一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，该方法包括以下步骤：⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝脱水后烘至恒重并粉碎，得到西兰花干粉；⑵将新收获的芥籽粉碎后真空抽滤除杂，得到粗酶液；⑶向所述西兰花干粉中加入所述粗酶液，搅拌均匀，经酶解、超声波振荡提取，得到提取液，该提取液过筛除渣，得到滤液；滤液经真空抽滤即得萝卜硫素粗提液；⑷将萝卜硫素粗提液真空浓缩后得到萝卜硫素粗提水溶液；⑸向萝卜硫素粗提水溶液中加乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相真空浓缩至膏状，然后洗脱再真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物；⑹膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为1%~15%的萝卜硫素粗品。本发明简单、高效，成本低。
【专利说明】—种从西兰花中提取萝卜硫素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种提取纯化天然产物中有效成分的方法，尤其涉及一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法。
【背景技术】
[0002]长期以来，人们一直把蔬菜视为人体维生素和微量元素的重要来源。近年来，国内外学者研究发现十字花科蔬菜中存在的一些化合物具有抗癌活性，尤其是富含胡萝卜素的蔬菜，如:胡萝卜、西兰花、椰菜和菠菜等。已有实验证明西兰花ibroccolf)含有丰富的抗癌物质萝卜硫素，能够减低对老鼠胸部肿瘤的形成，阻止致癌物质的活动，预防白血病的发生。
[0003]萝卜硫素是葡萄糖莱菔子苷(它是芥子油苷，即硫代葡萄糖苷的一种)经黑芥子硫酸苷酶酶解或酸水解产生的异硫氰酸盐衍生物，相对分子质量为177.29，分子式C6H11S2NO15萝卜硫素是活力 最强的一类异硫氰酸盐，是迄今为止蔬菜中发现的最强的抗癌成分，因而萝卜硫素具有很高的研究价值和广阔的市场开发前景。而目前萝卜硫素的主要来源是从西兰花种子中提取，每公斤 种子4000多元，原料成本过高，不利于产业化生产。萝卜硫素的人工合成已有研究，但目前还不能大量生产，其次合成的萝卜硫素为消旋体，功能减弱，并具有一定的毒副作用。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、高效的从西兰花中提取萝卜硫素的方法。
[0005]为解决上述问题，本发明所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，包括以下步骤:
⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝于75-85°C下脱水0.5-1.5小时，然后在55飞5°C下烘至恒重，得到西兰花干物质；所述西兰花干物质粉碎至40飞0目后得到西兰花干粉；
⑵将新收获的芥籽粉碎至4(-60目，得到芥籽粉；所述芥籽粉中加入蒸馏水，经超声波振荡l(T30min后真空抽滤除杂，得到粗酶液；
⑶向所述西兰花干粉 中加入所述粗 酶液，搅拌均匀，35°C酶解0.5-1.5h，再加入质量浓度为95%的乙醇，经超声波振荡提取l0-60min，然后静置l0-60min，(期间每隔5分钟搅动I次)，得到提取液，该提取液过30目筛，除去提取物残渣，得到滤液；所述滤液经真空抽滤除去杂质后，即得萝卜硫素粗提液；
⑷将所述萝卜硫素粗提液先于45-55°C真空浓缩，除去大部分乙醇，再于60-70°C真空浓缩，除尽乙醇，得到萝卜硫素粗提水溶液；
(5)向所述萝卜硫素粗提水溶液中 加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相于40-60°C真空浓缩至膏状，然后用甲醇溶解洗脱，再于30-50°C真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物；(6)所述膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为1°/15%的萝卜硫素粗品。
[0006]所述步骤⑵中芥籽粉与蒸懼水的比例为I g:40 mL-60 mL。
[0007]所述步骤⑵和所述步骤⑶中的超声波振荡条件均是指功率为50(T800W，温度为25 -35。。。
[0008]所述步骤⑶中的西兰花干粉与粗酶液的比例为I g:5 mL-15 mL。
[0009]所述步骤⑷和所述步骤(5)中真空浓缩的条件均是指真空度为-0.06MPa-—0.08MPa。
[0010]所述步骤(5)中萝卜硫素粗提水溶液与乙酸乙酯的比例为I mL:1 mL-3 mL。
[0011]所述步骤(6)中的冷冻干燥条件是指先对材料预冻，待温度达到-35--45°C时，用真空泵抽真空，待压力达到25-35 Pa，开启加热；从_351:至(TC，每5°C为一个阶段，每阶段控温加热f 2h，最后在5°C控温加热2-4h即可。
[0012]本发明与现有技术相比具有以下优点:
1、本发明利用乙醇进行有机法结合超声波提取，乙酸乙酯萃取，因此，不但工艺流程短，技术条件要求简单，而且污染源少，提取与萃取剂绝大部分回收，很少排出。
[0013]2、本发明通过添加外源芥籽酶，促进细胞内相关酶促反应的发生，提高萝卜硫素含量，提高生产效率。
[0014]3、本发明由于原料充欲和便宜，每公斤西兰花只有几元，脱水干品也只有几十元，且该原料生产基地面积大，产量高，因此，成本低。
【具体实施方式】
[0015]实施例1 一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，包括以下步骤:
⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝于75°C下脱水1.5小时，然后在55°C下烘至恒重，得到西兰花干物质；西兰花干物质粉碎至40目后得到西兰花干粉。
[0016]⑵将新收获的芥籽粉碎至40目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸馏水，在功率为500W、温度为25°C的条件下经超声波振荡30min后真空抽滤除杂，得到粗酶液。
[0017]其中:芥籽粉与蒸馏水的比例为I g:40 mL。
[0018]⑶向西兰花干粉中加入粗酶液，搅拌均匀，35°C酶解0.5h，再加入质量浓度为95%的乙醇，在功率为500W、温度为25°C的条件下经超声波振荡提取60min，然后静置60min，(期间每隔5分钟搅动I次)，得到提取液，该提取液过30目筛，除去提取物残渣，得到滤液；滤液经真空抽滤除去杂质后，即得萝卜硫素粗提液。
[0019]其中:西兰花干粉与粗酶液的比例为I g:5 mL。
[0020]⑷将萝卜硫素粗提液先于45°C真空浓缩，除去大部分乙醇，再于60°C真空浓缩，除尽乙醇，得到萝卜硫素粗提水溶液。
[0021]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.06MPa。
[0022](5)向萝卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相于40°C真空浓缩至膏状，然后用甲醇溶解洗脱，再于30°C真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物。
[0023]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.06MPa。
[0024]萝卜硫素粗提水溶液与乙酸乙酯的比例为I mL:1 mL。[0025](6)膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为1%的萝卜硫素粗品。
[0026]其中:冷冻干燥条件是指先对材料预冻，待温度达到-35?_45°C时，用真空泵抽真空，待压力达到25?35 Pa，开启加热；从_35°C至0°C，每5°C为一个阶段，每阶段控温加热I?2h，最后在5°C控温加热2?4h即可。
[0027]实施例2 —种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，包括以下步骤:
⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝于85°C下脱水0.5小时，然后在65°C下烘至恒重，得到西兰花干物质；西兰花干物质粉碎至60目后得到西兰花干粉。
[0028]⑵将新收获的芥籽粉碎至60目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸馏水，在功率为800W、温度为35°C的条件下经超声波振荡IOmin后真空抽滤除杂，得到粗酶液。
[0029]其中:芥籽粉与蒸馏水的比例为I g:60 mL。
[0030]⑶向西兰花干粉中加入粗酶液，搅拌均匀，35°C酶解1.5h，再加入质量浓度为95%的乙醇，在功率为800W、温度为35°C的条件下经超声波振荡提取lOmin，然后静置lOmin，(期间每隔5分钟搅动I次)，得到提取液，该提取液过30目筛，除去提取物残渣，得到滤液；滤液经真空抽滤除去杂质后，即得萝卜硫素粗提液。
[0031]其中:西兰花干粉与粗酶液的比例为I g:15 mL。
[0032]⑷将萝卜硫素粗提液先于55°C真空浓缩，除去大部分乙醇，再于70°C真空浓缩，除尽乙醇，得到萝卜硫素粗提水溶液。
[0033]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.08MPa。
[0034](5)向萝卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2?3次，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相于60°C真空浓缩至膏状，然后用甲醇溶解洗脱，再于50°C真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物。
[0035]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.0SMPa0
[0036]萝卜硫素粗提水溶液与乙酸乙酯的比例为I mL:3 mL。
[0037](6)膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为15%的萝卜硫素粗品。
[0038]其中:冷冻干燥条件同实施例1。
