一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法与应用

一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法与应用
【专利摘要】本发明涉及一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法与应用。一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫，包括防臭抗菌层，所述的防臭抗菌层由吸附有枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的载体颗粒构成，每克载体颗粒吸附的芽孢总数为106～1010CFU。本发明所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫，采用枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌吸附于载体上用于去除含氮和含硫臭气达到消除异味的作用，同时上述菌在代谢过程中产生抗菌活性物质，对引起脚气病的致病性真菌的生长繁殖也有抑制作用，可以显著预防脚汗人群患足癣病的概率。
【专利说明】
一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法与应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法与应用，属于日用品技 术领域。
【背景技术】
[0002] 足癣是由致病性真菌引起的足部皮肤病，常见的诱发因素为足部多汗潮湿或鞋袜 不透气，具有传染性。足癣在全世界广为流行，在热带和亚热带地区更为普遍。在我国，足癣 的发病率也相当高。人的足底和趾间没有皮脂腺，从而缺乏抑制皮肤丝状真菌的脂肪酸，生 理防御机能较差，而这些部位的皮肤汗腺却很丰富，出汗比较多，加之空气流通性差、局部 潮湿温暖，有利于丝状真菌的生长。此外，足底部位皮肤角质层较厚，角质层中的角蛋白是 真菌的丰富营养物质，有利于真菌的生长。足癣患者的临床表现常为奇痒和脚臭，不但给患 者带来了反反复复的伤害与烦恼。而且对家人的正常生活也受到了影响，降低了居住环境 的空气质量。
[0003] 枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌是自然界中广泛存在的一种非致病性细菌，在生长 代谢过程中能够产生多种抗菌物质，如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物 质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。这些抗菌物质 可以抑制细菌、真菌和酵母，同时，枯草芽孢杆菌在生理代谢过程中可以产生氨基氧化酶及 分解硫化物的酶类，将臭源据氨类等化合物氧化成无臭、无毒害、无污染的物质，减少空气 中NH 3、H2S浓度。樊杰等研究表明，枯草芽孢杆菌好氧发酵一段时间内，枯草芽孢杆菌对NH4 +-1勵2，、勵34的总削减率达到了98.51%、84.90%、96.51%。而且具有温度、？田直、储藏 稳定性好等特点。因此，其在食品、医药、化工和防病等方面有重要的应用价值。
[0004] 本发明拟采用枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌以休眠状态用吸附剂吸附并均匀固 定在棉布中，在运输、货架等干燥的环境中以休眠状态存在，一旦使用，借助于人体的体温、 脚汗进行萌发，大量繁殖，进行代谢，分解其中的NH 3、H2S、等臭味物质，从而达到防臭的作 用，同时，在代谢过程中产生抗菌活性物质，对致病性真菌的生长繁殖也有抑制作用。从而 达到除臭抗菌的作用。
[0005] 中国专利文献CN102247611A(申请号201110189038.4)公开了一种微生物除臭剂 及其制备方法，其菌种组成为:嗜酸乳杆菌IO 6~IO9个/mL、短小芽孢杆菌IO6~IO9个/mL、枯 草芽孢杆菌IO 6~IO9个/mL、荧光假单胞菌IO5~IO7个/mL、沼泽红假单胞菌IO 5~IO7个/mL、 班图酒香酵母菌IO4~IO6个/mL、平常假丝酵母菌IO 4~IO6个/mL、扩张青霉IO4~IOiMVmU 米根霉IO4~IO6个/mL、绿色木霉IO4~IO6个/mL、细黄链霉菌IO 4~IO6个/mL和灰色链霉菌 IO4 ~IOfMVmL13
[0006] 中国专利文献CN104371959A(申请号201410657323.8)公开了生物除臭灭蝇复合 菌剂包括酵母菌、乳酸菌、功能芽孢杆菌、光合细菌和白僵菌，按顺序各菌种的质量比为〇. 5 ~2:0.5~2.5 :1.5~3.5 :1.5~2.5:1;微生物活菌总数彡109CFU/g。所述功能芽孢杆菌为 包括巨大芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、短小芽 孢杆菌和苏云金芽孢杆菌的混合菌剂。以及生物除臭灭蝇复合菌剂在垃圾回收过程中除臭 与灭蝇的应用。
