本发明涉及一种抗菌保鲜剂及其制备方法，属于食品加工
技术领域：
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背景技术：
抗菌剂是指能够在一定时间内，使某些微生物(细菌、真菌、酵母菌、藻类及病毒等)的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质；保鲜剂是一种处理食品，为防止食品腐烂变质，保持营养成分及色香味不变，对食品进行短期保鲜的化学合成物质或天然物质。目前，常见的抗菌剂如甲壳素、壳聚糖、蜂胶、鱼精蛋白等，是对动物和植物体内提取得到的，具有来源有限、提取工艺要求高、提取成本高、提取物稳定性差、耐热性差、抗菌性弱等缺点；常见的保鲜剂有托布津、多菌灵、特克多、依迈唑等，是以药物合成的方法得到的，需要特殊的设备、操作复杂、成本高、大范围使用有困难，单独使用保鲜效果不理想。因此，急需找到一种具有来源广泛、成本低廉、稳定性高、耐热性高和适用范围广等优点的抗菌保鲜剂以克服现有抗菌剂、防腐剂存在的缺陷。乳酸链球菌素(nisin)是乳酸链球菌产生的一种多肽物质，由34个氨基酸残基组成，分子量约为3500da。由于乳酸链球菌素可抑制大多数革兰氏阳性细菌，并对芽孢杆菌的孢子有强烈的抑制作用，并且食用后在人体的生理ph条件和α-胰凝乳蛋白酶作用下很快水解成氨基酸，不会改变人体肠道内正常菌群以及产生如其它抗菌素所出现的抗性问题，更不会与其它抗菌素出现交叉抗性，是一种高效、无毒、安全、无副作用的天然食品抗菌剂。结冷胶别名凯可胶、洁冷胶，主要成分是由葡萄糖、葡萄糖醛酸和鼠李糖按2：1：1的比例构成的重复单元所组成的线形多聚糖。其具有良好的稳定性，耐酸解、耐酶解，即使在高压蒸煮和烘烤条件下都很稳定，在酸性产品中亦很稳定，贮藏时其质构不受时间与温度的变化，可作为增稠剂、稳定剂。本发明尝试以乳酸链球菌素以及结冷胶作为原材料，制备出一种具有来源广泛、成本低廉、稳定性高、耐热性高和适用范围广优点的抗菌保鲜剂。技术实现要素：为解决上述问题，本发明提供了一种抗菌保鲜剂及其制备方法。此抗菌保鲜剂是由结冷胶氧化物与乳酸链球菌接枝而成的，具有来源广泛、成本低廉、稳定性高、耐热性高和适用范围广等的优点。本发明的技术方案如下：本发明提供了一种抗菌保鲜剂，所述抗菌保鲜剂是由结冷胶氧化物与乳酸链球菌接枝而成的。在本发明的一种实施方式中，所述抗菌保鲜剂是由结冷胶氧化物与乳酸链球菌通过酰化反应接枝而成的。在本发明的一种实施方式中，所述抗菌保鲜剂中结冷胶氧化物与乳酸链球菌的比例为3-5:1。在本发明的一种实施方式中，所述抗菌保鲜剂中结冷胶氧化物与乳酸链球菌的比例为4:1。本发明提供了上述一种抗菌保鲜剂的制备方法，包含如下步骤：步骤1：制备结冷胶溶液；步骤2：制备氧化剂混合液；步骤3：用步骤1所得的结冷胶溶液与步骤2所得的氧化剂混合液制备结冷胶氧化物溶液；步骤4：制备缩合剂混合液；步骤5：制备乳酸链球菌素溶液；步骤6：用步骤3所得的结冷胶氧化物溶液、步骤4所得的缩合剂混合液与步骤5所得的乳酸链球菌素溶液制备抗菌保鲜剂。在本发明的一种实施方式中，所述步骤1为将结冷胶粉末溶解于氢氧化钠溶液中，煮沸至溶液澄清后加入异丙醇进行沉淀，离心后将沉淀物取出并干燥，将干燥的沉淀物加水复溶至一定浓度，加入阳离子交换树脂进行混合，混合后的树脂用过滤回收，滤液调节ph至中性，获得结冷胶溶液。在本发明的一种实施方式中，所述氢氧化钠溶液的质量百分浓度为2.5％。在本发明的一种实施方式中，所述异丙醇的添加量为澄清溶液体积的3-4倍。在本发明的一种实施方式中，所述异丙醇的添加量为澄清溶液体积的3倍。在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为8000-10000r/min、时间为10-20min。在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为9000r/min、时间为15min。在本发明的一种实施方式中，所述干燥为将沉淀物用烘箱烘干。在本发明的一种实施方式中，所述烘箱温度为60-70℃。在本发明的一种实施方式中，所述复溶为将干燥的沉淀物加水复溶至质量百分浓度为0.1-0.3％。在本发明的一种实施方式中，所述复溶为将干燥的沉淀物加水复溶至质量百分浓度为0.2％。在本发明的一种实施方式中，所述阳离子交换树脂加入量为复溶后沉淀物体积的0.3-0.5％。在本发明的一种实施方式中，所述阳离子交换树脂加入量为复溶后沉淀物体积的0.4％。在本发明的一种实施方式中，所述混合的时间为30min。在本发明的一种实施方式中，所述过滤回收为用砂芯过滤器进行过滤回收。在本发明的一种实施方式中，所述调节ph至中性为用氢氧化钠溶液调节ph至中性。在本发明的一种实施方式中，所述结冷胶溶液的质量百分浓度为1-3％。在本发明的一种实施方式中，所述结冷胶溶液的质量百分浓度为2％。