用于杂草控制的方法和组合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供用于增强杂草控制的新颖组合物。具体地说，本发明提供了调节杂草种类中的4-羟苯基-丙酮酸双加氧酶的方法和组合物。本发明还提供了增强杂草控制的组合物与方法的组合。
【专利说明】用于杂草控制的方法和组合物
[0001]本申请依据35USC§ 119(e)要求2011年9月13日提交的美国临时申请序列号61/534,066的权益，该案以引用的方式整体并入本文中。文件中所含的名为“40_21(58636)B seq listing, txt”的序列表为 400，732 个字节(在操作系统 MS-Windows中测量)并且于2012年9月7日创建，与本案一起提交并以引用的方式并入本文中。
[0002]领域
[0003]本发明大体上涉及杂草管理领域。更具体地说，本发明涉及似杂草植物中的4-羟苯基-丙酮酸双加氧酶基因以及含有供调节其表达的多核苷酸分子的组合物。本发明还提供了可用于杂草控制的方法和组合物。
[0004]背景
[0005]杂草是在农艺环境中与耕种的植物竞争的植物，并且农场主每年在作物损失和控制杂草尝试方面要花费上亿美元。杂草还充当作物疾病和虫害的宿主。在农业生产环境中由杂草引起的损失包括作物产量降低、作物质量下降、灌溉成本增加、收割成本增加、土地价值降低、损伤牲畜以及由杂草携带的昆虫和病害所引起的作物损害。杂草造成这些影响的主要手段有:1)与作物竞争水、养分、阳光以及供生长和发育的其它必需要素；2)产生有毒或刺激性化学物质，这些化学物质引起了人类或动物健康问题；3)产生极大量的种子或营养繁殖部分或两 者，从而污染了农业产品并且使这些物种在农业用地中长期存在；以及4)在农业和非农业用地上产生大量必须除掉的植被。耐除草剂的杂草是几乎所有正在使用的除草剂所面临的一个问题，需要有效地管理这些杂草。目前有超过365种杂草生物型被除草剂抗性行动委员会(Herbicide Resistance Action Committee,HRAC)、北美除草剂抗性行动委员会(North American Herbicide Resistance Action Committee,NAHRAC)和美国治草科学学会(Weed Science Society of America, WSSA)鉴别为对一种或多种除草剂具有除草剂抗性。
[0006]4-羟苯基-丙酮酸双加氧酶(HPPD)是一种含Fe的酶，它催化酪氨酸分解代谢中的第二个反应，即，将4-羟苯基丙酮酸转化成高龙胆酸。这种酶是包括三酮类、异噁唑类及吡唑类化学品家族的成员在内的许多除草剂的靶。
[0007]发明概述
[0008]在一个方面中，本发明提供一种似杂草植物的控制方法，该方法包括向似杂草植物外部施用一种包含多核苷酸和转移剂的组合物，其中该多核苷酸与HPF1D基因序列或其片段，或与所述HPH)基因序列或其片段的RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述HPPD基因序列选自SEQ ID NO:1_32或其多核苷酸片段，由此相对于未用所述组合物处理的似杂草植物，该似杂草植物生长或发育或繁殖能力有所降低，或该似杂草植物对HPro抑制剂除草剂更敏感。以此方式，可以使已经对施用含草甘膦(glyphosate)的除草剂产生抗性的植物更易于受含草甘膦的除草剂的除草作用影响，由此加强该除草剂的作用。该多核苷酸片段为至少18个连续核苷酸、至少19个连续核苷酸、至少20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID NO:1-32的HPH)基因序列至少85%同一，并且该转移剂是一种有机硅酮组合物或化合物。该多核苷酸片段还可以是有义或反义ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA杂交体。该组合物可以包括超过一个多核苷酸片段，并且该组合物可以包括HPH)抑制剂除草剂和/或增强该组合物的杂草控制活性的其它除草剂。
[0009]在本发明的另一个方面中，提供了用于调节似杂草植物物种中HPro基因表达的多核苷酸分子和方法。该方法降低、阻遏或以其它方式延迟植物中HPro基因的表达，包括向似杂草植物外部施用一种包含多核苷酸和转移剂的组合物，其中该多核苷酸与HPro基因序列或其片段，或与该HPro基因序列或其片段的RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中该HPro基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段。该多核苷酸片段为至少18个连续核苷酸、至少19个连续核苷酸、至少20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID NO:1-32的HPH)基因序列至少85%同一，并且该转移剂是一种有机硅酮化合物。该多核苷酸片段还可以是有义或反义ssDNA或ssRNA、dsRNA或dsDNA，或dsDNA/RNA杂交体。
[0010]在本发明的又一方面中，本发明的包含多核苷酸分子的组合物可以与其它除草用化合物(共除草剂)组合以提供对于耕种植物的田地中不想要的植物的额外控制。
[0011]在又一方面中，该多核苷酸分子组合物可以与任一种或多种其它的农用化学品组合，以形成多组分杀虫剂，从而得到甚至更广谱的农业保护，这些农用化学品诸如为杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、杀螨剂、生长调控剂、化学绝育剂、化学信息素、驱避剂、引诱剂、信息素、取食刺激剂、生物杀虫剂、微生物杀虫剂或其它生物活性化合物。
[0012]附图简述
[0013]以下附图形成了本说明书的一部分并且被包括用来进一步说明本发明的某些方面。通过参照一个或多个附图并结合本文所呈现的具体实施方案的详细说明，可以更好地理解本发明。由以下【专利附图】
【附图说明】，可以更完整地理解本发明:
[0014]图1.用ssDNA触发多核苷酸(trigger polynucleotide)和HPF1D抑制剂除草剂硝横草酮(Mesotrione)处理长芒觅(Amaranthuspalmeri)植物。
[0015]发明详述
[0016]本发明提供了调控、阻遏或延迟HPro (4-羟苯基-丙酮酸双加氧酶)基因表达并且增强对似杂草植物物种和重要的是HPro抑制剂除草剂抗性杂草生物型的控制的方法和含多核苷酸的组合物。该方法的各个方面可以用于管理农艺和其它耕种环境中的各种似杂草植物。
[0017]提供以下定义和方法以更好地定义本发明并且指导本领域技术人员实践本发明。除非另作注释，否则各术语应根据相关领域技术人员的常规用法来理解。在一个术语以单数形式提供的情况下，本发明人也预期由该术语的复数形式所描述的本发明的各个方面。
[0018]“不可转录的”多核苷酸意思指，这些多核苷酸不包含完整的聚合酶II转录单元。
[0019]如本文所使用，“溶液”是指均匀混合物和不均匀混合物，诸如悬浮液、胶体、胶束及乳液。
[0020]似杂草植物是与耕种的植物竞争的植物，特别重要的那些包括但不限于，作物生产中的重要入侵性和有害的杂草及除草剂抗性生物型，诸如苋属物种(Amaranthu sspecies)-白觅(A.albus)、北美觅(A.blitoides)、绿穗觅(A.hybridus)、长芒觅(A.palmeri)、鲍威氏觅(A.powellii)、反枝觅(A.retroflexus)、刺觅(A.spinosus)、糙果觅(A.tuberculatus)及皱果觅(A.viridis);豚草属物种(Ambrosia species)-三裂叶豚草(A.trifida)、美洲豚草(A.artemisifolia);黑麦草属物种(Lolium species)-多花黑麦草(L.multiflorum)、硬直黑麦草(L.rigidium)、多年生黑麦草(L.perenne);马唐属物种(Digitaria species)-两耳草(D.1nsularis);大戟属物种(Euphorbia species)-白荀猩猩草(E.heterophylla);地肤属物种(Kochia species)-扫帚草(K.scoparia);高梁属(Sorghum species)-约翰逊草(S.halepense);白酒草属(Conyza species)-香丝草(C.bonariensis)、小蓬草(C.canadensis)、苏门白酒草(C.sumatrensis)；虎尾草属物种(Chloris species)-截头虎尾草(C.truncate);稗草属物种(Echinocholaspecies)-光头稗(E.colona)、大骨草(E.crus-galli);穆属物种(Eleusine species)-牛筋草(E.1ndica);早熟禾属物种(Poa species)-—年生早熟禾(P.annua);车前属物种(Plantago species)-长叶车前草(P.1anceolata);燕麦属物种(Avena species)-野燕麦(A.fatua);藜草属物种(Chenopodium species)-灰蓼头草(C.album);狗尾草属物种(Setaria species)-灰藜(S.viridis)、苘麻(Abutilon theophrasti)、番薯属物种(Ipomoea species)、田菁属物种(Sesbania species)、决明属物种(Cassia species)、黄花稳属物种(Sida species)、臂形草属物种(Brachiaria species)及煎属物种(Solanumspecies)。