[0007] 中国专利文献CN104126515A(申请号201410345580.8)公开了一种畜禽生物降解 垫，由载体和混合菌剂混合后粉碎制成，所述混合菌剂由以下短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆 菌、地衣芽孢杆菌、乙酸钙不动杆菌、脱氮副球菌、粪球产碱菌混合后经发酵、干燥制成。

【发明内容】

[0008] 本发明针对现有技术的不足，提供一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫及其制备方法 与应用。
[0009] 为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
[0010] -种吸附有益生菌的防臭抗菌垫，包括防臭抗菌层，所述的防臭抗菌层由吸附有 枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的载体颗粒构成，枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌的芽孢数量 之比为1: (0.5~2)，每克载体颗粒吸附的芽孢总数为IO6~101()CFU。
[0011] 根据本发明优选的，所述载体颗粒是将芽孢悬浮于pH6.0~7.2的磷酸缓冲液后进 行吸附制得。
[0012] 根据本发明优选的，所述枯草芽孢杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中 心(CGMCC)的保藏编号为1.933的枯草芽孢杆菌。
[0013] 根据本发明优选的，所述短小芽孢杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中 心(CGMCC)的保藏编号为1.937的短小芽孢杆菌。
[0014] 根据本发明优选的，所述枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌的活菌数之比为1:1。
[0015] 根据本发明优选的，所述的载体为活性炭纤维。活性炭纤维具有微孔分布均匀，比 表面积大，透气性良好、吸附速度快等特点，可根据不同尺码制作不同的形状。
[0016] 根据本发明优选的，所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫还包括设置有包覆防臭抗菌 层的透气层;进一步优选的，透气层材质为棉布。
[0017] 上述吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，包括如下步骤：
[0018] (1)取枯草芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为100~150亿/毫升、 芽孢形成率达95%以上的枯草芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得枯草芽孢杆菌；
[0019] (2)取短小芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为25~35亿/毫升、芽 孢形成率达95%以上的短小芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得短小芽孢杆菌；
[0020] (3)将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤(2)制得的短小芽孢杆菌按芽孢数量比 1: (0.5~2)的比例混合，然后用pH6.0~7.2的磷酸缓冲液配制浓度为IO6~IOiqCFU的芽孢 液;按照每克载体含有IO 8~IO9CFU的芽孢数将芽孢液与载体混合，吸附均匀，制得吸附载 体；
[0021 ] (4)将步骤(3)制得的吸附载体在37~60°C条件下，干燥4~6h，制得吸附有益生菌 的载体;经包覆透气层，制得吸附有益生菌的防臭抗菌垫。
[0022] 根据本发明优选的，所述步骤(1)中的活化培养为将菌株接种于活化培养基中，在 37°C活化培养28~32h;
[0023] 上述活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0024] 葡萄糖1~2.5%，蛋白胨0.1~0.5%，酵母粉0.5~1.0%，氯化钠0.1~0.3%，余 量水，ρΗ6·7~7.2;
[0025] 根据本发明优选的，所述步骤(1)中的发酵培养，步骤如下：
[0026] 将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌发酵培养基，在37°C发酵培养30h， 制得枯草芽孢杆菌发酵液；