在本发明的一种实施方式中，所述步骤2为分别称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末和溴化钠粉末溶解于水中，再加入次氯酸钠溶液，制备出氧化剂混合液。在本发明的一种实施方式中，所述2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末、溴化钠粉、水以及次氯酸钠溶液的体积比为1:10:10:750或为3:20:20:1200。在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂混合液的浓度为25-35g/l。在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂混合液的浓度为30g/l。在本发明的一种实施方式中，所述氧化剂混合液的ph为10。在本发明的一种实施方式中，所述步骤3为将步骤2所得的氧化剂混合液加入步骤1所得的结冷胶溶液中并进行搅拌，加入异丙醇进行沉淀，离心后将沉淀物取出并干燥，将干燥的沉淀物加水复溶至一定浓度，加入阳离子交换树脂进行混合，混合后的树脂用过滤回收，滤液调节ph至中性，获得结冷胶氧化物溶液。在本发明的一种实施方式中，所述搅拌的转速为1000r/min、时间为40min。在本发明的一种实施方式中，所述异丙醇的添加量为澄清溶液体积的3-4倍。在本发明的一种实施方式中，所述异丙醇的添加量为澄清溶液体积的3倍。在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为8000-10000r/min、时间为10-20min。在本发明的一种实施方式中，所述离心的转速为9000r/min、时间为15min。在本发明的一种实施方式中，所述干燥为将沉淀物用烘箱烘干。在本发明的一种实施方式中，所述烘箱温度为60-70℃。在本发明的一种实施方式中，所述复溶为将干燥的沉淀物加水复溶至质量百分浓度为0.1-0.3％。在本发明的一种实施方式中，所述复溶为将干燥的沉淀物加水复溶至质量百分浓度为0.2％。在本发明的一种实施方式中，所述阳离子交换树脂加入量为复溶后沉淀物体积的0.3-0.5％。在本发明的一种实施方式中，所述阳离子交换树脂加入量为复溶后沉淀物体积的0.4％。在本发明的一种实施方式中，所述混合的时间为30min。在本发明的一种实施方式中，所述过滤回收为用砂芯过滤器进行过滤回收。在本发明的一种实施方式中，所述调节ph至中性为用氢氧化钠溶液调节ph至中性。在本发明的一种实施方式中，所述结冷胶氧化物溶液的浓度为1-3g/l。在本发明的一种实施方式中，所述结冷胶氧化物溶液的浓度为2g/l。在本发明的一种实施方式中，所述步骤4为将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末溶解于水中，搅拌溶解，获得缩合剂混合液。在本发明的一种实施方式中，所述所述缩合剂混合液的浓度为30-40g/l。在本发明的一种实施方式中，所述所述缩合剂混合液的浓度为35g/l。在本发明的一种实施方式中，所述步骤5为称取乳酸链球菌素粉末溶解于乙酸溶液中，制备乳酸链球菌素溶液。在本发明的一种实施方式中，所述乳酸链球菌素溶液的浓度为50-60g/l。在本发明的一种实施方式中，所述乳酸链球菌素溶液的浓度为55g/l。在本发明的一种实施方式中，所述乙酸的ph为2-3。在本发明的一种实施方式中，所述乙酸的ph为2。在本发明的一种实施方式中，所述步骤6为再步骤3所得的结冷胶氧化物溶液中放入吗啉乙磺酸缓冲液调节其浓度，再放入步骤4所得的缩合剂混合液进行搅拌活化，最后加入步骤5所得的乳酸链球菌素溶液进行酰化反应，制备抗菌保鲜剂。在本发明的一种实施方式中，所述缓冲液为吗啉乙磺酸缓冲液。在本发明的一种实施方式中，所述吗啉乙磺酸缓冲液的ph为6。在本发明的一种实施方式中，所述调节浓度为调节浓度至1g/l。在本发明的一种实施方式中，所述缩合剂混合液的添加量为0.5-1.5％。在本发明的一种实施方式中，所述缩合剂混合液的添加量为1％。在本发明的一种实施方式中，所述搅拌活化的条件为温度40-50℃、转速800-1000r/min、时间30-40min。在本发明的一种实施方式中，所述搅拌活化的条件为温度45℃、转速900r/min、时间35min。在本发明的一种实施方式中，所述乳酸链球菌素溶液的添加量为0.5-1.5％。在本发明的一种实施方式中，所述乳酸链球菌素溶液的添加量为1％。在本发明的一种实施方式中，所述酰化反应的时间为16-20h。在本发明的一种实施方式中，所述酰化反应的时间为18h。本发明提供了上述一种抗菌保鲜剂的制备方法制备得到的抗菌保鲜剂。本发明提供了上述一种抗菌保鲜剂或上述一种抗菌保鲜剂的制备方法在抗菌保鲜方面的应用。有益效果：(1)本发明的抗菌保鲜剂适用范围广，可有效抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等革兰氏阳性菌的活性；(2)本发明的抗菌保鲜剂抗菌活性强，将本发明的抗菌保鲜剂应用于金黄色葡萄球菌和大肠杆菌，抗菌圈直径可分别达70、80mm；(3)本发明的抗菌保鲜剂耐热性强，可高达150℃。