[0021] 耕种区中所见的其它似杂草植物物种包括大穗看麦娘(Alopecurusmyosuroides)、不实燕麦(Avena sterilis)、长颖燕麦(Avena sterilis Iudoviciana)、车前臂形草(Brachiaria plantaginea)、双雄雀麦(Bromus diandrus)、硬雀麦(Bromusrigidus)、洋狗尾草(Cynosurus echinatus)、升马唐(Digitaria ciliaris)、止血马唐(Digitaria ischaemum)、马唐(Digitaria sanguinalis)、稻稗(Echinochloaoryzicola)、水稗 (Echinochloa phyllopogon)、路易斯安纳野黍(Eriochloa punctata)、大麦草(Hordeum glaucum)、墙大麦(Hordeum Ieporinum)、田间鸭嘴草(Ischaemumrugosum)、千金子(Leptochloa chinensis)、欧黑麦草(Lolium persicum)、小藹草(Phalaris minor)、变形藹草(Phalaris paradoxa)、筒轴茅(Rottboellia exalta)、大狗尾草(Setaria faberi)、巨狗尾草(Setaria viridis va r robusta-alba schreiber)、狗尾草变种(Setaria viridis var robusta-purpurea)、Snowdenia polystachea、苏丹高梁(Sorghum sudanese)、泽 ?写(Alisma plantago-aquatica)、凹头觅(Amaranthuslividus)、青觅(Amaranthus quitensis)、耳基水觅(Ammania auriculata)、红花水觅(Ammania coccinea)、臭春黄菊(Anthemis cotula)、阿披拉草(Apera spica-venti)、圆叶虎耳(Bacopa rotundifolia)、三叶鬼针草(Bidens pilosa)、Bidens subaltemans、非洲芥末(Brassica toumefortii)、旱雀麦(Bromus tectorum)、小果亚麻莽(Camelinamicrocarpa)、茼蒿(Chrysanthemum coronarium)、田野宽丝子(Cuscuta campestris)、异型莎草(Cyperus difformis)、Damasonium minus、播娘嵩(Descurainia sophia)、细叶二行芥(Diplotaxis tenuifolia)、车前叶蓝蓟(Echium plantagineum)、三蕊沟繁缕(Elatine triandra var pedicellata)、白荀猩猩草、卷莖蓼(Fallopia convolvulus)、水風草(Fimbristylis miliacea)、鼠由辧花(Galeopsis tetrahit)、锯锯藤(Galiumspurium)、向日葵(Helianthus annuus)、假苍耳(Iva xanthifolia)、单刚毛狗尾草(Ixophorus unisetus)、变色牵牛(Ipomoea indica)、圆叶牵牛(Ipomoea purpurea)、毛莖墓(Ipomoea sepiaria)、雍菜(Ipomoea aquatic)、三裂叶墓(Ipomoea triloba)、毒萬苣(Lactuca serriola)、黄花域叶草(Limnocharis flava)、直立石龙尾(Limnophilaerecta)、无柄花石龙尾(Limnophila sessilif1ra)、美洲母草(Lindemia dubia)、美洲母草主变种(Lindernia dubia var major)、狭叶母草(Lindemia micrantha)、陌上草(Lindemia procumbens)、冰叶曰中花(Mesembryanthemum crystalIinum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、甲鸟舌草(Monochoria vaginalis)、球果芥(Nesliapaniculata)、虞美人(Papaver rhoeas)、银胶菊(Parthenium hysterophorus)、Pentziasuffruticosa、小子藹草(Phalaris minor)、野萝卜(Raphanus raphanistrum)、秋冬萝卜(Raphanus sativus)、皱果莽(Rapistrum rugosum)、印度节节菜原变种(Rotalaindica var uliginosa)、冠果草(Sagittaria guyanensis)、蒙特登慈姑(Sagittariamontevidensis)、矮慈姑(Sagittaria pygmaea)、俄国大蓟(Salsola iberica)、萤蔺欧万斯变种(Scirpus juncoides var ohwianus)、北水毛花(Scirpus mucronatus)、金色狗尾草(Setaria Iutescens)、剌金午时花(Sida spinosa)、野芥(Sinapis arvensis)、戟叶柿娘蒿(Sisymbrium orientale)、大蒜芥(Sisymbrium thellungii)、东方龙葵(Solanum ptycanthum)、花叶潰苦菜(Sonchus asper)、苦苣菜(Sonchus oleraceus)、甜高梁(Sorghum bicolor)、繁缕(Stellaria media)、薪蓂(Thlaspi arvense)、苍耳(Xanthiumstrumarium)、南非金盖草(Arctotheca calendula)、苏门白酒草、革命菜(Crassocephalumcrepidiodes)、萼距花(Cuphea carthagenenis)、 Epilobium adenocaulon、费城飞莲(Erigeron philadelphicus)、紫萍(Landoltia punctata)、北美独行菜(Lepidiumvirginicum)、雨久花(Monochoria korsakowii)、少花龙葵(Solanum americanum)、龙葵(Solanum nigrum)、欧洲福克斯泰尔羊茅(Vulpia bromoides)、黄鹤菜(Youngiajaponica)、下轮叶黑藻(Hydrilla vert ici I lata)、垂花飞廉(Carduus nutans)、意大利蓟(Carduus pycnocephalus)、黄星蓟(Centaurea solstitialis)、丝路蓟(Cirsiumarvense)、节节草(Commelina diffusa)、田方定花(Convolvulus arvensi S)、野古月萝卜(Daucus carota)、止血马唐、孔雀稗(Echinochloa crus-pavonis)、水風草、鼠由辧花、锯锯藤、直立石龙尾、淡甘菊(Matricaria perforate)、虞美人、乌头叶毛茛(Ranunculusacris)、翅果假吐 金菊(Soliva sessilis)、尖辧花(Sphenoclea zeylanica)、繁缕、三叉针茅(Nassella trichotoma)、智利针草(Stipa neesiana)、匍匍翦股颖(Agrostisstolonifera)、扁蓄蓼(Polygonum aviculare)、日本看麦娘(Alopecurus japonicus)、茼草(Beckmannia syzigachne)、旱雀麦、孟仁草(Chloris inflate) Λ Echinochloa erecta、马齿觅(Portulaca oleracea)及欧洲千里光(Senecio vulgaris)。据信，所有植物在其基因组中都含有八氢番茄红素脱氢酶基因，其序列可以被分离出来，并且根据本发明的方法制造出可用于调控、抑制或延迟这些植物中靶HPH)基因的表达以及经过处理的植物的生长或发育的多核苷酸。
