本发明属于动物饲料领域，具体地涉及一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣及其制备与应用。
背景技术：
：在蛋鸡养殖中，基于预混料使用方便，总成本偏低以及混料过程简便等优势，预混料的使用在养殖场中较普遍，尤其是在玉米、豆粕市场价格偏低的情况下，预混料市场占有率较高。对于中/小型养殖场，在使用预混料制作配合料时，通常是粉碎后的玉米与豆粕、预混料、石粉混合后直接饲喂鸡只。由于原料品种单一，使用简易型立式混合机，造成日粮营养不平衡或者缺乏，导致产蛋率上升慢，开产3-6周内达不到92-95％产蛋率；产蛋高峰期维持时间短，小于5个月，甚至无产蛋高峰期；产蛋后期3-4周平均产蛋率下降高于1％，产蛋率下降快；产蛋后期伴有鸡群掉毛严重，蛋壳质量差，破损蛋多，蛋壳颜色不均匀，肠道不健康，粪便稀，鸡舍内氨气浓度高等情况。大型养殖场为了配制营养均衡的配合饲料，则需要额外购买微生态制剂、多种饼粕类、益生菌等原料，增加了购买、管理、检测费用，因其化验检测能力低或者没有检测能力，对自配饲料质量无法品控，这些都使得预混料客户养殖成本增加，蛋鸡不能充分发挥生产潜能，并增加疾病发生率，降低养殖效益。预混料配制成全价料使用玉米、豆粕、氢钙、石粉、预混料等几种，原料单一，氨基酸来源不平衡，纤维素营养考虑不充分、钙磷比例不好调整也是造成蛋壳不好、肠道健康状况差、羽毛不好的原因之一。产蛋鸡因自身生理变化，50周龄以后，输卵管粘膜受损，输卵管炎发生率高，蛋壳品质急剧下降，破损率明显上升，产蛋率开始下降。尤其高产蛋鸡大量的钙用于形成蛋壳，产蛋日龄较大的鸡骨钙耗竭大且对钙的吸收能力变差，骨质疏松发生率高。目前，据统计，专业化鸡场异常蛋(软壳单、沙皮蛋、钢化蛋、裂纹蛋、破壳蛋)占产蛋总数的3-8％，普通农场或家庭式养殖占2-5％，蛋商因蛋壳品质低劣无法销售的蛋占总数的6-8％，蛋壳品质成为生产中迫切要求解决的问题。蛋壳颜色也是消费者衡量鸡蛋品质的一个重要指标，不仅关注蛋壳颜色，对蛋壳颜色的均匀度也有要求。总之，预混料使用带来的蛋壳质量差、粪便稀、羽毛覆盖率低、产蛋高峰期短、产蛋后期脂肪沉积多影响产蛋等诸多问题，而随着蛋鸡10万只以上养殖规模的提高，使用预混料占蛋鸡养殖的30-40％，严重影响了蛋鸡养殖场经济效益。目前的发明专利中，已经公开的涉及制备预混料的方法众多，申请号201410108510.0的发明专利申请公开了“一种开产蛋鸡预混料及由该预混料配制成的日粮”，其特征在于该预混料的组成为：复合微量元素、复合维生素、蛋鸡复合酶、鱼粉、输卵管炎预防剂、有机酸钙、抗应激剂、复合益生菌、植酸酶、蛋氨酸、甜菜碱、氯化胆碱、食盐、石粉、磷酸氢钙、乙氧基喹啉、稻壳粉和沸石粉。日粮中含有5％的所述开产蛋鸡预混料，以及配以玉米、豆粕、麸皮和石粉。本发明的有益效果：使得开产蛋鸡髓骨中贮备足够的钙，性成熟前后钙代谢平稳；性器官发育迅速，因开产导致的输卵管炎发病率降低到2％以下；开产应激得到有效缓解；机体免疫力增强；对以后产蛋高峰期的维持有显著影响。专用于开产蛋鸡，可实现蛋鸡开产期的顺利过渡，保障蛋鸡一生产蛋性能的充分发挥。申请号为201610259637.1的发明专利申请公开了“一种蛋鸡产蛋期复合预混料”，其特征在于由以下重量份的原料组成：微量元素15-18份、复合维生素8-12份、香味剂1-2份、甜味剂0.4-0.6份、中药添加剂1.5-1.8份、微生态制剂0.1-0.3份、抗氧化剂0.6-0.9份、鱼油1-2份、食盐0.8-1.2份、载体15-18份；该发明的一种蛋鸡产蛋期复合预混料配比简单，使用方便，能促进蛋鸡生殖器官的健康发育，维持正常的生殖功能，由该预混料配制成的日粮，保证了蛋鸡的营养需要和鸡蛋的营养价值，同时也提高了蛋鸡的免疫力。申请号为201110355784.6的发明专利申请公开了“一种延长产蛋高峰时间的产蛋鸡复合预混料”，其特征在于其能平衡日粮氨基酸，保持蛋鸡健康，提高饲料消化，改善禽产品质量，持续稳定产蛋高峰。本发明由以下原料制成：细沸石粉500-530，磷酸氢钙250-350，食盐60-70，固体蛋氨酸20-30，浓度50％包被氯化胆碱15-25，100亿个/克枯草芽孢杆菌15-25，复合微量元素10-20，浓度78.8％赖氨酸10-17，蛋鸡复合维生素6-10，饱和棕榈油脂6-10，5000IU植酸酶3-5，复合抗氧化剂2-3和复合非淀粉多糖酶2-2.4。单位为重量份。综上所述，由公开的专利中，其预混料的使用仍未完全解决产蛋期蛋鸡粪便稀，肠道健康不好，淘汰鸡脱毛严重，羽毛生长缓慢，免疫力、消化吸收与转化能力降低，蛋壳质量不好，产蛋高峰期短等缺陷。因此，根据产蛋期蛋鸡钙磷营养、纤维素营养、肠道健康微营养的需要，研制一种营养全面、效果明显的蛋壳好、粪便干、掉毛少，可以全面解决上述产期蛋鸡缺陷的预混料伴侣，在使用预混料及预混料伴侣配制成全价饲料的过程中，保障质量和安全的同时，节省人力、物力以及时间成本的需求已经迫在眉睫，以此提高规模鸡场养殖水平和经济效益，促进蛋鸡养殖健康发展。目前，酵母作为饲料添加剂已经广泛应用于饲料中。酵母添加剂,是利用生物技术生产的微生物添加剂的一种，作为天然的营养来源和营养载体，富含优质完全蛋白质、完整的B族维生素、以生命结合态形式存在的多种矿物质和功能膳食纤维，可直接作为动物饲料的蛋白源。另一方面酵母还可以稳定胃肠道微生物区系，提高动物对纤维素和矿物质的消化，增强动物免疫力，吸附致病因子。