一种灵芝白果果酒及其制备的方法
【专利摘要】本发明公开了一种灵芝白果果酒及其制备的方法，该工艺涉及生物工程【技术领域】。以银杏白果为主要原料采用固体发酵技术和酿酒工艺制得灵芝白果果酒。白果切成3－5mm小块，灭菌后接入5～30%灵芝种子液，用保鲜膜密封发酵，加入灵芝发酵物重量30~70%的大米煮成的米饭，大米重量1~5%的酒曲和2~5倍的水，经过10~30℃，10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。该酒酒精度8~30%，总黄酮含量1~15mg/L，银杏内脂10~150mg/L，灵芝三萜含量50～500mg/L，蛋白质60～500mg/L，可溶性糖<2.0%，多糖100~800mg/L，皂苷20~500mg/L。该酒具有抗氧化和保护肝脏的功效。
【专利说明】一种灵芝白果果酒及其制备的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物工程【技术领域】，特指利用灵芝采用固体发酵技术转化银杏白果，经过两次发酵、过滤和勾兑生产灵芝银杏白果果酒的方法和用途。
【背景技术】
[0002]银杏白果的主要成分是蛋白质、淀粉和脂肪，另外含有黄酮、萜类化合物、银杏酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、银杏醇、白果酚和多糖。我国中医古书，一直将白果列为重要药材，白果酸抑制多种杆菌及皮肤真菌，并对葡萄球菌、链球菌、白喉、炭瘟杆菌，枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、伤寒菌等都有不同程度的抑制作用。从鲜白果中提取出来的白果酚酸，有降低血压，增加血管的渗透性作用。临床试验证明，经常食用白果，可治疗高血压、止白带、咳嗽、发热，以及心脑血管、呼吸系统、皮肤病、牙痛等疾病，还有清热扰菌、温肺益气、扩张血管、增加血流量、定痰喘、去皱纹、防衰老、润音喉、健身美容、延年益寿等功效。但是白果中由于含有微量的白果酚、白果酚酸，易导致人体食欲不振、脱皮、触痛，不等程度的肝损害、肾小球肾炎，白果酚酸有溶血作用，引起惊厥和死亡。由于这些副作用阻碍了白果的大量的食用。因此采用生物工程技术，一方面可以强化白果的药用价值，同时具有降低白果毒性，对于开发利用白果资源具有重要社会学意义，同时也会产生巨大的经济价值。
[0003]国内关于银杏白果发酵酒有部分研究和报道，已经申请发明专利共十多项，这些专利基本上采用浸泡、勾兑或者液体发酵，如中国专利(CN01113680.4)介绍了一种以银杏为主要原料加入48度至52度白酒中浸溃提取有效成份后得酒液，然后再加入银杏提取物即银杏酮、蜂蜜勾兑而成；专利(CN03131562.3)主要介绍以草毒和浸泡、蒸煮后的银杏、红枣、葡萄为原料，经糖、米曲、活性酵母发酵24~36小时，搅拌勾兑50~60度的酒，封存5~15天后压汁，经粗、细过滤，取汁与糖按50:1的比例调配，该酒具有软化血管、降低血月旨、补血、活血、润肺、健脾之功效和营养、医用价值；专利(CN96115885.9)主要涉及采用银杏叶80~110克、小米70~85克、糯米50~80克、高梁45~60克、糖化酶30~40克、红曲75~95克、白酒30~45克、水15~35`克等原料经过发酵获得银杏酒，该酒可预防防治由动脉硬化引起的疾病、脑血管障碍后遗症、脑受伤后遗症等；专利(CN1376776)涉及银杏叶低温粉碎机内粉碎，白酒浸泡，脱苦以及白酒勾兑，该酒降低血清胆固醇、预防脑供血不足、脑功能性障碍提高人体耐缺氧能力、促进红细胞的生成功能。目前，对白果发酵的方法主要银杏叶或其提取物或者白果加入大米、酒曲或其他辅料直接发酵；胡广东，宋瑞滨曾经报道米与银杏叶或白果一同蒸煮，蒸煮冷却后加入米曲糖化发酵，经过后续压榨获得银杏果酒；。用这些方法得到的酒由于含有银杏叶或白果中的活性成分，如黄酮和萜类因而具有一定的功效。由上述研究可知，银杏白果可以与米混合通过与酒曲发酵获得含有银杏活性成分的功能性白酒，但是无论银杏叶还是其提取物或者白果都含有一定量的银杏毒素，如氢氰酸、银杏酚酸，使得银杏白酒或果酒的使用量受到了一定的限制，限制了银杏酒的销售量。专利(申请号:CN201010145712.4)涉及药用真菌金耳转化银杏白果获得的白果酒，该酒同时含有金耳和银杏的活性成分具有预防糖尿病、高血脂、抗氧化和增加肌体免疫力等功效，专利(申请号201110197681.1)原材料白果经过打浆、粉碎、糊化、液化和糖化、液体好氧发酵和酒精发酵制得灵芝银杏白果黄酒，该酒具有预防高血压和抗氧化等功效。但是使用这两种方法制备的酒，由于生物转化阶段采用液体发酵，发酵成本大，易污染，转化白果量低。本发明采用固态发酵技术，可以大规模的转化白果，降低成本。
【发明内容】
[0004]本发明提供的是一种灵芝白果果酒的酿制技术，以银杏白果为主要原料，利用灵芝采用固体好氧发酵技术，酒精发酵技术相结合，经过两次菌种发酵获得的发酵液，该发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝银杏白果果酒。