[0022]耕种的植物当出现在不想要的环境中时也可以被视为似杂草植物。举例来说，生长在大豆田中的玉米植物。具有一种或多种除草剂耐药性的转基因作物将需要专门的管理方法来控制杂草和自生作物。本发明能够靶向针对除草剂耐药性的转基因，从而使经过处理的植物变得对该除草剂敏感。举例来说，在包括FG72的转基因事件中的转基因HPH) DNA序列。[0023]“触发因子”或“触发多核苷酸”是与靶基因多核苷酸同源或互补的多核苷酸分子。这些触发多核苷酸分子当与转移剂一起局部施用到植物表面时，将调节靶基因的表达，由此相对于未用含触发因子分子的组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因所述含多核苷酸的组合物而对EPSPS抑制剂除草剂更敏感。本文中所披露的触发多核苷酸一般是结合靶基因序列进行描述，并且取决于所靶向的基因的各种区域，这些多核苷酸可以作为单链分子按有义(同源)或反义(互补)取向使用，或包含两条链作为双链分子或其核苷酸变体及修饰的核苷酸。
[0024]预期本发明的组合物将含有多种多核苷酸和除草剂，包括但不限于，HPro基因触发多核苷酸和HPro抑制剂除草剂以及任一种或多种其它除草剂靶基因触发多核苷酸和相关除草剂，及任一种或多种其它必需基因触发多核苷酸。必需基因是植物中提供有机体或细胞生长或存活必需的或者植物正常生长和发育所涉及的关键酶或其它蛋白质的基因，例如生物合成酶、代谢酶、受体、信号转导蛋白、结构基因产物、转录因子或转运蛋白；或调控性 RNA，诸如微 RNA 的基因(Meinke 等，Trends Plant Sc1.2008 年 9 月；13(9):483-91)。抑制必需基因使除草剂影响不同于受抑制的必需基因的基因产物的功能的作用增强。本发明的组合物可以包括各种调节除HPPD外的必需基因的表达的触发多核苷酸。
[0025]针对植物耐药性的转基因已经得到证实并且可以应用该方法的除草剂包括但不限于:类生长素除草剂、草甘膦、草铵膦(glufosinate)、磺酰脲类、咪唑啉酮类、溴苯腈(bromoxynil)、茅草枯(delapon)、麦草畏(dicamba)、环己二酮(cyclohezanedione)、原口卜啉原氧化酶抑制剂类(protoporphyrionogen oxidase inhibitors)、4_轻苯基-丙酮酸双加氧酶抑制剂类除草剂。举例来说，编码除草剂耐药性中所涉及的蛋白质的转基因及其多核苷酸分子是本领域已知的，并且包括但不限于，5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)，例如，更完整地描述于美国专利号7，807，791 (SEQ ID NO:5)、6，248，876B1、5，627，061,5, 804，4 25,5, 633，435,5, 145，783,4, 971，908,5, 312，910,5, 188，642、4，940，835,5, 866，775,6, 225，114BU6, 130，366,5, 310，667,4, 535，060,4, 769，061、5，633，448,5, 510，471 ;美国专利号 Re.36，449 ;美国专利号 RE37, 287E 及 5，491，288中；对磺酰脲和/或咪唑啉酮的耐药性，例如，更完整地描述于美国专利号5，6 O 5，011、5，013，659,5, 141，870,5, 767，361,5, 731，180,5, 304，732,4, 761，373,5, 331，107、5，928，937及5，378, 824 ;及国际公布W096/33270中；植物中对于羟苯基丙酮酸双加氧酶抑制性除草剂的耐药性描述于美国专利号6，245，968BU6, 268，549及6，069，115 -M国专利公布 20110191897 及 US7, 312，379SEQ ID NO:3 ；US7, 935, 869 ；US7, 304, 209, SEQID N0:l、3、5及15中；芳氧基链烷酸酯双加氧酶多核苷酸，其赋予对2，4_D和其它苯氧基生长素除草剂，以及对芳氧基苯氧基丙酸酯除草剂的耐药性，如例如W02005/107437 ；US7, 838，733SEQ ID NO:5中所描述的；及耐麦草畏的多核苷酸，如例如Herman等(2005)J.Biol.Chem.280 =24759-24767中所描述的。耐除草剂性状的其它实例包括由编码外源膦丝菌素乙酰转移酶的多核苷酸所赋予的那些，如美国专利号5，969，213,5, 489，520、5，550，318,5, 874，265,5, 919，675,5, 561，236,5, 648，477,5, 646，024,6, 177，616 及5，879，903中所描述。含有外源膦丝菌素乙酰转移酶的植物可以对抑制谷氨酰胺合成酶的草铵膦除草剂展现出改善的耐药性。此外，耐除草剂多核苷酸包括由赋予改变的原卟啉原氧化酶(protox)活性的多核苷酸所赋予的那些，如美国专利号6，288，306BU6, 282，837B1及5，767，373 ;以及W001/12825中所描述。含有这些多核苷酸的植物对于靶向protox酶的多种除草剂(又称为protox抑制剂)中的任一种可以展现出改善的耐药性。编码草甘膦氧化还原酶和草甘膦-N-乙酰转移酶的多核苷酸(GOX描述于美国专利5，463，175中并且GAT描述于美国专利公布20030083480中；麦草畏单加氧酶，美国专利公布20030135879，全部以引用的方式并入本文中)；编码溴苯腈腈水解酶的多核苷酸分子(Bxn描述于美国专利号4，810，648，以引用的方式并入本文中；针对溴苯腈耐药性)；编码八氢番茄红素脱氢酶的多核苷酸分子(crrl)(描述于Misawa等(1993)Plant J.4:833-840和Misawa等(1994)Plant J.6:481-489中；针对达草灭(norfIurazon)耐药性)；编码乙酰乳酸合成酶的多核苷酸分子(AHAS,也称为 ALS)(描述于 Sathasiivan 等(1990) Nucl.Acids Res.18:318-2193中；针对磺酰脲除草剂耐药性)；&bar基因(描述于DeBlock等(1987)EMBOJ.6 =2513-2519中；针对草铵膦和双丙氨磷(bialaphos)耐药性)。耐除草剂基因的转基因编码区和调控元件是可包括在本发明组合物中的多核苷酸触发因子和除草剂的靶。
[0026]本发明的组合物包括作为HPro抑制剂除草剂的一种组分，该除草剂包括但不限于，三酮类，诸如硝磺草酮、特糠酯酮(tefuryltrione)、环磺酮(tembotrione)及磺草酮；异噁唑类，诸如异噁氯草酮、磺酰草吡唑及异噁唑草酮；吡唑类，诸如吡草酮、苄草唑、苯吡唑草酮及苄草唑。其它HPH)抑制剂包括苯并双环酮及二环吡草酮。