酵母菌具有的众多生理功能，使其在饲料工业中得到广泛的研究与应用，其作用机制总结如下：(1)直接营养作用，提供动物多种营养成分，促进动物生长发育。(2)提高动物肠道消化酶活性。(3)促进微生物繁殖和增强活性，调节胃肠道微生态平衡。(4)提高动物对纤维素和矿物质的消化率。(5)提高免疫力和抗应激能力，吸附致病因子，保障动物健康。酵母中包含某些抗氧化活性成分，例如谷胱甘肽(简称：GSH)，其主要功能有：(1)清除自由基、过氧化物、重金属及黄曲霉毒素等毒物；(2)参与氨基酸(谷氨酰氨、半胱氨酸及其它中性氨基酸)的转运；(3)利于铁的吸收、硒的吸收、钙的吸收，谷胱甘肽还可以使饲料中的过氧化脂肪酸在吸收时或吸收后恢复为正常的脂肪；(4)保护胃肠道黏膜上皮，防止因炎症、局部缺血、氧化物质等对肠黏膜的损伤；(5)贮存并提供其组成氨基酸(尤其是半胱氧酸)；(6)参与蛋白质和DNA的合成；(7)作为还原物质，利于维生素E、维生素C的还原，维持巯基酶活性。由此可见，活性酵母作为微生物菌剂在饲料中发挥着重要的作用。此外，如植物乳杆菌等益生菌也可从不同程度上改善机体的胃肠道环境，促进机体的消化吸收，在通过发酵作用消除发酵基质中抗营养因子的同时，提高机体对饲料的有效吸收与转化，提高机体的免疫抵抗能力。技术实现要素：本发明的目的是针对产蛋期蛋鸡预混料使用中产蛋鸡粪便稀，肠道健康不好，淘汰鸡脱毛严重等的缺陷提供一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，替代全价配合饲料中的部分豆粕，还可有效提高产蛋期蛋鸡机体的抗氧化活性，有效提高产蛋期蛋鸡的消化吸收率与转化能力，提高免疫力，保证产蛋期蛋鸡肠道健康，防止粪便过稀，改善产蛋期脱毛，羽毛生长缓慢状况；针对蛋壳质量不好，破蛋多，产蛋高峰期短等情况，有效改善蛋壳颜色及质量，促进机体健康，提高生产性能，延长产蛋周期。为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕25-35份，发酵饼粕20-25份，玉米副产品5-15份，氨基酸0.5-3份，小苏打0.5-3份，甜菜碱0.1-2份，血红素蛋白0.5-1.5份，辣椒渣3-7份，石粉0-3份，菌体蛋白8-15份，壳宝0.5-1.5份，磷酸氢钙0-3份，槲皮素0.5-1.5份，防霉剂0.02-0.1份，苣荬菜粉2-5份，复合微生态制剂0.5-1.5份，植物油0.5-2份，腐植酸钠0-3份。优选地，所述的一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕32-35份，发酵饼粕22-24份，玉米副产品10-15份，氨基酸2-3份，小苏打1-2份，甜菜碱0.7-1份，血红素蛋白0.9-1.1份，辣椒渣5-7份，石粉0.5-1.5份，菌体蛋白9-13份，壳宝0.8-1.2份，磷酸氢钙0.5-1.5份，槲皮素0.8-1.2份，防霉剂0.04-0.08份，苣荬菜粉2-4份，复合微生态制剂0.8-1.2份，植物油0.8-1.7份，腐植酸钠0.5-1.5份。更优选地，所述的一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕33.24份，发酵饼粕23份，玉米副产品12份，氨基酸2.4份，小苏打1.5份，甜菜碱0.8份，血红素蛋白1份，辣椒渣6份，石粉1份，菌体蛋白10份，壳宝1份，磷酸氢钙1份，槲皮素1份，防霉剂0.06份，苣荬菜粉3份，复合微生态制剂1份，植物油1份，腐植酸钠1份。进一步地，所述复合微生态制剂由以下重量份数的成分组成：酿酒酵母菌剂3-7份、枯草芽孢杆菌剂2-4份，植物乳杆菌剂3-7份，丁酸梭状芽孢杆菌剂2-4份、纳豆芽孢杆菌剂1-3份，蒙脱石15-20份；其中，所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848，所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.192567，所述丁酸梭状芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.184249，所述纳豆芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.119704。优选地，所述酿酒酵母菌剂的制备方法，包括如下步骤：取1环活化后的酿酒酵母tlj2016斜面菌体接种至种子培养基中，在28-30℃、摇床转速150-200r/min条件下培养25-30h，得到一级种子液；将培养好的一级种子液按5％-10％(v/v)的接种量，接种至发酵培养基，发酵时间25-30h，温度28-30℃，摇床转速150-200r/min，得到二级种子液；将二级种子液以5％-10％接种量接入到装有发酵培养基的发酵罐中，恒温培养，通风量4-6L/min，温度28-30℃，发酵全程调节发酵液pH值为6.0-6.5，转速150-200r/min，发酵至25-30h时，一次性添加终浓度为25-30mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20-30h得到最终发酵液，最终发酵液减压浓缩，20-35℃粉碎至粒度0.1-0.6mm即得酵母菌剂；所述种子培养基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCl0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，余量为水，pH6.0；所述发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,余量为水，pH6.0。