与A组相比，B、C、D组的相对存活率均有明显提高，从表五可以看出，在相同的换水 周期下，随着蛭弧菌蛭质体菌液浓度的升高，相对存活率逐渐升高，且都明显高于工厂生产的A组，说明采用新型的添加蛭弧菌蛭质体的方法，能明显提高大菱鲆幼苗的相对 存活率，即提高大菱鲆幼苗的免疫抵抗力；从不同换水周期来看，相同浓度下的各组大 菱鲆幼苗的相对存活率没有显著的变化。说明新型的育苗方法下，5-40天不换水，蛭弧 菌蛭质体菌液均可增强大菱鲆免疫力。就B、C、D三组不同处理方式而言，均能提高 大菱鲆幼苗的相对存活率，且在水体与饲料中同时添加，效果最佳。
因此，无论在水中还是饲料中添加一定浓度的蛭弧菌蛭质体菌液，长达40天不 换水，均可提高大菱鲆幼苗的免疫抵抗力，在水中与饲料中同时添加，效果最好。从而 进一步表明蛭弧菌蛭质体具有潜在的疫苗作用，能够刺激大菱鲆产生免疫应答反应，抵 御气单胞菌的侵害，有助于提高大菱鲆幼苗的成活率。
试验结果表明，B、C、D组的育苗方式可提高育苗成活率和鱼的免疫力、促 进摄食和快速生长，且E组效果最佳。即无论在水中还是在饲料中添加浓度为10 107pfu/ml蛭弧菌蛭质体菌液，长达40天不换水，均可明显提高大菱鲆的育苗成活率、溶 菌酶活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力等免疫指标，降低白化率和畸形率；在 水中和饲料中同时添加，效果更佳。5-40天之间换(全池)水，对溶菌酶活力、超氧化 物歧化酶活力、酚氧化酶活力、白化率、畸形率均无明显影响，都能达到提高免疫力， 降低患病机率的效果。
经过测定，A组的细菌总数和弧菌总数分别高达1.56X 103cfo/ml和 1.17X102cfu/ml。B、C、D 组的细菌总数分别为 1.42X 102cfu/ml、1.51 X 102cfo/ml、 1.17X102cfu/ml ；弧菌总数 4.59 X 10cfu/ml、6.87 X 10cfo/ml、3.9 X 10cfo/ml，与 A 组相 比，都降低了 1个数量级。A、B、C、D组的pH都在7.79 8.10之间。
由此可见，无论在水中还是在饲料中添加浓度为10 107pfu/ml的蛭弧菌蛭质 体菌液，均可提高种苗的免疫力和育苗成活率，并且可控制水中细菌，改善水质，在水 中和在饲料中同时添加，效果更佳。即能够节约地下水资源，保护环境，又能够节省成 本，提高经济效益，促进养殖业的快速发展。
表一成活率、白化率、畸形率及免疫活性指标
权利要求
1.一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于包括以下操作步骤(1)亲鱼的选择从养殖的2龄大菱鲆成鱼中选择体重在1.6 2.2kg的亲体作为亲鱼；(2)亲鱼强化培养将亲鱼按雌雄2 1的比例，在亲鱼培育池中进行培育；在培育池中加入蛭弧菌蛭质 体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的起始浓度达10 107pfu/ml;饵料在投入培育池前用 浓度为10 107pfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15 30min ；(3)采卵、受精和孵化大菱鲆经强化培养达到性成熟后，采集卵子和精液，进行人工受精；将受精卵放入 装有海水的育苗池中；在育苗池中加入蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的 起始浓度达10 107pfu/ml ；受精卵经过3 5天孵化出初孵仔鱼；(4)布池在培苗池中加入蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中的蛭弧菌蛭质体的起始浓度达10 107pfu/ml ；将初孵仔鱼放入培苗池内进行培育，初孵仔鱼的布池密度为2 3万粒/3m ；(5)投饵投喂的饲料包括轮虫、卤虫无节幼虫、卤虫和颗粒饲料；饲料在投入培苗池前用浓 度为10 107pfu/ml的蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15 30min ；(6)每隔5 40天换掉池水一次，换水后重新添加蛭弧菌蛭质体菌液，使池水中蛭弧 菌蛭质体的浓度达10 107pfU/mL ；鱼苗经过80 90天的饲养，进入养成阶段。
2.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于步骤( 所述 培育池中的水经过精细过滤的；所述饵料每日投喂3次；所述亲鱼池中水温控制在19 20°C,光照调控在1500 25001ux，光照时间是前2周每天9 11小时，两周后每天 19 20小时，经过2 3个月的温光调控，亲鱼达到性成熟。
3.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于步骤C3)所述育 苗池为是长为4m，宽为3m，深为1.5m的长方形水泥池，池内设置6个气石，微充气。
4.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于步骤(4)所述培 苗池中培育苗种过程中的水温为18 20°C，盐度为沈 观％。，pH为8.0 8.2，溶解氧 5.0 7.0mg/L;苗种培育期间不断充气，前10天充气量控制在20 40L/h/m2，仔鱼开 鳔后逐渐增加充气量至50 70L/h/m2。
5.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于步骤( 所述 投饵是第9 15日龄投喂轮虫，投喂密度为10个/ml ；第10 25日龄投喂卤虫无节幼 虫，投喂密度为由0.2个/mL;第20 35日龄投喂卤虫，投喂密度为到1个/mL;第 35日龄以后投喂颗粒饲料，颗粒饲料的投喂量为lg/ml。
6.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于步骤( (5) 所述蛭弧菌为蛭弧菌(Bdellovibrio sp.)BDFM05,所述蛭弧菌于2009年8月7日保藏于中 国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO : M209172。
7.根据权利要求1所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于所述蛭弧菌蛭 质体菌液按照以下方法制备得到在含有宿主菌的DNB液体培养基中接入蛭弧菌，于.20 ;35°C、150 300rpm 培养 36 48h，培养液经 4°C 6000 8000rpm 离心 15 20min 后，去除含蛭弧菌游泳体的上清，沉淀即是蛭质体。
8.根据权利要求7所述的一种节能型海水鱼育苗方法，其特征在于所述宿主菌为 嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)；所述DNB液体培养基是将营养肉汤0.相、酪蛋白 酸水解物0. 和酵母精提物O.lg溶于IOOOml蒸馏水中，调节pH值至7.2 7.6。
全文摘要
本发明公开了一种节能型海水鱼育苗方法。该方法包括步骤(1)亲鱼的选择；(2)亲鱼强化培养；(3)采卵、受精和孵化；(4)布池；(5)投饵；(6)养成。本发明采用蛭弧菌蛭质体预防和调节、环境调控相结合的方案，在育苗池中添加蛭弧菌蛭质体菌液，使水体中蛭弧菌蛭质体浓度为10～107pfu/mL，同时饲料用10～107pfu/ml蛭弧菌蛭质体菌液浸泡15～30min，平均育苗成活率达到50％以上，白化率降至4％，畸形率降至2.1％，并且能有裂解水中的致病或潜在致病菌，改善水质，长达40天不换水，节约了成本，大大提高了经济效益，是一种绿色低碳的新型无公害育苗新方法。
文档编号C12R1/01GK102017917SQ20101027109
公开日2011年4月20日 申请日期2010年8月31日 优先权日2010年8月31日
发明者何伟杰, 蔡俊鹏 申请人:华南理工大学