[0027]许多具有类似或不同作用模式的可用除草剂(本文中称为共除草剂)可以添加到该组合物中，例如包括但不限于以下的除草剂家族成员:酰胺除草剂类、芳香酸除草剂类、含砷除草剂类、苯并噻唑除草剂类、苯甲酰基环己二酮除草剂类、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草剂类、氨基甲酸酯除草剂类、环己烯肟除草剂类、环丙基异噁唑除草剂类、二甲酰亚胺除草剂类、二硝基苯胺除草剂类、二硝基苯酚除草剂类、二苯基醚除草剂类、二硫代氨基甲酸酯除草剂类、卤代脂肪烃除草剂类、咪唑啉酮除草剂类、无机除草剂类、腈除草剂类、有机磷除草剂类、噁二唑酮除草剂类、噁唑除草剂类、苯氧基除草剂类、苯二胺除草剂类、吡唑除草剂类、哒嗪除草剂类、哒嗪酮除草剂类、吡啶除草剂类、嘧啶二胺除草剂类、嘧啶氧基苯甲胺除草剂类、季铵除草剂类、硫代氨基甲酸酯除草剂类、硫代碳酸酯除草剂类、硫脲除草剂类、三嗪除草剂类、三嗪酮除草剂类、三唑除草剂类、三唑酮除草剂类、三唑并嘧啶除草剂类、尿嘧啶除草剂类及脲除草剂类。具体地说，可以使本发明的包含多核苷酸的组合物中添加的除草剂的使用量降低。另外添加的除草剂的使用量可以降低10% -25%、26% -50%,51% -75%或更多，并且这些可增强多核苷酸与除草剂的组合物的活性的除草剂涵盖在本文中。这些家族的代表性除草剂包括但不限于，乙草胺(acetochlor)、氟锁草醚(acifiuorfen)、氟羧草醚钠(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、丙烯醒(acrolein)、草不绿(alachlor)、禾草灭(alloxydim)、烯丙醇、莠灭净(ametryn)、氨唑草酮(amicarbazone)、氨基嘧横隆(amidosulfuron)、氯氨吡唳酸(aminopyralid)、氨基三唑(amitrole)、横胺酸铵(ammonium sulfamate)、莎稗憐(anilofos)、黄草灵(asulam)、阿特拉通(atraton)、阿特拉津(atrazine)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、BCPC、氟丁酰草胺(beflubutamid)、草除灵(benazolin)、氟草胺(benfIuralin)、呋草黄(benluresate)、节11密横隆(bensulfuron)、甲基节嘧横隆(bensulfuron-methyl)、地散憐(bensulide)、噻草平(bentazone)、双苯嘧草丽、苯并双环丽(benzobicyclon)、吡草丽(benzofenap)、治草醚、双丙氨憐(bilanafos)、双草醚(bispyribac)、双草醚钠(bispyribac-sodium)、硼砂(borax)、除草定(bromacil)、溴丁酰草胺(bromobutide)、溴苯腈、去草胺(butachlor)、布芬草、抑草磷(butamifos)、地乐胺(butralin)、丁苯草酮(butroxydim)、丁草敌(butylate)、二甲胂酸(cacodylic acid)、氯酸?丐、唑草胺(cafenstrole)、长杀草(carbetamide)、唑草酮(carfentrazone)、唑酮草酯、CDEA、CEPC、整形醇(chlorfIurenol)、整形素(chlorflurenol-methyl)、杀草敏(chloridazon)、氯啼横隆(chlorimuron)、乙基氯啼横隆(chlorimuron-ethyl)、氯醋酸(chloroacetic acid)、绿麦隆(chlorotoluron)、氯苯胺灵(chlorpropham)、绿黄隆(chlorsulfuron)、敌草索(chlorthal)、氯酞酸二甲酯(chlorthal-dimethyl)、吲哚酮草酯、环庚草醚(cinmethyl in)、西速隆(cinosulfuron)、落草胺(cisanilide)、烯草酮(clethodim)、炔草酸(clodinafop)、炔草酯(clodinafop-propargyI)、异草酮(clomazone)、稗草胺(clomeprop)、二氯吡卩定酸(clopyralid)、氯酯横草胺(cloransulam)、氯甲酯横草胺(cloransulam-methyl)、CM、4-CPB、CPMF、4_CPP、CPPCΛ 甲酯、节草隆(cumyluron)、氨腈(cyanamide)、氰乙酰肼(cyanazine)、草灭特(cycloate)、环丙啼横隆(cyclosulfamuron)、噻草酮(cycloxydim)、氰氟草酸(cyhalofop)、氰氟草酯(cyhalofop-butyl)、2，4_D、3，4-DA、杀草隆(daimuro)、茅草枯(dalapon)、棉隆(dazomet)、2，4_DB、3，4_DB、2，4-DEB、甜菜安(desmedipham)、麦草畏、敌草臆(dichlobenil)、邻二氯苯(ortho-dichlorobenzen)、对二氯苯(para-dichlorobenzene)、滴丙酸(dichlorprop)、滴丙酸-P (dichlorprop-P)、禾草灵(diclofop)、甲基禾草灵(diclofop-methyl)、双氯磺草胺(diclosulam)、燕麦枯(difenzoquat)、野燕枯甲基硫酸酯(difenzoquat metilsulfate)、吡氟草胺(dif Iufenican)、二氟吡隆(dif Iufenzopyr)、恶唑隆(dimefuron)、哌草丹(dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、异戊乙净( dimethametryn)、二甲吩草胺(dimethenamid)、二甲吩草胺-P(dimethenamid-P)、噻节因(dimethipin)、二甲基砷酸(dimethylarsinic acid)、敌乐安(dinitramine)、特乐酌.(dinoterb)、草乃敌(diphenamid)、杀草快(diquat)、二溴敌草快(diquat dibromide)、氟硫草定(dithiopyr)、敌草隆(diuron)、DN0C、3，4_DP、DSMA、EBEP、草多索(endothal)、EPTC、禾草畏(esprocarb)、丁氟消草(ethalfIuralin)、胺苯横隆(ethametsulfuron)、甲基胺苯横隆(ethametsulfuron-methyl)、乙呋草黄(ethofumesate)、氯氟草醚(ethoxyfen)、乙氧啼横隆(ethoxysulfuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、精恶唑禾草灵(fenoxaprop-P)、乙基精恶唑禾草灵(fenoxaprop-P-ethyl)、四唑草胺(fentrazamide)、硫酸亚铁、麦草伏甲酯(f Iamprop-M)、卩定啼磺隆(f Iazasulfuron)、双氟磺草胺(f 1rasulam)、吡氟禾草灵(fluazifop)、丁基吡氟禾草灵(fluazifop-butyl)、精吡氟禾草灵(fluazifop-P)、丁基精批氟禾草灵(fluazifop-P-butyl)、氟酮磺隆(fIucarbazone)、氟酮磺隆钠(flucarbazone-sodium)、氟批横隆(flucetosulfuron)、氯乙氟灵(fIuchloralin)、氟噻草胺(flufenacet)、氟_嗪草酮(flufenpyr)、氟_嗪草酯(f lufenpyr-ethyl)、唑啼磺草胺(flumetsulam)、氟烯草酸(f lumiclorac)、氟烯草酸戊酯、丙炔氟草胺、伏草隆(f Iuometuron)、乙羧氟草醚、乙羧氟草醚乙酯、氟丙酸(f Iupropanate)、吡羧啼磺隆(f Iupyrsulfuron)、氟唳啼磺隆钠(f lupyrsulfuron-methyΙ-sodium)、抑草丁(fIurenol)、氟卩定酮(fIuridone)、氟咯草酮(fIuorochloridone)、氟草烟(fIuoroxypyr)、呋草酮(fIurtamone)、氟螨嗪(fluthiacet)、氟噻甲草酯、氟磺胺草醚(fomesafen)、甲酰胺磺隆(foramsulfuron)、调节膦(fosamine)、草铵膦(glufosinate)、草铵膦铵盐(glufosinate-ammonium)、草甘膦、氯吡啼磺隆(halosulfuron)、甲基氯吡啼磺隆(halosulfuron-methyl)、氟批甲禾灵(haloxyfop)、氟批甲禾灵-P (haloxyfop-P)、HC-252、环嗪酮(hexazinone)、咪草酸(imazamethabenz)、咪草酸甲酯(imazamethabenz-methyl)、甲氧咪草烟(imazamox)、甲咪唑烟酸(imazapic)、灭草烟(imazapyr)、咪唑喹啉酸(imazaquin)、咪草烟(imazethapyr)、唑础啼横隆(imazosulfuron)、節草酮(indanofan)、碘甲焼、碘甲磺隆、碘甲磺隆钠盐(iodosulfuron-methyΙ-sodium)、碘苯臆(ioxynil)、异丙隆(isoproturon)、异恶隆(isouron)、异恶酰草胺(isoxaben)、异噁氯草酮(isoxachlortole)、异噁唑草酮(isoxafIutole)、特胺灵(karbutilate)、乳氟禾草灵(Iactofen)、环草唳(Ienacil)^lJS隆(Iinuron)、MAA、MAMA、MCPAΛ MCPA-硫代乙酯、MCPB、氯苯氧丙酸(mecoprop)、氯苯氧丙酸-P (mecoprop-P)、苯噻酰草胺(mefenacet)、氟草磺(mef Iuidide)、甲磺胺磺隆(mesosulfuron)、甲基甲横胺横隆(mesosulfuron-methyl)、硝横草酮(mesotrione)、威百亩(metam)、恶唑酸草胺(metamifop)、苯嗪草酮(metamitron)、吡唑草胺(metazachlor)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、甲基砷酸、甲基杀草隆(methyldymron)、异硫氰酸甲酯、甲氧苯草隆(metobenzuron)、异丙甲草胺(metolachlor)、精异丙甲草胺(S-metolachlor)、横草唑胺(metosulam)、甲氧隆(metoxuron)、嗪草酮(metribuzin)、甲横隆(metsulfuron)、甲基甲横隆(metsulfuron-methyl)、MK_66、草达灭(molinate)、绿谷隆(monoIinuron) Λ MSMAΛ 萘丙胺(naproanilide)、敌草胺(napropamide)、抑草生(naptalam)、草不隆(neburon)、烟啼磺隆(nicosulfuron)、壬酸、达草灭、油酸(脂肪酸)、坪草丹(orbencarb)、甲啼卩定横隆(orthosulfamuron)、黄草消(oryzalin)、丙块恶草酮、恶草灵、环氧啼磺隆(oxasulfuron)、恶嗪草酮(oxaziclomefone)、乙氧氟草醚、百草枯(paraquat)、百草枯二氯化物(paraquat dichloride)、克草猛(pebulate)、二甲戊乐灵(pendimethalin)、五氟磺草胺(penoxsulam)、五氯酷(pentachlorophenol)、甲氯酰草胺(pentanochlor)、环戊恶草酮、烯草胺(pethoxamid)、石油油料(petrolium oils)、苯敌草(phenmedipham)、乙基甜菜宁(phenmedipham-ethyl)、毒養定(picloram)、氣吡酸草胺(picolinafen)、唑啉草酯(pinoxaden)、派草磷(piperophos)、亚砷酸钾、叠氮化钾、丙草胺(pretilachl or)、氟啼横隆(primisulfuron)、甲基氟啼横隆(primisulfuron-methyl)、氨基丙乐灵(prodiamine)、氟唑草胺、环苯草酮(profoxydim)、扑灭通(prometon)、扑草净(prometryn)、毒草安(propachlor)、敌草索(propanil)、喔草酯(propaquizafop)、扑灭津(propazine)、苯胺灵(propham)、异丙草胺(propisochlor)、丙苯磺隆(propoxycarbazone)、丙苯横隆钠(propoxycarbazone-sodium)、块苯酸草胺(propyzamide)、节草丹(prosulfocarb)、氟横隆(prosulfuron)、双唑草臆(pyraclonil)、哌芬草(pyraflufen)、吡草醚(pyraflufen-ethyl)、吡唑特(pyrazolynate)、吡啼横隆(pyrazosulfuron)、乙基批啼横隆(pyrazosulfuron-ethyl)、节草唑(pyrazoxyfen)、啼唳月亏草醚(pyribenzoxim)、稗草丹(pyributicarb)、草醇(pyridafol)、草特(pyridate)、环酯草醚(pyriftalid)、啼草醚(pyriminobac)、甲基啼草醚(pyriminobac-methyl)、批啼沙泛(pyrimisulfan)、啼硫苯甲酸(pyrithiobac)、啼硫苯甲酸钠(pyrithiobac-sodium)、二氯喹啉酸(quinclorac)、氯甲喹啉酸(quinmerac)、灭藻醌(quinoclamine)、喹禾灵(quizalofop)、喹禾灵-P(quizalofop-P)、讽嘧横隆(rimsulfuron)、稀禾定(sethoxydim)、环草隆(siduron)、西玛津(simazine)、西草净(simetryn)、SMA、亚砷酸钠、叠氮化钠、氯酸钠、石黄草酮(sulcotrione)、甲磺草胺(sulfentrazone)、甲嘧横隆(suIfometuron)、甲基甲嘧横隆(sulfometuron-methyl)、草硫膦(sulfosate)、磺酰磺隆(sulfosulfuron)、硫酸、煤焦油、2, 3,6-TBA、TCA、三氯醋酸钠(TCA-sodium)、特丁隆(tebuthiuron)、吡喃草酮(tepraloxydim)、特草定(terbacil)、特丁通(terbumeton)、特丁津(terbuthyIazine)、特丁净(terbutryn)、噻吩草胺(thenylchlor)、噻草唆(thiazopyr)、噻吩石黄隆(thifensulfuron)、甲基噻吩横隆(thifensulfuron-methyl)、禾草丹(thiobencarb)、仲草丹(tiocarbazil)、苯批唑草酮(topramezone)、三甲苯草酮(tralkoxydim)、野麦畏(tr1-allate)、醚苯横隆(triasulfuron)、三嗪氟草胺(triaziflam)、苯横隆(tribenuron)、甲基苯横隆(tribenuron-methyl)、杀草畏(tricamba)、绿草定(triclopyr)、草达津(trietazine)、三氟唳磺隆(trif 1xysulfuron)、三氟唳磺隆钠(trif loxysulfuron-sodium)、氟乐灵(trifluralin)、氟胺横隆(triflusulfuron)、甲基氟胺横隆(triflusulfuron-methyl)、三轻嗪(trihydroxytriazine)、三氟甲磺隆(tritosulfuron) > [3-[2-氯-4-氟-5-(-甲基_6_ 二氣甲基-2,4- 二氧代-,2,3,4-四氧嘧唳-3-基)苯氧基]-2-吡唳氧基]乙酸乙酯(CAS 1^353292-3-6)、4-[(4，5-二氢-3-甲氧基-4-甲基-5-氧代)-!1-，2，4-三唑-基羰基-氨磺酰基]-5-甲基噻吩-3-甲酸(BAY636)、BAY747 (CAS RN33504-84-2)、苯吡唑草酮(CAS RN2063-68-8)、4-羟基-3-[[2-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]_6_ (三氟甲基)-3-吡啶基]羰基]-双环[3.2.]辛-3-烯-2-酮(CAS RN35200-68-5)及 4-羟基-3- [ [2- (3-甲氧基丙基)_6_ ( 二氟甲基)-3_吡唳基]擬基]-双环[3.2.]羊-3-烯-2-酮。此外,还包括未指定作用模式的除草化合物，如以下专利中所描述:CN101279950A、CN101279951A、DE10000600A1、DElOl16399A1、DE102004054666A1、DE102005014638A1、DE102005014906A1、DE102007012168A1、DE102010042866A1、DE10204951A1、DE10234875A1、DE10234876A1、DE10256353A1、DE10256354A1、DE10256367AU EP1157991A2、EP1238586A1、EP2147919A1、EP2160098A2、 JP03968012B2、 JP2001253874A、 JP2002080454A, JP2002138075A、JP2002145707A、 JP2002220389A、 JP2003064059A、 JP2003096059A、 JP2004051628A、JP2004107228A、 J P2005008583A, JP2005239675A、 JP2005314407A、 JP2006232824A、JP2006282552A、 JP2007153847A、 JP2007161701A、 JP2007182404A、 JP2008074840A、JP2008074841A、 JP2008133207A、 JP2008133218A、 JP2008169121A、 