进一步地，所述的发酵饼粕的制备方法包括如下步骤：按重量份数，将菜粕4-8份、棉粕4-8份、芝麻粕2-4份、棕榈仁粕1-3份，水20-31份，混合均匀，得到混合料；将混合料进行固态发酵，发酵恒温35℃，向所述混合料中按照液态种子液与混合料体积质量百分比先接入植物乳杆菌种子液1-3％(v/m)，发酵46-50小时后，得到一阶段发酵饼粕，再继续向一阶段发酵饼粕接入酿酒酵母种子液2-4％(v/m)，发酵46-50小时后，得到二阶段发酵饼粕，再向二阶段发酵饼粕继续接入枯草芽孢杆菌种子液2-4％(v/m)，发酵46-50小时后得到最终的发酵饼粕；所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.21794；所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789；所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。优选地，所述的发酵饼粕的制备方法包括如下步骤：按重量份数，将菜粕6份、棉粕6份、芝麻粕3份、棕榈仁粕2份，水25.5份，混合均匀，得到混合料；将混合料进行固态发酵，发酵恒温35℃，向所述混合料中按照液态种子液与混合料体积质量百分比先接入植物乳杆菌种子液2％(v/m)发酵48小时后，得到一阶段发酵饼粕，再继续向一阶段发酵饼粕接入酿酒酵母种子液3％(v/m)发酵48小时后，得到二阶段发酵饼粕，再向二阶段发酵饼粕继续接入枯草芽孢杆菌接种量种子液3％(v/m)发酵48小时后得到最终的发酵饼粕；所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.21794；所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789；所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。进一步地，所述植物乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液的制备方法如：从冻存管中蘸取一环植物乳杆菌CGMCCNo.21794，于MRS固体肉汤培养基上划线，37℃静置培养24小时后挑取单个菌落至装有MRS液体肉汤培养基的试管中，37℃静置培养24小时，得到一级种子液；将一级种子液以5％(v/v)接种量接种至装有MRS液体肉汤培养基的三角瓶中，37℃静置培养24小时，得到发酵饼粕所用的植物乳杆菌种子液；发酵饼粕所用的所述酿酒酵母种子液的制备方法与酿酒酵母菌剂的制备方法中所获得的二级种子液的制备方法相同；从冻存管中蘸取一环枯草芽孢杆菌FM537，于LB固体肉汤培养基上划线，37℃静置培养24小时后挑取单个菌落至装有LB液体肉汤培养基的试管中，转速150r/min，37℃培养24小时，得到一级种子液；将一级种子液以5％(v/v)接种量接种至装有LB液体肉汤培养基的三角瓶中，转速150r/min，37℃培养24小时，得到发酵饼粕所用的枯草芽孢杆菌种子液；MRS液体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏粉8，酵母膏粉4，葡萄糖20，磷酸氢二钾2，无水柠檬酸三氨2，三水合乙酸钠5，七水合硫酸镁0.2g，四水合硫酸锰0.05g，吐温-801ml，余量为水，最终pH5.7±0.2，121℃高压灭菌15min；MRS固体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏粉8，酵母膏粉4，葡萄糖20，磷酸氢二钾2，无水柠檬酸三氨2，三水合乙酸钠5，七水合硫酸镁0.2g，四水合硫酸锰0.05g，吐温-801ml，琼脂20，余量为水，最终pH5.7±0.2，121℃高压灭菌15min；LB液体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖1g，酵母膏粉5g，余量为水，最终pH7.0±0.2，121℃高压灭菌15min；LB固体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖1g，酵母膏粉5g，琼脂20，余量为水，最终pH7.0±0.2，121℃高压灭菌15min。进一步地，发酵饼粕所用的所述植物乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液活菌含量均≥1×109CFU/ml种子液。进一步地,所述玉米副产品为玉米皮、喷浆玉米皮、玉米DDGS、玉米胚芽粕中的一种或两种以上按任意比例的混合。进一步地，所述氨基酸为赖氨酸以及其他氨基酸中蛋氨酸、苏氨酸、色氨酸中的一种或两种以上的混合。进一步地，所述的血红素蛋白购自于山西杰隆源生物制品有限公司，主要原料组成为新鲜猪血分离出的血球，铁卟啉(以铁计)≥1.2。补充蛋壳腺素，有效恢复和改善成正常的蛋壳色泽，使蛋壳色度均匀。进一步地，所述的辣椒渣为提取辣椒红色素的辣椒皮渣。进一步地，所述菌体蛋白为谷氨酸渣、核苷酸渣、赖氨酸渣中的一种或两种以上的混合。