(4)本发明的抗菌保鲜剂能保鲜能力强，能够很好的增加食品的保质期与稳定性，将本发明的抗菌保鲜剂涂抹于水果、蔬菜表面、切面或溶解于果蔬汁中，可保持在25℃下放置5d都不发生劣变。具体实施方式下述实施例与对比例中所使用的结冷胶由江南大学糖化学与工业微生物教育部重点实验室提供；乳酸链球菌素由浙江新银象公司生产；其他试剂均为市售产品。下述实施例和对比例均以稳定性差且易变质的蓝莓、以及切面易氧化且易滋生细菌的苹果为例，衡量本发明抗菌保鲜剂的抗菌、保鲜能力。本发明涉及的检测方法如下：抗菌能力检测：分别取2个固体lb培养基30ml，微波炉中加热至沸腾，冷却至温度37℃，分别加入金黄色葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、白喉杆菌、破伤风杆菌、炭疽杆菌、各1ml，将两种培养基分别均匀的铺在培养皿上，待各培养基冷却凝固后，用直径6mm铁管在培养基上打孔，孔内分别精密加入实施例和对比例中得到的抗菌保鲜剂，待溶液完全吸收至培养基后，放入恒温培养箱，温度37℃放置24h，测量抗菌环直径。保鲜能力检测(黑莓)：将实施例与对比例中得到的抗菌保鲜剂加入黑莓鲜榨汁中，搅拌，在25-30℃下等待分别等待1、3、6、12、18个月时间，检测黑莓鲜榨汁中花色苷的成分残留量。抗菌能力以及保鲜能力检测(草莓)：将实施例与对比例中得到的抗菌保鲜剂涂抹于草莓切面，在25-30℃下放置4-11天，观察草莓的新鲜程度，此新鲜程度以草莓表面的变质面积衡量(此处变质是指草莓表面发白乃至腐烂，每个是实施例和对比例中设置3个草莓，变质面积取3个的平均值)。实施例1方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液；(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.01mmol和溴化钠粉末0.1mmol溶解于100ml蒸馏水中。加入7.5mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)；(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加3倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱60℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液；(4)缩合剂混合液制备：称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末各0.3g溶解于10ml蒸馏水中，搅拌溶解，获得浓度为30g/l缩合剂混合液；(5)乳酸链球菌素溶液制备：称取0.5g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph为2的乙酸溶液中，获得浓度为50g/l乳酸链球菌素溶液；(6)抗菌保鲜剂的制备：将在步骤(3)制备的结冷胶氧化物溶解于吗啉乙磺酸缓冲液(ph为6)中制备1g/l结冷胶氧化物溶液，同时添加步骤(4)的缩合剂混合液，40℃，800r·min-1转速下搅拌30min，进行结冷胶氧化物的活化反应。添加在步骤(5)制备的乳酸链球菌素溶液，保持温度和转速的稳定，进行结冷胶氧化物的酰化反应，16h后停止反应，得到抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。实施例2方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取200mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为2％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加4倍体积异丙醇沉淀，10000r/min离心20min后将沉淀物取出，80℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.2％(w/v)，加入0.5g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液；(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.03mmol和溴化钠粉末0.2mmol溶解于200ml蒸馏水中。