JP2009067739A、JP2009114128A、JP2009126792A、JP2009137851A、US20060111241A1、US2009003631IAUUS20090054240A1, US20090215628A1、US2010009956IAU US20100 152443AKUS20110105329AUUS20110201501AUW02001055066A2,ff02001056975AUff02001056979AUW02001090071A2, W02001090080AU W02002002540AU W02002028182AU W02002040473AUW02002044173A2, W02003000679A2, W02003006422AU W02003013247AU W02003016308AUW02003020704AU W02003022051AU W02003022831AU W02003022843AU W02003029243A2、W02003037085AU W02003037878AU W02003045878A2, W02003050087A2, W02003051823AUW02003051824AU W02003051846A2、W02003076409AU W02003087067AU W02003090539AUW02003091217AU W02003093269A2, W02003104206A2, W02004002947AU W02004002981A2,W02004011429AU W02004029060AU W02004035545A2, W02004035563AU W02004035564AUW02004037787AU W02004067518AU W02004067527AU W02004077950AU W02005000824AUW02005007627AU W02005040152AU W02005047233AU W02005047281AU W02005061443A2、W02005061464AU W02005068434AU W02005070889AU W02005089551AU W02005095335AUW02006006569AU W02006024820AU W02006029828AU W02006029829AU W02006037945AUW02006050803AU W02006090792AU W02006123088A2, W02006125687AU W02006125688AUW02007003294AU W02007026834AU W02007071900AU W02007077201AU W02007077247AUW02007096576AU W02007119434AU W02007134984AU W02008009908AU W02008029084AUW02008059948AU W02008071918AU W02008074991AU W02008084073AU W02008100426A2、W02008102908AU W02008152072A2, W02008152073A2, W02009000757AU W02009005297A2,W02009035150A2, W02009063180AU W02009068170A2, W02009068171A2, W02009086041AUW02009090401A2, W02009090402A2, W02009115788AU W02009116558AU W02009152995AUW02009158258AU W02010012649AU W02010012649AU W02010026989AU W02010034153AUW02010049270AU W02010049369A1、W02010049405AU W02010049414AU W02010063422AUW02010069802AU W02010078906A2、W02010078912A1、W02010104217AU W02010108611AUW02010112826A3、W02010116122A3、W02010119906AU W02010130970A1、W02011003776A2、W02011035874A1、W02011065451A1，全部以引用的方式并入本文中。
[0028]触发多核苷酸和寡核苷酸分子组合物呈组合物形式是有用的，所述组合物诸如包含在相同溶液中或在还提供转移剂的单独施用的液体中的单独的或与其它组分(例如一种或多种除草剂分子)一起组合的低浓度的这些多核苷酸分子的液体。尽管可用于这些方法中的多核苷酸分子的浓度和剂量不存在上限，但对于功效来说，一般需要较低的有效浓度和剂量。这些浓度可以根据喷药量或施用到植物叶子或其它植物部分表面(诸如花瓣、茎、块茎、果实、花粉囊、花粉或种子)的处理进行调整。在一个实施方案中，使用25聚体寡核苷酸分子对草本植物进行的有用处理是每株植物约I纳摩尔(nmol)寡核苷酸分子，例如每株植物约0.05到Inmol。有关草本植物的其它实施方案包括每株植物约0.05到约IOOnmol,或约0.1到约20nmol,或约Inmol到约IOnmol多核苷酸的有用范围。极大的植物、树或藤本植物可能相应地需要较大量的多核苷酸。当使用能加工成多个寡核苷酸的长dsRNA分子时，可以使用较低的浓度。为了说明实施方案，当应用于寡核苷酸分子时，任意地使用因子IX来表不每株植物0.8nmol多核苷酸分子的处理；10X表不每株植物8nmol多核苷酸分子；并且IOOX表不每株植物80nmol多核苷酸分子。
[0029]多核苷酸组合物呈组合物形式是有用的，所述组合物诸如包含在相同液体中或在提供转移剂的单独施用的液体中的单独的或与其它组分一起组合的多核苷酸分子的液体。如本文所使用，转移剂是当与多核苷酸组合于局部施用于靶植物表面的组合物中时使该多核苷酸能够进入植物细胞的一种试剂。在某些实施方案中，转移剂是调节植物组织的表面(例如叶、茎、根、花或果实)以使多核苷酸分子能渗透入植物细胞中的一种试剂。通过向植物组织预先或同时施用多核苷酸-转移剂可以有助于将多核苷酸转移到植物细胞中。在一些实施方案中，该转移剂是在施用了多核苷酸组合物之后施用。多核苷酸转移剂为多核苷酸穿过角质层蜡质屏障、气孔和/或细胞壁或膜屏障进入植物细胞中提供了一条途径。有助于多核苷酸转移到植物细胞中的适合转移剂包括增加植物外部的渗透性或增加植物细胞对寡核苷酸或多核苷酸的渗透性的试剂。这些有助于组合物转移到植物细胞中的试剂包括化学试剂，或物理试剂，或其组合。用于调节或转移的化学试剂包括(a)表面活性剂、(b)有机溶剂或含水溶液或有机溶剂的含水混合物、(C)氧化剂、(d)酸、(e)碱、(f)油、(g)酶，或其组合。该方法的实施方案可以任选地包括温育步骤、中和步骤(例如，中和酸、碱或氧化剂，或者使酶失活)、冲洗步骤或其组合。用于调节植物对多核苷酸的渗透的试剂或处理的实施方案包括乳液、反相乳液、脂质体及其它类胶束组合物。用于调节植物对多核苷酸的渗透的试剂或处理的实施方案包括平衡离子或已知与核酸分子结合的其它分子，例如无机铵离子、烷基铵离子、锂离子、多胺(诸如精胺、亚精胺或腐胺)及其它阳离子。可用于调节植物对多核苷酸的渗透的有机溶剂包括DMSO、DMF、吡啶、N-吡咯烷、六甲基磷酰胺、乙腈、二噁烷、聚丙二醇，与水可混溶或将磷酸核苷酸溶解于非水系统(诸如用于合成反应中)中的其它溶剂。可以使用含或不含表面活性剂或乳化剂的天然来源或合成的油，例如可以使用植物来源的油、作物油(诸如第9版《除草剂佐剂纲要》(9th Compendium of HerbicideAdjuvants)中所列的那些，在国际互联网(网络)的herbicide, adjuvants, com上公开可用)，例如石蜡油、多元醇脂肪酸酯，或具有用酰胺或多胺(诸如聚乙烯亚胺或N-吡咯烷)修饰的短链分子的油。转移剂包括但不限于，有机硅酮制剂。
[0030]通过将该组合物直接施用(诸如通过喷雾)到正在生长的植物的表面，来对需要植物控制的农田进行处理。举例来说，应用该方法，通过向具有作物的田地喷洒该组合物来控制该田地中的杂草。该组合物可以作为桶混合剂、连续的组分处理(一般为含有多核苷酸的组合物随后除草剂)或来自单独容器的该组合物的一种或多种组分的同时处理或混合来提供。田地的处理可以根据需要进行以提供杂草控制，并且该组合物各组分可以被调整成通过利用能够选择性靶向有待控制的特定物种或植物科的特定多核苷酸或多核苷酸组合物来靶向特定杂草种类或杂草科。该组合物可以根据施用到田地的时间，例如在种植前、种植时、种植后、收获后，以有效使用量施用。HPro抑制剂除草剂可以向田地按I到2000g ai/ha(每公顷的活 性成分量)或更高量施用。取决于田地中的杂草范围所需触发分子的数量，该组合物的多核苷酸可以按每英亩I到30克的比率施用。