进一步地，所述的壳宝购自于山西北正农生物工程有限公司，主要组成原料为蛋白(小肽)铜、蛋白(小肽)铁、蛋白(小肽)锌、蛋白(小肽)锰、蛋白(小肽)铬、蛋白(小肽)钴、硒代蛋氨酸、碘酸钙等。进一步地，所述的槲皮素，纯度≥95％，购自郑州荔诺生物科技有限公司。进一步地，所述的苣荬菜粉的制备包括如下步骤：选择开花期苣荬菜，利用滚筒式快速干燥方法将苣荬菜进行干燥，热风温度85-95℃，热风流量60％，快速干燥至叶粉水分含量为11％-13％，采用筛片孔径为3-5mm粉碎机粉碎，即获得苣荬菜粉。进一步地，所述防霉剂为露宝细盐。进一步地，所述的植物油由玉米油、米糠油、大豆油、大豆磷脂油、棉籽油、亚麻籽油、花生油中的一种或两种以上的混合。本发明另一目的是提供上述产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备方法，包括如下步骤：(1)预粉：先将花生粕、发酵饼粕以及辣椒渣分别采用粉碎机和筛片组合使用进行粉碎、过筛，所述筛片筛孔直径为5mm；(2)采用先配料后粉碎工艺，利用粉碎机、筛片以及搅拌混合的组合使用，筛片筛孔直径为5mm，将粉碎后的花生粕、辣椒渣、发酵饼粕与玉米副产品、氨基酸、小苏打、甜菜碱、血红素蛋白、石粉、菌体蛋白、壳宝、磷酸氢钙、槲皮素、防霉剂、苣荬菜粉、复合微生态制剂、腐植酸钠混合后，经过反复过筛和粉碎，得到混合料粉，向所述混合料粉中添加植物油进行混合，得到最终混合料；所述最终混合料中，成品粒度在1-2.8mm的最终混合料占最终混合料总量质量百分比的45-60％，成品粒度小于1.0mm的最终混合料低于最终混合料总量质量百分比的30％；(3)分装、打包即得产蛋期蛋鸡预混料伴侣。本发明中，所述植物乳杆菌保藏编号CGMCCNo.192567、丁酸梭状芽孢杆菌保藏编号CGMCCNo.184249、纳豆芽孢杆菌保藏编号CGMCCNo.119704、枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号：CGMCCNo.12848；所述酿酒酵母tlj2016已于2016年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。所述酿酒酵母tlj2016的最适生长pH为6.0-6.5,最适生长温度为28-35℃；所述酿酒酵母tlj2016是从一株宁夏果园中分离得到的酿酒酵母出发菌株经以下步骤得到：原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→高渗平板筛选→亚硝基胍(NTG)诱变筛选→高渗平板初筛→摇瓶筛选→发酵复筛(产GSH能力)→传代稳定性试验。1、本发明所提供的酿酒酵母对葡萄糖的耐受能力达到300g/L，利于其在高浓度葡萄糖条件下生产GSH；2、本发明所提供的酿酒酵母在5L发酵罐中发酵生产GSH终浓度达到3308mg/L；3、本发明所提供的酿酒酵母耐受L-半胱氨酸的能力远高于出发菌株，在5mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能缓慢生长，在40mmol/LL-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成；4、本发明所提供的酿酒酵母耐盐能力达到18％，有利于扩展其应用领域。有益效果：1、本发明的产蛋期蛋鸡预混料伴侣不仅可替代全价配合饲料中的部分豆粕，而且可有效提高蛋鸡机体的抗氧化活性，以及蛋鸡的消化吸收率与转化，显著提高免疫力，保证产蛋鸡肠道健康，降低粪便含水量，防止粪便过稀，改善产蛋期蛋鸡脱毛，羽毛生长缓慢状况，促进机体健康；针对蛋鸡的产蛋能力，预混料伴侣的添加可有效延缓产蛋率下降，减少异常料蛋比率，提高生产性能，可有效延长蛋鸡产蛋高峰期，延长产蛋周期到80周龄；针对蛋壳质量不好，破蛋多，产蛋高峰期短等情况，预混料伴侣的添加可有效改善蛋壳质量，提高蛋壳强度，使蛋壳的颜色变深变红，色度均匀。实验表明，实验组死淘率为0，而对照组则为1.17，说明添加本发明的预混料伴侣可有效提高产蛋期蛋鸡的生长状况。从料蛋比上看，由公知技术可知，料蛋比相对越低，产蛋期蛋鸡的生产性能越高，优质饲料的料蛋比在高峰期为1.8-2.2：1，由表4可以看出，试验组的料蛋比为1.90:1，明显高于实验前以及对照组，说明本发明对于蛋鸡的产蛋性能更高。试验组产蛋率较对照组明显提高了12.2％，商品蛋合格率较对照组显著提高了2.9％，有效降低了破蛋率。试验组蛋壳厚度和蛋壳强度较对照组分别提高了18.1％和17.86％，其中蛋壳强度达到了海兰褐蛋鸡蛋壳质量的最大水平；实验组蛋壳颜色色度较对照组显著提高了15。试验组粪便含水量较对照组显著降低了4.5％,说明添加本发明的预混料伴侣可有效改善产蛋鸡的肠道环境的同时，有助于机体对于饲料的有效消化吸收与转化。2、预混料伴侣中添加的酿酒酵母tlj2016，不仅可直接作为动物饲料的部分蛋白源，而且具有较高谷胱甘肽(GSH)产量特性，对产蛋期蛋鸡的生长具有显著促进作用，在高糖条件下，发酵50h后，其GSH含量达3308mg/L；此外对比该菌株对L-半胱氨酸具有较强的耐受能力，在含有40mmol/L的L-半胱氨酸浓度的发酵液中，其菌株生长活力旺盛，发酵结束后，菌体干重较出发菌株高出17.9g，GSH产量较出发菌株高出130.5g，因此，有利于通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH生产的特性，从而提高酿酒酵母菌抗氧化的特性，进而促进蛋白合成、提高养分利用率,最终促进产蛋期蛋鸡的生长。