加入12mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)；(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加4倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱80℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.2％(w/v)，加入0.5g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液；(4)缩合剂混合液制备：称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末各0.4g溶解于10ml蒸馏水中，搅拌溶解，获得浓度为40g/l缩合剂混合液；(5)乳酸链球菌素溶液制备：称取0.6g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph3的乙酸溶液中，获得浓度为60g/l乳酸链球菌素溶液；(6)抗菌保鲜剂的制备：将在步骤(3)制备的结冷胶氧化物溶解于吗啉乙磺酸缓冲液(ph6)中制备1g/l结冷胶氧化物溶液，同时添加步骤(4)的缩合剂混合液，40-50℃，1000r/min转速下搅拌40min，进行结冷胶氧化物的活化反应。添加在步骤(5)制备的乳酸链球菌素溶液，保持温度和转速的稳定，进行结冷胶氧化物的酰化反应，20h后停止反应，得到抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例1方法如下：结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液作为应用中的抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例2方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液；(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.01mmol和溴化钠粉末0.1mmol溶解于100ml蒸馏水中。加入7.5mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)；(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加3倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱60℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液，作为应用中的抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例3方法如下：乳酸链球菌素溶液制备：称取0.5g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph3的乙酸溶液中，获得浓度为50g/l乳酸链球菌素溶液，作为应用中的抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例4方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.01％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液；(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.01mmol和溴化钠粉末0.1mmol溶解于100ml蒸馏水中。加入7.5mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)；(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加3倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱60℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液；(4)缩合剂混合液制备：称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末各0.3g溶解于10ml蒸馏水中，搅拌溶解，获得浓度为30g/l缩合剂混合液；(5)乳酸链球菌素溶液制备：称取0.5g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph2的乙酸溶液中，获得浓度为50g/l乳酸链球菌素溶液；(6)抗菌保鲜剂的制备：将在步骤(3)制备的结冷胶氧化物溶解于吗啉乙磺酸缓冲液(ph6)中制备1g/l结冷胶氧化物溶液，同时添加步骤(4)的缩合剂混合液，40℃，800r/min转速下搅拌30min，进行结冷胶氧化物的活化反应。