[0005]灵芝银杏白果果酒，该酒酒精度8-30%，总黄酮含量l_15mg/L，银杏内脂10-150mg/L,灵芝三萜含量50-500mg/L,蛋白质60-500mg/L,可溶性糖<2.0%，多糖100-800mg/L，皂苷20_500mg/L。该酒具有抗氧化功效。
[0006]本发明的目的在于提供一种灵芝白果果酒的制备方法，按下述步骤制备得到:
(1)液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶40~150mL，100~130°C灭菌10~60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60~180转/分钟，温度22~33°C培养5~10天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
(2)液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50~80%转入种子罐，经过100~120°C灭菌，冷却至室温，以3~10% (体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度2 2~33°C，罐压0.03~0.08兆帕，搅拌转速60~250转/分，通风量1:0.3~1:1.2v/v/m培养3~8天，制得灵芝液体深层培养菌种；
(3)灵芝固态发酵:白果切成3~5mm的颗粒，110~150°C灭菌10~60分钟，冷却到室温后，以5~20% (体积与重量比)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22~33°C，湿度55~90%培养5~20天获得灵芝发酵白果发酵物；
(4)灵芝银杏白果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按30- 70% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2-5倍的水，混合均与，经过10 - 30°C, 10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。用该工艺生产的灵芝银杏白果果酒，其特征在于色质米黄色至褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0007]许多研究都已研究证明灵芝三萜具有保护肝脏功能(Su CH, Lain丽，ChanMH.Hepato-protective trit erpenoids from Ganoderma Tsugae Murri11.MushroomBiology and Mushroom Products.Hongkong: The Chinese University Press, 1993，275~283;王明宇，林志彬:灵芝三萜类成分在体内外对小鼠免疫性肝损伤的影响.中国药学杂志2000，35(12)，809-812)，灵芝多糖能够抗氧化(张志军；李淑芳；魏雪生；陈晓明.灵芝多糖体外抗氧化活性的研究；杨红梅；王黎；陈洁；李宜培；裴瑞；.灵芝多糖肽对Alzheimer样大鼠海马超微结构和抗氧化能力的影响.中国老年学杂志，2009, 29(18):2351-2353)，本发明提供的灵芝银杏白果果酒，具有保护肝脏和抗氧化等功效。
【具体实施方式】
[0008]下面结合实施例对本发明做进一步阐述:
其中所述的灵芝白果果酒功能性成分按下列方法测定:
总黄酮含量的测定采用亚硝酸钠一硝酸铝法(邓斌，蒋刚彪，陈六平.分光光度法测定食品包装纸用紫甘薯总黄酮的含量.包装工程，2008，29 (I): 27~29.);灵芝三萜含量的测定采用王翔飞介绍的测定方法(王翔飞，潘旭东，刘雯霞，等.黄花瓦松中总三萜成分的含量的测定.中国民族民间医药，2009, 18(10):11.);银杏内酯含量测定采用分光光度法(张渝阳，王鑫，赵丽娟，荀绍馨，田明，张新，王晓宁，邓桂春:分光光度法测定银杏萜内酯的含量.辽宁化工，2006，35 (10):618~620);蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝(陈建勋、王晓峰:植物生理学实验指导.实验19:考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量.华南理工大学出版社P54~55):氢氰酸含量测定依据中华人民共和国国家标准GB/T15665-1995:豆类、配糖氢氰酸含量的测定；银杏酚酸采用荧光分析法测定(田亚平，尤文元，李或娜，荧光分析法测定银杏酚酸.分析化学研究简报.2006年特刊，sl55-sl57)，灵芝酸测定采用紫外分光光度法(Tang YJ, Zhong JJ.Fed-batch fermentation of Ganoderma lucidumfor hyperproduction of polysaccharide and ganoderic acid.Enzyme and MicrobialTechnology 31 (2002) 20 - 28)。多糖含量的测定采用硫酸一苯酚法(赵阳楠，常继东.苯酚硫酸法和间接碘量法测定灵芝多糖含量比较[J].食用菌，2007，(3): 58-61.)，还原糖含量测定米用3,5 —二硝基水杨酸法。