该菌株还可稳定胃肠道微生物区系，提高动物对纤维素和矿物质的消化，增强动物免疫力。酿酒酵母tlj2016耐盐能力达到18％，有利于扩展其应用领域，作为产蛋期蛋鸡预混料伴侣加入到全价饲料中，酿酒酵母tlj2016对于添加有盐类物质的饲料，具有良好的耐受性，并保持较高的生物活性。3、发酵饼粕通过微生物菌的发酵过程，可降解由其中菜粕以及棉粕所产生的棉酚以及硫苷这两种抗营养因子，发酵饼粕主要是利用微生物在发酵过程中产生的酶类对底物的作用，从而使发酵底物中的抗营养因子消除，同时可消除糖类大分子，降解大分子蛋白质为小分子物子，平衡互补氨基酸，提供优质钙、硒、镁、铁、锰、锌等矿物质元素，促进蛋白质和矿物质吸收利用率。并且发酵菌群还可以调整胃肠道。发酵结束后，发酵饼粕小肽含量≥5％，更能促进产蛋期鸡对饲料的有效的消化吸收以及转化作用；此外，发酵饼粕中的抗营养因子游离棉酚含量低于400mg/kg，硫甙含量低于50μmol/g。4、在用预混料配置全价料的过程中，本发明的产蛋期蛋鸡预混料伴侣避免了客户因添加的能量饲料原料与蛋白饲料原料单一而带来的营养不均衡，同时可避免预混料客户为满足营养均衡而购买多个品种饲料原料而造成的原料质量检测、存储、运输的资源浪费，以及因无检测能力及贮存过久带来的质量风险。具体实施方式下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。实施例1酵母菌剂以及发酵饼粕的制备酵母菌剂的制备方法，包括如下步骤：取1环活化后的酿酒酵母tlj2016斜面菌体接种至装有100mL种子培养基的500mL三角瓶中培养，在28℃、摇床转速150-200r/min条件下培养25-30h，得到一级种子液；将培养好的一级种子液按5％-10％(v/v)的接种量，接种至装有100mL发酵培养基的500mL三角瓶中进行发酵培养，发酵时间25-30h，温度28-30℃，摇床转速150-200r/min，得到二级种子液。将二级种子液以5％-10％接种量接入到3L发酵培养基的5L发酵罐，恒温培养，通风量4-6L/min，温度28-30℃，发酵全程调节发酵液pH值为6.0-6.5，转速150-200r/min，发酵至25-30h时，一次性添加终浓度为25-30mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵20-30h得到最终发酵液，最终发酵液减压浓缩，20-35℃粉碎至粒度0.1-0.6mm即得酵母菌剂；种子培养基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCl0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，余量为水，pH6.0；发酵培养基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,余量为水，pH6.0。发酵饼粕的制备方法包括如下步骤：按重量份数，将菜粕6份、棉粕6份、芝麻粕3份、棕榈仁粕2份，水25.5份，混合均匀，得到混合料；将混合料进行固态发酵，发酵恒温35℃，按照液态种子液与混合料体积质量百分比先接入植物乳杆菌种子液2％(v/m)，发酵48小时后，得到一阶段发酵饼粕，再继续向一阶段发酵饼粕接入酿酒酵母种子液3％(v/m)，发酵48小时后，得到二阶段发酵饼粕，再向二阶段发酵饼粕继续接入枯草芽孢杆菌种子液3％(v/m)，发酵48小时后得到最终的发酵饼粕；所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.21794；所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789；所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。植物乳杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌种子液的制备方法如下：从冻存管中蘸取一环植物乳杆菌CGMCCNo.21794，于MRS固体肉汤培养基上划线，37℃静置培养24小时后挑取单个菌落至装有10mL的MRS液体肉汤培养基的试管中，37℃静置培养24小时，得到一级种子液；将一级种子液以5％(v/v)接种量接种至装有1000mL的MRS液体肉汤培养基的三角瓶中，37℃静置培养24小时，得到发酵饼粕所用的植物乳杆菌种子液；酿酒酵母种子液的制备方法与酿酒酵母菌剂的制备方法中所获得的二级种子液方法相同；从冻存管中蘸取一环枯草芽孢杆菌FM537，于LB固体肉汤培养基上划线，37℃静置培养24小时后挑取单个菌落至装有10mL的LB液体肉汤培养基的试管中，转速150r/min，37℃培养24小时，得到一级种子液；将一级种子液以5％(v/v)接种量接种至装有1000mL的LB液体肉汤培养基的三角瓶中，转速150r/min，37℃培养24小时，得到发酵饼粕所用的枯草芽孢杆菌种子液；MRS液体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏粉8，酵母膏粉4，葡萄糖20，磷酸氢二钾2，无水柠檬酸三氨2，三水合乙酸钠5，七水合硫酸镁0.2g，四水合硫酸锰0.05g，吐温-801ml，余量为水，最终pH5.7±0.2，121℃高压灭菌15