[0031]需要杂草控制的作物包括但不限于，i)玉米、大豆、棉花、油菜、甜菜、苜蓿、甘蔗、稻米及小麦；ii)蔬菜类植物，包括但不限于，马铃薯、甜椒、辣椒、瓜、西瓜、黄瓜、茄子、花椰菜、椰菜、莴苣、菠菜、洋葱、豌豆、胡萝卜、甜玉米、大白菜、韭葱、茴香、南瓜、倭瓜或葫芦、萝卜、球芽甘蓝、粘果酸浆、青刀豆、干豆或秋葵；iii)烹饪用植物，包括但不限于，罗勒、欧芹、咖啡树或茶树；或iv)水果类植物，包括但不限于，苹果树、梨树、樱桃树、桃树、李树、杏树、香蕉、车前草、鲜食葡萄、酿酒葡萄、柑橘、鳄梨树、芒果或浆果；v)生长用于观赏或商业用途的树，包括但不限于，果树或坚果树；或vi)观赏性植物(例如观赏性开花植物或灌木或草坪草)。本文提供的方法和组合物还可以施用于通过插条、克隆或嫁接方法产生的植物(即，不是由种子生长的植物)，包括果树和植物，包括但不限于，柑橘、苹果树、鳄梨树、番茄、茄子、黄瓜、瓜类、西瓜和葡萄，以及各种观赏性植物。
[0032]杀虫混合物
[0033]这些多核苷酸组合物还可以作为与各种农业化学品和/或杀昆虫剂、杀螨剂以及杀真菌剂、杀虫剂和生物杀虫剂的混合物来使用。实例包括但不限于，甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、高灭磷(acephate)、异噁唑磷(isoxathion)、异丙胺磷(isofenphos)、乙硫磷（ethion)、乙卩密硫磷（etrimfos)、砜吸磷（oxydemeton-methyl)、 异亚砜磷(oxydeprofos)、唾硫磷(quinalphos)、毒死蜱(chlorpyrifos)、甲基毒死 蜱(chlorpyrifos-methyl)> 毒虫畏（chlorfenvinphos)、杀螟腈（cyanophos)、蔬 果磷（dioxabenzofos)、二 氯松（dichlorvos)、二 硫松（disulfoton)、甲基毒虫畏 (dimethylvinphos)、乐果(dimethoate)、硫丙磷(sulprofos)、二 嗪磷(diazinon)、甲 基乙拌磷（thiometon)、杀虫烕（tetrachlorvinphos)、双硫磷（temephos)、丁基啼卩定磷 (tebupirimfos)、特丁硫憐（terbufos)、二溴磷（naled)、姆灭多（vamidothion)、卩比唑硫磷 (pyraclofos)、Bi嗪硫磷（pyridafenthion)、甲基啼卩定磷（pirimiphos-methyl)、杀螟硫磷 (fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、稻丰散(phenthoate)、卩比氟硫磷（fIupyrazophos)、 丙硫磷（prothiofos)、丙虫磷（propaphos)、丙溴磷（profenofos)、辛硫磷（phoxime)、伏 杀硫磷（phosalone)、亚胺硫磷（phosmet)、安果（formothion)、甲拌磷（phorate)、马拉硫 磷（malathion)、灭虫牙磷（mecarbam)、线虫灵（mesulfenfos)、甲胺磷（methamidophos)、 杀扑磷（methidathion)、对硫磷（parathion)、甲基对硫磷（methyl parathion)、久 效磷(monocrotophos)、敌百虫(trichlorphon)、EPN、异唑磷(isazophos)、衣胺磷 (isamidofos)、硫线磷（cadusafos)、苯基胺磷（diamidaphos)、除线磷（dichlofenthion)、 虫线磷（thionazin)、克线磷（fenamiphos)、噻唑硫磷（fosthiazate)、丁 硫环磷 (fosthietan)、磷虫烕(phosphocarb)、DSP、灭线磷（ethoprophos)、棉铃威（alanycarb)、 涕灭威（aldicarb)、异丙烕（isoprocarb)、乙硫苯威（ethiofencarb)、西维因（carbaryl)、 丁呋喃（carbosulfan)、灭杀烕（xylylcarb)、硫双威（thiodicarb)、抗虫牙威（pirimicarb)、 仲丁威（fenobucarb)、咲线烕（furathiocarb)、残杀威（propoxur)、恶虫威（bendiocarb)、 丙硫克百威（benfuracarb)、灭多威（methomyl)、速灭威（metolcarb)、XMC>克百威 (carbofuran)、涕灭砜威（aldoxycarb)、杀线威（oxamyl)、氟丙菊酯（acrinathrin)、丙 稀菊酯（allethrin)、氰戊菊酯（esfenvalerate)、烯炔菊酯（empenthrin)、拟除虫菊酯 (cycloprothrin)、三氟氯氰菊酯（cyhalothrin)、Y -氯氟氰菊酯（gamma-cyhalothrin)、 入-氯氟氰菊酯（lambda-cyhalothrin)、氟氯氰菊酯（cyf luthrin)、P -氟氯氰菊酯 (beta—cyfIuthrin)、氣氧菊酉旨（cypermethrin)、Q — 氣氧菊酉旨（alpha—cypermethrin)、 氯氰菊酯（zeta-cypermethrin)、氟娃菊酷（silafluofen)、胺菊酯（tetramethrin)、 七氟菊酯(tefluthrin)、溴氰菊酯(deltamethrin)、四溴菊酯(tralomethrin)、联 苯菊酯（bifenthrin)、苯醚菊（酯phenothrin)、氰戊菊酯（fenvalerate)、甲氰菊 酯（fenpropathrin)、炔呋菊酯（furamethrin)、炔丙菊酯（pralIethrin)、氟氰戊菊 酯（flucythrinate)、氟胺氰菊酯（fluvalinate)、溴氟菊酯（flubrocythrinate)、 氯菊酉旨(permethrin)、节呋菊酯（resmethrin)、醚菊酯（ethofe叩rox)、杀螺丹 (cartap)、虫噻焼(thiocyclam)、杀虫石黄(bensultap)、P比虫清（acetamiprid)、P比虫琳 (imidacloprid)、噻虫胺（clothianidin)、呋虫胺(dinotefuran)、噻虫琳(thiacloprid)、 噻虫嗉（thiamethoxam)、烯唆虫胺（nitenpyram)、氟唆脲(chlorfIuazuron)> 除 虫脲（diflubenzuron)、氟苯脲(tefIubenzuron) > 杀铃脲(trifIumuron) > 双苯氟 脲（novaluron)、多氟脲（novifIumuron)、双三氟虫脲（bistrifIuoron)、唆蜱脲 (fluazuron)、氟环脲（flucycloxuron)、氟虫脲（fIufenoxuron)、氟铃脲（hexafIumuron)、 氟丙氧脲（Iufenuron)、环虫酰胼（chromafenozide)、抑虫胼(tebufenozide)、氯虫酰
【权利要求】
1.一种植物控制方法，包括:用包含多核苷酸和转移剂的组合物处理植物，其中所述多核苷酸与HPro基因序列或其片段，或与所述HPro基因序列或其片段的RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述HPro基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此相对于未用所述组合物处理的植物，所述植物生长或发育或繁殖能力有所降低，或所述植物对HPro抑制剂除草剂更敏感。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述转移剂是有机硅酮表面活性剂组合物或其中所含的化合物。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸片段为18个连续核苷酸、19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID ΝΟ:1_32的HPTO基因序列至少85%同一。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述多核苷酸片段选自有义或反义ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 杂交体。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述植物选自:长芒苋、西部苋、萨恩博格氏苋、匍匐苋、绿穗苋、皱果苋、三裂叶豚草、扫帚草、苘麻、小蓬草、马唐、白苞猩猩草、多花黑麦草及苍耳。