添加在步骤(5)制备的乳酸链球菌素溶液，保持温度和转速的稳定，进行结冷胶氧化物的酰化反应，16h后停止反应，得到抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例5方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液；(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.01mmol和溴化钠粉末0.1mmol溶解于100ml蒸馏水中。加入7.5mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)；(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加3倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱60℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液；(4)缩合剂混合液制备：称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末各0.3g溶解于10ml蒸馏水中，搅拌溶解，获得浓度为30g/l缩合剂混合液；(5)乳酸链球菌素溶液制备：称取0.1g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph2的乙酸溶液中，获得浓度为10g/l乳酸链球菌素溶液；(6)抗菌保鲜剂的制备：将在步骤(3)制备的结冷胶氧化物溶解于吗啉乙磺酸缓冲液(ph6)中制备1g/l结冷胶氧化物溶液，同时添加步骤(4)的缩合剂混合液，40℃，800r/min转速下搅拌30min，进行结冷胶氧化物的活化反应。添加在步骤(5)制备的乳酸链球菌素溶液，保持温度和转速的稳定，进行结冷胶氧化物的酰化反应，16h后停止反应，得到抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。对比例6方法如下：(1)结冷胶溶液制备：准确称取100mg结冷胶粉末，溶解于10ml2.5％氢氧化钠溶液中，制备成终浓度为1.0％(w/v)的结冷胶溶液，煮沸至溶液澄清。加3倍体积异丙醇沉淀，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，60℃烘箱烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶溶液。(2)氧化剂混合液制备：称取2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧自由基粉末0.01mmol和溴化钠粉末0.1mmol溶解于100ml蒸馏水中。加入7.5mmol次氯酸钠溶液，制备氧化剂混合液(ph10)，(3)结冷胶氧化物溶液制备：加入步骤(1)中的结冷胶溶液，在室温下1000r/min搅拌40min。加3倍体积异丙醇醇沉，8000r/min离心10min后将沉淀物取出，烘箱60℃烘至恒重。加蒸馏水复溶至溶液浓度为0.1％(w/v)，加入0.3g阳离子交换树脂均匀混合30min，树脂用砂芯过滤器过滤回收，滤液用2.5％氢氧化钠溶液调节至中性，获得结冷胶氧化物溶液(4)缩合剂混合液制备：称取1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和n-羟基硫代琥珀酰亚胺钠盐粉末各0.3g溶解于10ml蒸馏水中，搅拌溶解，获得浓度为30g/l缩合剂混合液(5)乳酸链球菌素溶液制备：称取0.5g乳酸链球菌素粉末溶解于10mlph2的乙酸溶液中，获得浓度为50g/l乳酸链球菌素溶液。(6)抗菌保鲜剂的制备：将在步骤(3)制备的结冷胶氧化物溶解于吗啉乙磺酸缓冲液(ph6)中制备1g/l结冷胶氧化物溶液，同时添加步骤(4)的缩合剂混合液，40℃，800r/min转速下搅拌30min，进行结冷胶氧化物的活化反应。添加在步骤(5)制备的乳酸链球菌素溶液，保持温度和转速的稳定，进行结冷胶氧化物的酰化反应，5h后停止反应，得到抗菌保鲜剂。将上述得到的抗菌保鲜剂进行检测，检测结果见表1-3。表1具体实施方式中抗菌性能检测结果表2具体实施方式中保鲜能力检测结果表3具体实施方式中抗菌能力和保鲜能力检测结果天数(d)对比例3对比例4实施例1实施例24变质面积6％变质面积6％变质面积0％变质面积1％5变质面积8％变质面积9％变质面积1％变质面积3％6变质面积14％变质面积11％变质面积3％变质面积4％7变质面积17％变质面积15％变质面积4％变质面积5％8变质面积24％变质面积21％变质面积4％变质面积6％9变质面积38％变质面积34％变质面积5％变质面积8％10变质面积47％变质面积46％变质面积7％变质面积10％11变质面积64％变质面积59％变质面积10％变质面积13％虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。当前第1页12