min；MRS固体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10，牛肉膏粉8，酵母膏粉4，葡萄糖20，磷酸氢二钾2，无水柠檬酸三氨2，三水合乙酸钠5，七水合硫酸镁0.2g，四水合硫酸锰0.05g，吐温-801ml，琼脂20，余量为水，最终pH5.7±0.2，121℃高压灭菌15min；LB液体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖1g，酵母膏粉5g，余量为水，最终pH7.0±0.2，121℃高压灭菌15min；LB固体肉汤培养基(g/L)：蛋白胨10g，氯化钠5g，葡萄糖1g，酵母膏粉5g，琼脂20，余量为水，最终pH7.0±0.2，121℃高压灭菌15min。发酵饼粕所用的植物乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液、枯草芽孢杆菌种子液活菌含量均≥1×109CFU/ml种子液。以下实施例2-4所使用的酿酒酵母菌剂以及发酵饼粕均为实施例1制备。血红素蛋、槲皮素、壳宝均为采购产品，其中：1、血红素蛋白：购自于山西杰隆源生物制品有限公司。主要原料组成为新鲜猪血分离出的血球，铁卟啉(以铁计)≥1.2。补充蛋壳腺素，有效恢复和改善成正常的蛋壳色泽，使蛋壳的颜色变深变红，色度均匀；2、槲皮素：纯度≥95％。购自郑州荔诺生物科技有限公司；3、壳宝购自于山西北正农生物工程有限公司；4、防霉剂：露宝细盐巴斯夫股份公司生产。实施例2产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕25份，发酵饼粕20份，玉米副产品5份，氨基酸0.5份，小苏打0.5份，甜菜碱0.1份，血红素蛋白0.5份，辣椒渣3份，菌体蛋白8份，壳宝0.5份，槲皮素0.5份，防霉剂0.02份，苣荬菜粉2份，复合微生态制剂0.5份，植物油0.5份。复合微生态制剂由以下重量份数的成分组成：酿酒酵母菌剂3份、枯草芽孢杆菌剂2份，植物乳杆菌剂3份，丁酸梭状芽孢杆菌剂2份、纳豆芽孢杆菌剂1份，蒙脱石15份；其中，所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789，植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.192567，丁酸梭状芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.184249，纳豆芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.119704，枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。玉米副产品为玉米皮、喷浆玉米皮、玉米DDGS、玉米胚芽粕。氨基酸为赖氨酸、蛋氨酸。菌体蛋白为谷氨酸渣、核苷酸渣、赖氨酸渣。苣荬菜粉的制备包括如下步骤：选择开花期苣荬菜，利用滚筒式快速干燥方法将苣荬菜进行干燥，热风温度85℃，热风流量60％，快速干燥至叶粉水分含量为11％％，采用筛片孔径为3mm粉碎机粉碎，即获得苣荬菜粉。植物油由玉米油、米糠油、大豆油组成。产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备方法，包括如下步骤：(1)预粉：先将花生粕、发酵饼粕以及辣椒渣分别采用粉碎机和筛片组合使用进行粉碎、过筛，所述筛片筛孔直径为5mm；(2)采用先配料后粉碎工艺，利用粉碎机、筛片以及搅拌混合的组合使用，筛片筛孔直径为5mm，将粉碎后的花生粕、辣椒渣、发酵饼粕与玉米副产品、氨基酸、小苏打、甜菜碱、血红素蛋白、石粉、菌体蛋白、壳宝、磷酸氢钙、槲皮素、防霉剂、苣荬菜粉、复合微生态制剂、腐植酸钠混合后，经过反复过筛和粉碎，得到混合料粉，向所述混合料粉中添加植物油进行混合，得到最终混合料；所述最终混合料中，成品粒度在1-2.8mm的最终混合料占最终混合料总量质量百分比的45％，成品粒度小于1.0mm的最终混合料低于最终混合料总量质量百分比的30％；(3)分装、打包即得产蛋期蛋鸡预混料伴侣。实施例3产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕35份，发酵饼粕25份，玉米副产品15份，氨基酸3份，小苏打3份，甜菜碱2份，血红素蛋白1.5份，辣椒渣7份，石粉3份，菌体蛋白15份，壳宝1.5份，磷酸氢钙3份，槲皮素1.5份，防霉剂0.1份，苣荬菜粉5份，复合微生态制剂1.5份，植物油2份，腐植酸钠3份。复合微生态制剂由以下重量份数的成分组成：酿酒酵母菌剂7份、枯草芽孢杆菌剂4份，植物乳杆菌剂7份，丁酸梭状芽孢杆菌剂4份、纳豆芽孢杆菌剂3份，蒙脱石20份；其中，所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789，所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.192567，丁酸梭状芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.184249，纳豆芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.119704，枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。