[0009]本发明中实施例1~3中所使用的灵芝菌种为可以购买到的任意一种灵芝菌种，包括:赤芝、紫芝、树舌等多种灵芝菌种。玉米浆为市售任意厂家的，但是蛋白质含量不低于37%，灵芝斜面菌种采用PDA培养基制备。1000mLPDA培养基含200g马铃薯提取液(去皮马铃薯切成碎片、1000mL蒸馏水煮沸30分钟，八层纱布过滤，滤液定容至1000mL,滤液即为马铃薯提取液)加入蔗糖20g、琼脂20g，煮沸待琼脂完全溶化后分装试管，塞上棉塞，121°C灭菌，制成斜面。无菌接种灵芝菌种，3`0°C培养7天，4°C冷藏待用。
[0010]实施例1
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20克，黄豆饼粉50克，玉米浆50克，麸皮60克，磷酸二氢钾0.6克，硫酸镁0.5克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶40mL，100°C灭菌60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma在转速60转/分钟,温度22°C培养10
天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖100克，黄豆饼粉10克，玉米浆10克，麸皮10克，磷酸二氢钾0.6克，硫酸镁0.5克，豆油7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50%转入种子罐，经过100°C灭菌，冷却至室温，以10% (体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度22°C，罐压0.03兆帕，搅拌转速70转/分，通风量1:0.3v/v/m培养8天,制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:白果切成3mm的颗粒，110°C灭菌60分钟，冷却到室温后，以20%(体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种。覆盖保鲜膜，在温度32°C，湿度90%培养20天获得灵芝发酵白果发酵物；灵芝银杏白果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按30% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的1.5%的酒曲，大米重量2倍的水，混合均与，经过10°C，50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。用该工艺生产的灵芝银杏白果果酒，其特征在于色质米黄色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0011]实施例2
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖60克，黄豆饼粉30克，玉米浆30克，麸皮30克，磷酸二氢钾0.3克，硫酸镁0.3克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶80mL，115°C灭菌40分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma在转速120转/分钟,温度28°C培养7
天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖60克，黄豆饼粉25克，玉米浆31克，麸皮30克，磷酸二氢钾0.25克，硫酸镁0.25克，豆油4.1克，水1000mL ；液体深层培养培养基按罐体积60%转入种子罐，经过115°C灭菌，冷却至室温，以6% (体积t匕)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度27°C，罐压0.05兆帕，搅拌转速120转/分，通风量1:0.8v/v/m培养5天，制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:白果切成4mm的颗粒，130°C灭菌30分钟，冷却到室温后，以10%(体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度60°C，湿度85%培养10天获得灵芝发酵白果发酵物；