[0027]上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0028] 葡萄糖2%~5%，酵母粉0 · 1 %~0 · 5%，玉米浆0 · 5%~1 ·0%，玉米粉0 · 5%~ 0.8%，磷酸二氢钾0.1 %~0.3%，硫酸镁0.01 %~0.05%，氯化钠0.1 %~0.3%，硫酸锰 0.01%~0.03%，余量水4册.8~7.2。
[0029] 根据本发明优选的，所述步骤(2)中的活化培养为将菌株接种于活化培养基中，在 37°C活化培养28~32h;
[0030] 上述活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0031] 葡萄糖0 · 5~2 · 0，硫酸铵0 · 1~0 · 7 %，酵母粉0 · 1~0 · 8 %，硫酸镁0 · 01~0 · 05 %， 玉米衆〇.1~1%，余量水4册.5~7.3。
[0032]根据本发明优选的，所述步骤(2)中的发酵培养，步骤如下：
[0033] 将活化后的短小芽孢杆菌接种于短小芽孢杆菌发酵培养基，在37°C发酵培养28h， 制得短小芽孢杆菌发酵液；
[0034] 上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0035] 葡萄糖0.5~2% %、玉米淀粉1~2%、蛋白胨0.5~1.5%、硫酸铵0.3~0.7%、 ΚΗ2Ρ〇4〇·1 ~0.5%、MgS〇4 · 7H20 0.1 ~0.2%，余量水，ρΗ6·7~7.0。
[0036]上述吸附有益生菌的防臭抗菌垫在制备防臭抗菌功能鞋垫或制备治疗致病性真 菌引起的脚气病的鞋垫中的应用。
[0037]有益效果
[0038] 1、本发明所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫，采用枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌吸 附于载体上用于去除含氮和含硫臭气达到消除异味的作用，同时上述菌在代谢过程中产生 抗菌活性物质，对引起脚气病的致病性真菌的生长繁殖也有抑制作用，可以显著预防脚汗 人群患足癣病的概率；
[0039] 2、本发明选用特定的枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌按照特定比例吸附于活性炭 纤维上，进一步提高了枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的协同作用，使得吸附有益生菌的防 臭抗菌垫在除臭抗菌方面的效果更佳突出；
[0040] 3、本发明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，采用的活性炭纤维作为载体，其具 有微孔发达、比表面积大、超强吸附的功能，可以起到吸附臭味、致病菌及汗液的作用，对除 臭抗菌达到辅助增强的效果；
[0041] 4、本发明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，采用特殊的缓冲液悬浮 后吸附于载体上，一旦遇有富含氮源和硫源的环境，芽孢能够较为快速的萌发并吸收消耗 氮源和硫源，不仅增强了防臭抗菌的功能，而且更有利于延长本产品的有效期，降低了对该 产品存放条件和运输条件的要求。
【附图说明】
[0042] 图1为本发明所述的吸附有益生菌的防臭抗菌垫的结构示意图；
[0043]图中：I、防臭抗菌层，2、活性炭纤维，3、透气层。
【具体实施方式】
[0044]下面结合实施例及说明书附图对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但本发 明所保护范围不限于此。
[0045]实施例1~2中所述枯草芽孢杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心 (CGMCC)，保藏编号为1.933;实施例3中所述枯草芽孢杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管 理中心(CGMCC)，保藏编号为1.1413。
[0046]实施例1~2中所述短小芽孢杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管理中心 (CGMCC)，保藏编号为1.937;实施例3中所述短小芽孢杆菌购自中国普通微生物菌种保藏管 理中心(CGMCC)，保藏编号为1.940。
[0047] 实施例1
[0048] -种吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，包括如下步骤：
[0049] (1)取枯草芽孢杆菌，在37 °C活化培养18h，然后在37 °C发酵培养30h，制得活菌浓 度为110亿/毫升，芽孢形成率达95 %以上的枯草芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢杆菌；
[0050]上述枯草芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0051 ] 葡萄糖1.5 %，蛋白胨0.3 %，酵母粉0.5 %，氯化钠0.1 %，余量水，pH6.8。