玉米副产品为玉米皮、喷浆玉米皮、玉米DDGS。氨基酸为赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。菌体蛋白为谷氨酸渣、核苷酸渣、赖氨酸渣。苣荬菜粉的制备包括如下步骤：选择开花期苣荬菜，利用滚筒式快速干燥方法将苣荬菜进行干燥，热风温度95℃，热风流量60％，快速干燥至叶粉水分含量为13％，采用筛片孔径为5mm粉碎机粉碎，即获得苣荬菜粉。植物油由亚麻籽油、花生油组成。产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备方法，包括如下步骤：(1)预粉：先将花生粕、发酵饼粕以及辣椒渣分别采用粉碎机和筛片组合使用进行粉碎、过筛，所述筛片筛孔直径为5mm；(2)采用先配料后粉碎工艺，利用粉碎机、筛片以及搅拌混合的组合使用，筛片筛孔直径为5mm，将粉碎后的花生粕、辣椒渣、发酵饼粕与玉米副产品、氨基酸、小苏打、甜菜碱、血红素蛋白、石粉、菌体蛋白、壳宝、磷酸氢钙、槲皮素、防霉剂、苣荬菜粉、复合微生态制剂、腐植酸钠混合后，经过反复过筛和粉碎，得到混合料粉，向所述混合料粉中添加植物油进行混合，得到最终混合料；所述最终混合料中，成品粒度在1-2.8mm的最终混合料占最终混合料总量质量百分比的60％，成品粒度小于1.0mm的最终混合料低于最终混合料总量质量百分比的30％；(3)分装、打包即得产蛋期蛋鸡预混料伴侣。实施例4产蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣，由以下重量份数的成分组成：花生粕33.24份，发酵饼粕23份，玉米副产品12份，氨基酸2.4份，小苏打1.5份，甜菜碱0.8份，血红素蛋白1份，辣椒渣6份，石粉1份，菌体蛋白10份，壳宝1份，磷酸氢钙1份，槲皮素1份，防霉剂0.06份，苣荬菜粉3份，复合微生态制剂1份，植物油1份，腐植酸钠1份。复合微生态制剂由以下重量份数的成分组成：酿酒酵母菌剂5份、枯草芽孢杆菌剂3份，植物乳杆菌剂5份，丁酸梭状芽孢杆菌剂3份、纳豆芽孢杆菌剂2份，蒙脱石17.5份；其中，所述酿酒酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCCNo.12789，所述植物乳杆菌保藏编号为CGMCCNo.192567，丁酸梭状芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.184249，纳豆芽孢杆菌保藏编号为CGMCCNo.119704，枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌FM537，保藏编号为：CGMCCNo.12848。玉米副产品为玉米皮、玉米DDGS、玉米胚芽粕。氨基酸为赖氨酸以及色氨酸。菌体蛋白为谷氨酸渣、核苷酸渣、赖氨酸渣。苣荬菜粉的制备包括如下步骤：选择开花期苣荬菜，利用滚筒式快速干燥方法将苣荬菜进行干燥，热风温度90℃，热风流量60％，快速干燥至叶粉水分含量为12％，采用筛片孔径为4mm粉碎机粉碎，即获得苣荬菜粉。植物油由大豆磷脂油、棉籽油组成。蛋期蛋鸡预混料伴侣的制备方法，包括如下步骤：(1)预粉：先将花生粕、发酵饼粕以及辣椒渣分别采用粉碎机和筛片组合使用进行粉碎、过筛，所述筛片筛孔直径为5mm；(2)采用先配料后粉碎工艺，利用粉碎机、筛片以及搅拌混合的组合使用，筛片筛孔直径为5mm，将粉碎后的花生粕、辣椒渣、发酵饼粕与玉米副产品、氨基酸、小苏打、甜菜碱、血红素蛋白、石粉、菌体蛋白、壳宝、磷酸氢钙、槲皮素、防霉剂、苣荬菜粉、复合微生态制剂、腐植酸钠混合后，经过反复过筛和粉碎，得到混合料粉，向所述混合料粉中添加植物油进行混合，得到最终混合料；所述最终混合料中，成品粒度在1-2.8mm的最终混合料占最终混合料总量质量百分比的55％，成品粒度小于1.0mm的最终混合料低于最终混合料总量质量百分比的30％；(3)分装、打包即得产蛋期蛋鸡预混料伴侣。实施例5高糖条件下tlj2016发酵产谷胱甘肽(GSH)能力实验(1)摇瓶培养取tlj2016斜面菌种一环，接入装有30mL种子培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养30h得种子液；种子培养基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖35、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，余量为水，pH6.0。(2)5L发酵罐培养将种子液按10％(v/v)接种量，接入装有3L发酵罐培养基的5L发酵罐中，30℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，500rpm,恒pH6.0条件下进行发酵培养，发酵至30h时，一次性添加终浓度为25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵时间为20h，发酵结束。发酵罐培养基(g/L)：(NH4)2SO410、葡萄糖100、K2HPO4·3H2O8、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1,余量为水，pH6.0；发酵结束后，测定发酵液中GSH的含量为3308mg/L。