灵芝银杏白果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按50% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米 饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的3%的酒曲，大米重量3倍的水，混合均与，经过20°C，25天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。用该工艺生产的灵芝银杏白果果酒，其特征在于色质米浅褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0012]实施例3
液体摇瓶菌种的制备:蔗糖100克，黄豆饼粉10克，玉米浆10克，麸皮10克，磷酸二氢钾0.06克，硫酸镁0.05克，水1000mL,分装250mL三角瓶，每瓶140mL, 128°C灭菌55分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种iGanoderma Iucidum)，在转速180转/分钟,温度33°C培养5天，制得灵芝液体摇瓶菌种；
'液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20克，黄豆饼粉45克，玉米浆45克，麸皮60克，磷酸二氢钾0.06克，硫酸镁0.05克，豆油2克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积80%转入种子罐，经过120°C灭菌，冷却至室温，以3%(体积比)接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温度33°C，罐压0.08兆帕，搅拌转速250转/分，通风量1:1.lv/v/m培养8天，制得灵芝液体深层培养菌种；
灵芝固态发酵:白果切成5mm的颗粒，150°C灭菌10分钟，冷却到室温后，以5% (体积比重量)接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22°C，湿度60%培养5天获得灵芝发酵白果发酵物；
灵芝银杏白果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按70% (重量比)称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物以及大米重量的5%的酒曲，大米重量5倍的水，混合均与，经过30°C，10天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。用该工艺生产的灵芝银杏白果果酒，其特征在于色质褐色，具有浓郁的果香味和灵芝发酵的特有香味。
[0013]实施例1、实施例2和实施例3的测定结果显示在表1表1:实施例1一 3成分分析表
【权利要求】
1.灵芝银杏白果果酒，其特征在于该酒酒精度8-30%，总黄酮含量l-15mg/L，银杏内脂10-150mg/L，灵芝三萜含量50-500mg/L，蛋白质60_500mg/L，可溶性糖〈2.0%，多 100-800mg/L，皂苷 20_500mg/L。
2.权利要求1所述的一种灵芝白果果酒的制备方法，其特征在于按下述步骤制备得到: (1)液体摇瓶菌种的制备:蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，水1000mL,按照体积比 16~60%分装三角瓶，100~130°C灭菌10~60分钟，冷却后接入灵芝试管斜面菌种，在转速60~180转/分钟，温度22~33°C培养5~10天，制得灵芝液体摇瓶菌种； (2)液体扩大培养菌种的制备:根据种子罐体积，按下述比例称取蔗糖20~100克，黄豆饼粉10~50克，玉米浆10~50克，麸皮10~60克，磷酸二氢钾0.06~0.6克，硫酸镁0.05~0.5克，豆油2~7克，水1000mL ;液体深层培养培养基按罐体积50~80%转入种子罐，经过100~120°C灭菌，冷却至室温，以体积比3~10%接种量接入灵芝的液体摇瓶菌种，在温 度22~33°C，罐压0.03~0.08兆帕，搅拌转速60~250转/分，通风量1: 0.3~1:1.2 (v/v/m)培养3~8天，制得灵芝液体深层培养菌种； (3)灵芝固态发酵:白果切成3~5mm的颗粒，110~150°C灭菌10~60分钟，冷却到室温后，以体积与重量比5~20%接种量接入灵芝的液体深层培养的菌种，覆盖保鲜膜，在温度22~33°C，湿度55~90%培养5~20天获得灵芝发酵白果发酵物； (4)灵芝银杏白果果酒的酿造:称取灵芝发酵物重量，按重量比30- 70%称取大米，加与大米等重量的水煮成米饭，冷却后与灵芝发酵物、大米重量的I~5%的酒曲，大米重量2-5倍的水，混合均与，经过10 — 30°C，10~50天发酵，发酵液经过过滤、勾兑获得灵芝白果果酒。
【文档编号】C12G3/02GK103695225SQ201210366381
【公开日】2014年4月2日 申请日期:2012年9月27日 优先权日:2012年9月27日
【发明者】张志才, 郑惠华, 任晓峰, 张才九, 陈惠 , 谢德中 申请人:江苏大学, 江苏安惠生物科技有限公司