[0052]上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0053] 葡萄糖2 %，蛋白胨0.1 %，玉米浆0.5 %，酵母膏0.4 %，玉米粉0.5 %，糊精0.6 %， 磷酸二氢钾〇. 1 %，硫酸镁〇. 〇 1 %，氯化钾〇. 05 %，氯化钠0.1 %，硫酸锰0.01 %，余量水， pH6.8 〇
[0054] (2)取短小芽孢杆菌，在37°C活化培养16h，然后在37°C发酵培养28h，制得活菌浓 度为31亿/毫升的短小芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉淀，制得短小芽孢杆菌；
[0055] 上述短小芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0056] 葡萄糖2.0 %，硫酸铵0.5 %，酵母粉0.8 %，硫酸镁0.03 %，玉米浆0.3 %，余量水， ρΗ7·0〇
[0057] 上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0058] 葡萄糖0 · 5 %、玉米淀粉1 · 2 %、蛋白胨 1 %、硫酸铵0 · 3 %、KH2PO4O · 2 %、MgS〇4 · 7H20 0.1%，余量水，ρΗ6·8。
[0059] (3)将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤(2)制得的短小芽孢杆菌按芽孢数量比 1:1的比例混合，然后用PH6.8的磷酸缓冲液配制浓度为IO 9CFUAiI的芽孢液;按照每克载体 含有IO8CFU的芽孢数将芽孢液与活性炭纤维混合，吸附均匀，制得吸附活性炭纤维；
[0060] (4)将步骤(3)制得的吸附活性炭纤维在60°C条件下，干燥5h，制得吸附有益生菌 的活性炭纤维;经包覆棉布材质的透气层，制得吸附有益生菌的防臭抗菌垫。
[0061] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，包括防臭抗菌层1，所述的防臭抗菌层1 由吸附有枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的吸附有益生菌的活性炭纤维2构成，枯草芽孢杆 菌与短小芽孢杆菌的芽孢数量之比为1:1，每克吸附有益生菌的活性炭纤维2吸附的芽孢总 数为 IO6 ~IOiqCFU;
[0062] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫还包括设置有包覆防臭抗菌层1的透气层3。
[0063] 实施例2
[0064] -种吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，包括如下步骤：
[0065] (1)取枯草芽孢杆菌，在37 °C活化培养20h，然后在37 °C发酵培养28h，制得活菌浓 度为105亿/毫升，芽孢形成率达95 %以上的枯草芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢杆菌；
[0066]上述枯草芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0067] 葡萄糖1 %，蛋白胨0.5%，酵母粉0.8%，氯化钠0.3%，余量水，pH7.2;
[0068]上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0069] 葡萄糖3 %，蛋白胨0 · 2 %，玉米浆0 · 6 %，酵母膏0 · 5 %，玉米粉0 · 8 %，糊精0 · 3 %， 磷酸二氢钾0.2 %硫酸镁0.03 %，氯化钾0.01 %，氯化钠 0.2 %硫酸锰0.02 %，余量水， ρΗ7·0〇
[0070] (2)取短小芽孢杆菌，在37°C活化培养17h，然后在37°C发酵培养32h，制得活菌浓 度为31亿/毫升的短小芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉淀，制得短小芽孢杆菌； [0071 ]上述短小芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0072] 葡萄糖1.8,硫酸铵0.6%，酵母粉0.5%，硫酸镁0.03%，玉米浆1%，余量水， pH7.0；
[0073]上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0074]葡萄糖 1 %、玉米淀粉1 · 5 %、蛋白胨0 · 8 %、硫酸铵0 · 5 %、KH2PO4O · 3 %、MgS〇4 · 7H20 0.2%，余量水，ρΗ6·8。