[0039]实施例3 —种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，包括以下步骤:
⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝于80°C下脱水1.0小时，然后在60°C下烘至恒重，得到西兰花干物质；西兰花干物质粉碎至50目后得到西兰花干粉。
[0040]⑵将新收获的芥籽粉碎至50目，得到芥籽粉；芥籽粉中加入蒸馏水，在功率为650W、温度为30°C的条件下经超声波振荡20min后真空抽滤除杂，得到粗酶液。
[0041]其中:芥籽粉与蒸馏水的比例为I g:50 mL。
[0042]⑶向西兰花干粉中加入粗酶液，搅拌均匀，35°C酶解1.0h，再加入质量浓度为95%的乙醇，在功率为56500W、温度为30°C的条件下经超声波振荡提取35min，然后静置35min，(期间每隔5分钟搅动I次)，得到提取液，该提取液过30目筛，除去提取物残渣，得到滤液；滤液经真空抽滤除去杂质后，即得萝卜硫素粗提液。
[0043]其中:西兰花干粉与粗酶液的比例为I g:10 mL。
[0044]⑷将萝卜硫素粗提液先于50°C真空浓缩，除去大部分乙醇，再于65°C真空浓缩，除尽乙醇，得到萝卜硫素粗提水溶液。
[0045]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.07MPa。[0046](5)向萝卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2?3次，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相于50°C真空浓缩至膏状，然后用甲醇溶解洗脱，再于40°C真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物。
[0047]其中:真空浓缩的条件均是指真空度为-0.07MPa。
[0048]萝卜硫素粗提水溶液与乙酸乙酯的比例为I mL:2 mL。
[0049](6)膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为8%的萝卜硫素粗品。
[0050]其中:冷冻干燥.条件是指同实施例1。
【权利要求】
1.一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，包括以下步骤:⑴将新鲜西兰花的食用部分花枝于75-85°c下脱水0.5-1.5小时，然后在55飞5°C下烘至恒重，得到西兰花干物质；所述西兰花干物质粉碎至40飞0目后得到西兰花干粉；⑵将新收获的芥籽粉碎至40飞0目，得到芥籽粉；所述芥籽粉中加入蒸馏水，经超声波振荡l(T30min后真空抽滤除杂，得到粗酶液；⑶向所述西兰花干粉中加入所述粗酶液，搅拌均匀，35°C酶解0.5-1.5h，再加入质量浓度为95%的乙醇，经超声波振荡提取l(T60min，然后静置l(T60min，(期间每隔5分钟搅动I次)，得到提取液，该提取液过30目筛，除去提取物残渣，得到滤液；所述滤液经真空抽滤除去杂质后，即得萝卜硫素粗提液；⑷将所述萝卜硫素粗提液先于45飞5°C真空浓缩，除去大部分乙醇，再于6(T70°C真空浓缩，除尽乙醇，得到萝卜硫素粗提水溶液；(5)向所述萝卜硫素粗提水溶液中加入乙酸乙酯萃取2-3次，得乙酸乙酯相，该乙酸乙酯相于4(T60°C真空浓缩至膏状，然后用甲醇溶解洗脱，再于3(T50°C真空浓缩至膏状，即得膏状萝卜硫素粗提物；(6)所述膏状萝卜硫素粗提物经冷冻干燥至恒重，即得纯度为1°/15%的萝卜硫素粗品。
2.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤(2)中芥籽粉与蒸馏水的比例为I g:40 mL-60 mL。
3.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤⑵和所述步骤⑶中的超声波振荡条件均是指功率为50(T800W，温度为25-35°C。
4.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤⑶中的西兰花干粉与粗酶液的比例为I g:5 mL-15 mL。
5.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤⑷和所述步骤(5)中真空浓缩的条件均是指真空度为-0.06MPa- -0.08MPa。
6.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤(5)中萝卜硫素粗提水溶液与乙酸乙酯的比例为ImL:1 mL-3 mL。
7.如权利要求1所述的一种从西兰花中提取萝卜硫素的方法，其特征在于:所述步骤(6)中的冷冻干燥条件是指先对材料预冻，待温度达到-35-_45°C时，用真空泵抽真空，待压力达到25-35 Pa，开启加热；从_35°C至0°C，每5°C为一个阶段，每阶段控温加热l-2h，最后在5°C控温加热2-4h即可。
【文档编号】C12P13/00GK103436565SQ201310408729
【公开日】2013年12月11日 申请日期:2013年9月10日 优先权日:2013年9月10日
【发明者】李胜, 唐斌, 周文政, 马绍英, 张品南, 刘会杰, 赵生琴, 时振振, 苏李维 申请人:甘肃农业大学, 兰州汇通生物科技有限公司, 甘肃顺意生物科技有限公司