实施例6L-半胱氨酸耐受力实验将出发菌株以及tlj2016斜面菌种各一环，分别接入装有30mL种子培养基的250mL摇瓶中150rpm,30℃培养进行培养，在培养至12h时，向摇瓶中加入不同终浓度的L-半胱氨酸，再培养10h，测定细胞干重，结果见表1、2；种子培养基(g/L)：(NH4)2SO46、葡萄糖20、K2HPO4·3H2O3、KH2PO40.5、酵母粉11、MnSO40.1、KCL0.1、FeSO40.1、MgSO4·7H2O0.1，余量为水，pH6.0；表1：出发菌株L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸浓度mmol/L0510152040出发菌株干重g/L22.615.710.24.32.20.8GSH浓度(mg/L)35.646.743.240.737.925.3表2tlj2016L-半胱氨酸耐受力L-半胱氨酸浓度mmol/L0510152040tlj2016干重g/L25.728.523.621.220.618.7GSH浓度(mg/L)73.298.3113.5121.7127.5135.8从表1、2的结果可以看出，对于出发菌株，培养基中添加L-半胱氨酸，细胞停止生长，并且开始自溶，导致GSH增长率随着L-半胱氨酸浓度的升高而降低；而低浓度L-半胱氨酸下，tlj2016仍能够缓慢生长，随着L-半胱氨酸浓度的提高，tlj2016菌株的细胞干重缓慢下降，而GSH浓度持续增长，这一结果将有利于GSH生产过程中通过添加前体氨基酸-L-半胱氨酸提促进GSH的生产。实施例7耐盐能力实验取tlj2016菌液1mL接种菌种于含有不同NaCl浓度的(含量梯度为0％、2％、5％、10％、15％、18％)的10mLYPD液体培养基(pH＝6.5)，置于30℃下分别培养24h，每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀，制备稀释度溶液，取0.1ml稀释液于YPD固体平板中涂布，于30℃生化培养箱中倒置培养36小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表3，可知该菌的耐盐浓度为18％，说明tlj2016不仅可以在常规环境中生存，在高盐条件下依然具有活力，可应用于酱油、腌制品等高盐食品加工过程中耗糖产谷胱甘肽。表3耐盐能力检测(×107cfu/ml)NaCl含量0％2％5％10％15％18％原始菌株5.16±0.424.38±0.422.15±0.210.12±0.1100Tlj20165.33±0.285.10±0.714.83±0.423.98±0.332.57±0.480.83±0.15实施例8一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣应用的验证实验(一)试验：试验于2015年7月-8在辽宁省桓仁地区蛋鸡养殖场、河南省郑州市蛋鸡养殖场、辽宁省沈阳市蛋鸡养殖场进行3次试验。试验设计：试验采用单因子实验设计，选取5120只产蛋期海兰褐蛋鸡，分为2个实验组，每组试验10个重复，每个重复256只。周期为30天。分为对照组与实验组，对照组日粮组成：5％预混料、62％玉米、20豆粕，8％石粉，将上述成分直接混合，进行投喂；实验组日粮：5％预混料，5％预混料伴侣(由实施例4制备)，62％玉米，8％石粉，将上述成分直接混合，进行投喂。喂料方法：换料过渡期为4天，每天按照25％比例增加，自由采食、饮水。每天饲喂2次,日出后半小时和日落前半小时，控制饲喂量，每次饲喂前料槽空槽1-1.5小时。饲养环境控制：鸡舍温度区间为20-24℃，根据日温调整风机、水帘的使用时长；湿度为40-60％；正常情况下维持光照时长为15-16小时/天，光照强度3瓦/平方米(白炽灯)；热应激导致的采食量严重下降时，可在午夜增加0.5-1小时光照，并补饲一次(3-5克/只)；舍内风速0.2米/秒。测定指标：产蛋率、采食量、料蛋比、商品蛋合格率、蛋壳强度、蛋壳强度、粪便含水量、死淘率。表4本发明对蛋鸡生产性能和蛋壳品质的影响从以上试验结果可以看出，本发明预混料伴侣在蛋壳质量、肠道健康、羽毛状态等方面使用效果显著改善，试验组死淘率为0，而对照组则为1.17，说明添加本发明的预混料伴侣可有效提高产蛋期蛋鸡的生长状况。从料蛋比上看，由公知技术可知，料蛋比相对越低，产蛋期蛋鸡的生产性能越高，优质饲料的料蛋比在高峰期为1.8-2.2：1，由表4可以看出，试验组的料蛋比为1.90:1，明显高于实验前以及对照组，说明本发明对于产蛋期蛋鸡的产蛋性能更高。试验组产蛋率较对照组明显提高了12.2％，商品蛋合格率较对照组显著提高了2.9％，有效降低了破蛋率。试验组蛋壳厚度和蛋壳强度较对照组分别提高了18.1％和17.86％，其中蛋壳强度达到了海兰褐蛋鸡蛋壳质量的最大水平；实验组蛋壳颜色色度较对照组显著提高了15。试验组粪便含水量较对照组显著降低了4.5％,说明添加本发明的预混料伴侣可有效改善产蛋期蛋鸡的肠道环境的同时，有助于机体对于饲料的有效消化与吸收。需要说明的是：本发明实施例2-3制备的一种产蛋期蛋鸡预混料伴侣及其制备同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。当前第1页1 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