[0075] (3)将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤(2)制得的短小芽孢杆菌按芽孢数量比 1:2的比例混合，然后用pH7.0的磷酸缓冲液配制浓度为IO9的芽孢液;按照每克载体含有 IO8CFU的芽孢数将芽孢液与活性炭纤维混合，吸附均匀，制得吸附活性炭纤维；
[0076] (4)将步骤(3)制得的吸附活性炭纤维在55°C条件下，干燥6h，制得吸附有益生菌 的活性炭纤维;经包覆棉布材质的透气层，制得吸附有益生菌的防臭抗菌垫。
[0077] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，包括防臭抗菌层1，所述的防臭抗菌层1 由吸附有枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的吸附有益生菌的活性炭纤维2构成，枯草芽孢杆 菌与短小芽孢杆菌的芽孢数量之比为2:1，每克吸附有益生菌的活性炭纤维吸附的芽孢总 数为 IO6 ~IOiqCFU;
[0078] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫还包括设置有包覆防臭抗菌层1的透气层3。
[0079] 实施例3
[0080] 一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，包括如下步骤：
[0081 ] (1)取枯草芽孢杆菌，在37 °C活化培养22h，然后在37 °C发酵培养30h，制得活菌浓 度为140亿/毫升，芽孢形成率达95 %以上的枯草芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉 淀，制得枯草芽孢杆菌；
[0082]上述枯草芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0083] 葡萄糖1 ·8%，蛋白胨0·5%，酵母粉0·7%，氯化钠0· 15%，余量水，pH7·0;
[0084]上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0085] 葡萄糖2.5 %，酵母粉0.5 %，玉米浆0.8 %，玉米粉0.5 %，磷酸二氢钾0.3 %，硫酸 镁O. OI %，氯化钠 O. I %，硫酸锰0.03 %，余量水，pH6.8。
[0086] (2)取短小芽孢杆菌，在37°C活化培养20h，然后在37°C发酵培养28h，制得活菌浓 度为28亿/毫升的短小芽孢杆菌发酵液，5000rpm离心20min，取沉淀，制得短小芽孢杆菌；
[0087]上述短小芽孢杆菌活化培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0088] 葡萄糖1 · 2，硫酸铵0 · 3 %，酵母粉0 · 5 %，硫酸镁0 · 05 %，玉米浆0 · 6 %，余量水， pH6.5；
[0089] 上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比：
[0090] 葡萄糖2%、玉米淀粉1 %、蛋白胨0.5%、硫酸铵0.3%、KH2P〇4〇. 1 %、MgS〇4 · 7H20 0.1%，余量水，ρΗ6·7。
[0091] (3)将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤(2)制得的短小芽孢杆菌按芽孢数量比 1:0.5的比例混合，然后用pH7.0的磷酸缓冲液配制浓度为IO 9的芽孢液;按照每克载体含有 IO8CFU的芽孢数将芽孢液与活性炭纤维混合，吸附均匀，制得吸附活性炭纤维；
[0092] (4)将步骤(3)制得的吸附活性炭纤维在58°C条件下，干燥5h，制得吸附有益生菌 的活性炭纤维;经包覆棉布材质的透气层，制得吸附有益生菌的防臭抗菌垫。
[0093] 上述制得的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，包括防臭抗菌层1，所述的防臭抗菌层1 由吸附有枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的吸附有益生菌的活性炭纤维2构成，枯草芽孢杆 菌与短小芽孢杆菌的芽孢数量之比为1:0.5,每克吸附有益生菌的活性炭纤维2吸附的芽孢 总数为IO 6~IOiqCFU;
[0094] 所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫还包括设置有包覆防臭抗菌层1的透气层3。
[0095] 对比例1
[0096] 按实施例3所述制备方法制得的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，不同之处在于，步骤 (3)采用水配制浓度为109的芽孢液。
[0097] 对比例2
[0098] 按实施例1所述制备方法制得的吸附有益生菌的防臭抗菌垫，不同之处在于，步骤 (3)中将枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌按芽孢数量比1:5的比例混合。