6.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物另外包含所述HPro抑制剂除草剂并且向植物外部施用所述组合物。
7.如权利要求6所述的方法，其中所述组合物另外包含一种或多种不同于所述HPro抑制剂除草剂的除草剂。
8.如权利要求3所述的方法，其中所述组合物包含所述多核苷酸片段中两个或更多个的任何组合并且向植物外部施用所述组合物。
9.一种包含多核苷酸和转移剂的组合物，其中所述多核苷酸与HPro基因序列或其片段，或与所述HPro基因序列或其片段的RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述HPro基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，并且由此相对于未用所述组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因所述含多核苷酸的组合物而对HPro抑制剂除草剂更敏感。
10.如权利要求9所述的组合物，其中所述转移剂是有机硅酮组合物。
11.如权利要求9所述的组合物，其中所述多核苷酸片段为18个连续核苷酸、19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一。
12.如权利要求9所述的组合物，其中所述多核苷酸选自SEQID NO:33-596。
13.如权利要求9所述的组合物，其中所述多核苷酸选自SEQID N0:597-1082。
14.如权利要求9所述的组合物，另外包含HPH)抑制剂除草剂。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述HPro抑制剂分子选自:硝磺草酮、特糠酯酮、环磺酮、磺草酮、异噁氯草酮、磺酰草吡唑、异噁唑草酮、吡草酮、吡唑特、苯吡唑草酮及苄草唑。
16.如权利要求14所述的组合物，另外包含共除草剂。
17.一种减少植物中HPro基因的表达的方法，包括:向植物外部施用包含多核苷酸和转移剂的组合物，其中所述多核苷酸与HPro基因序列或其片段，或与所述HPro基因序列或其片段的RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述ΗΡΗ)基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此所述HPH)基因的所述表达相对于未施用所述组合物的植物有所减少。
18.如权利要求17所述的方法，其中所述转移剂是有机硅酮化合物。
19.如权利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸片段为19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85% 同一。
20.如权利要求17所述的方法，其中所述多核苷酸分子选自有义或反义ssDNA或ssRNA、dsRNA 或 dsDNA，或 dsDNA/RNA 杂交体。
21.—种微生物表达盒，包含长度为18个连续核苷酸、19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸并且与选自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一的多核苷酸片段。
22.—种制备多核苷酸的方法，包括a)将如权利要求21所述的微生物表达盒转化到微生物中；b)使所述微生物生长；c)从所述微生物收获多核苷酸,其中所述多核苷酸为18个连续核苷酸、19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸长度并且与选自SEQ ID NO:1-32的HPPD基因序列至少85%同一。
23.一种鉴别当外部处理植物时可用于调节HPH)基因表达的多核苷酸的方法，包括:a)提供多种多核苷酸，所述多核苷酸包含与长度为18个连续核苷酸、19个连续核苷酸、20个连续核苷酸或至少21个连续核苷酸并且与选自SEQ ID NO:1_32的HPTO基因序列至少85%同一的多核苷酸片段基本上同一或基本上互补的区域；b)用所述多核苷酸中的一种或多种和转移剂外部处理所述植物；c)针对ΗΡΗ)基因表达的调节对所述植物或提取物进行分析，并且由此相对于未用所述组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因所述含多核苷酸的组合物而对HPH)抑制剂除草剂更敏感。
24.如权利要求23所述的方法，其中所述植物选自:长芒苋、西部苋、萨恩博格氏苋、匍匐苋、绿穗苋、皱果苋、三裂叶豚草、扫帚草、苘麻、小蓬草、马唐、白苞猩猩草、多花黑麦草及苍耳。
25.如权利要求23所述的方法，其中所述HPH)基因表达相对于未用所述多核苷酸片段和转移剂处理的植物有所减少。
26.如权利要求23所述的方法，其中所述转移剂是有机硅酮化合物。
27.—种包含多核苷酸与HPH)抑制剂和共除草剂的混合物的农用化学组合物，其中所述多核苷酸与一部分HPro基因序列，或与所述HPro基因序列的一部分RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述HPro基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，并且由此相对于未用所述组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因所述含多核苷酸的组合物而对HPro抑制剂除草剂更敏感。
28.如权利要求27所述的农用化学组合物，其中所述共除草剂选自:酰胺除草剂类、含砷除草剂类、苯并噻唑除草剂类、苯甲酰基环己二酮除草剂类、烷基磺酸苯并呋喃基酯除草剂类、环己烯肟除草剂类、环丙基异噁唑除草剂类、二甲酰亚胺除草剂类、二硝基苯胺除草剂类、二硝基苯酚除草剂类、二苯基醚除草剂类、二硫代氨基甲酸酯除草剂类、甘氨酸除草剂类、卤代脂肪烃除草剂类、咪唑啉酮除草剂类、无机除草剂类、腈除草剂类、有机磷除草剂类、噁二唑酮除草剂类、噁唑除草剂类、苯氧基除草剂类、苯二胺除草剂类、吡唑除草剂类、哒嗪除草剂类、哒嗪酮除草剂类、吡啶除草剂类、嘧啶二胺除草剂类、嘧啶氧基苯甲胺除草剂类、季铵除草剂类、硫代氨基甲酸酯除草剂类、硫代碳酸酯除草剂类、硫脲除草剂类、三嗪除草剂类、三嗪酮除草剂类、三唑除草剂类、三唑酮除草剂类、三唑并嘧啶除草剂类、尿嘧啶除草剂类及脲除草剂类。
29.—种包含多核苷酸与HPro抑制剂除草剂和杀虫剂的混合物的农用化学组合物，其中所述多核苷酸与一部分HPro基因序列，或与所述HPro基因序列的一部分RNA转录物基本上同一或基本上互补，其中所述HPro基因序列选自SEQ ID NO:1-32或其多核苷酸片段，由此具有需要杂草和虫害控制的作物的田地用所述组合物进行处理，并且由此相对于未用所述组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因所述含多核苷酸的组合物而对HPro抑制剂除草剂更敏感。
30.如权利要求29所述的农用化学组合物，其中所述杀虫剂选自:杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、杀螨剂、生长调控剂、化学绝育剂、化学信息素、驱避剂、引诱剂、信息素、取食刺激剂及生物杀虫剂。
31.一种除草剂组合物，包含HPro抑制剂除草剂以及多核苷酸和转移剂，其中所述多核苷酸选自SEQ ID NO:1083-1092或者其补体或多核苷酸片段，并且由此相对于未用所述组合物处理的植物，用所述组合物处理的植物的生长或发育或繁殖能力得到调控、抑制或延迟，或所述植物因 所述含多核苷酸的组合物而对HPH)抑制剂除草剂更敏感。
【文档编号】C12N15/82GK103930549SQ201280054819
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2012年9月12日 优先权日:2011年9月13日
【发明者】D·阿德, J·J·芬内斯, M·卡普尔, 李兆隆, J·D·马苏西, R·H·沙, N·陶, J·C·泰勒, 王大伏, 杨和平 申请人:孟山都技术公司