[0099] 实验例1
[0100] 芽孢萌发试验:将实施例3和对比例1制得的防臭抗菌垫在室温干燥条件下放置半 年，然后取出吸附活性炭纤维进行无菌操作，在lwt%葡萄糖溶液中进行萌发试验，用稀释 平板法计数，结果如下：
[0101] 表1
L〇1 〇3」由表1中可以看出，用缓冲液悬浮的芽孢液制得的吸附活性炭纤维，芽孢萌发率 高，这说明芽孢在合适的PH环境下更容易萌发从而发挥作用。
[0104] 实验例2
[0105]除臭试验:将实施例1和对比例2制得的防臭抗菌垫在室温干燥条件下放置一段时 间，然后取出吸附活性炭纤维进行无菌操作进行下列除臭试验：
[0? 06]在2L大烧杯中加入无菌的培养基100毫升(鹿糖50g，氨水IOmL，L-半胱氨酸IOOmg， KH2P〇42g，MgS〇4.7H2〇 0.5g，FeS〇4.7H20 0.1g，l%ZnS〇45mL，NaCl 2g，水 1000mL，pH自 然），加入定量的吸附活性炭纤维一块，以等量无菌水作为空白对照，再往大烧杯中放入装 有20mL 0.005N硫酸吸收液的50mL小烧杯，再放入装有20mL 0.2%碱性锌氨络盐Zn(NH3)4 · (OH)2的50mL小烧杯，大烧杯上用3层保鲜膜覆盖，密封。置于30°C的培养箱中培养。24h后， 取出小烧杯检测氨和硫化氢的浓度，计算氨和硫化氢的脱除率，结果如表2:
[0107]表2
[0109] 由表2中可以看出，实施例1的除臭效果要好于对比例2,这说明两种菌的混合比例 影响除臭效果。
[0110] 实验例3
[0111] 抑菌试验:将实施例1和对比例2制得的防臭抗菌垫在室温干燥条件下放置一段时 间，然后取出吸附活性炭纤维进行无菌操作进行下列抑菌试验：
[0112] 将两块大小相同的吸附活性炭纤维无菌操作分别加入盛有100毫升LB培养基的液 体发酵培养液中，然后分别按3%接种量接种大肠杆菌和葡萄球菌(浓度IO 8个/毫升），以没 有放吸附活性炭纤维的作为空白对照，培养16小时，分别平板计数，计算抑菌率，结果如表 3：
[0113] 表3
[0115]由表3中可以看出，实施例1的抑菌效果要好于对比例2，这说明两种菌的混合比例 影响抑菌效果。
【主权项】
1. 一种吸附有益生菌的防臭抗菌垫，其特征在于，包括防臭抗菌层，所述的防臭抗菌层 由吸附有枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌的载体颗粒构成，枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌的 芽孢数量之比为1: (〇.5~2)，每克载体颗粒吸附的芽孢总数为IO6~101()CFU。2. 如权利要求1所述的防臭抗菌垫，其特征在于，所述载体颗粒为将芽孢悬浮于pH6.0 ~7.2的磷酸缓冲液后进行吸附制得。3. 如权利要求1所述的防臭抗菌垫，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为来源于中国普通 微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为1.933的枯草芽孢杆菌； 优选的，所述短小芽孢杆菌为来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为 1.937的短小芽孢杆菌。4. 如权利要求1所述的防臭抗菌垫，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌与短小芽孢杆菌的 活菌数之比为1:1。5. 如权利要求1所述的防臭抗菌垫，其特征在于，所述的载体为活性炭纤维； 优选的，所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫还包括设置有包覆防臭抗菌层的透气层;进 一步优选的，透气层材质为棉布。6. 权利要求1所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫的制备方法，其特征在于，包括如下步 骤： (1) 取枯草芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为100~150亿/毫升、芽孢 形成率达95%以上的枯草芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得枯草芽孢杆菌； (2) 取短小芽孢杆菌，经活化培养、发酵培养，制得活菌浓度为25~35亿/毫升、芽孢形 成率达95%以上的短小芽孢杆菌发酵液，固液分离，制得短小芽孢杆菌； (3) 将步骤（1)制得的枯草芽孢杆菌、步骤（2)制得的短小芽孢杆菌按芽孢数量比1: (0.5~2)的比例混合，然后用pH6.0~7.2的磷酸缓冲液配制浓度为IO 6~IOiqCFU的芽孢液； 按照每克载体含有IO8~IO9CFU的芽孢数将芽孢液与载体混合，吸附均匀，制得吸附载体； (4) 将步骤(3)制得的吸附载体在37~60°C条件下，干燥4~6h，制得吸附有益生菌的载 体;经包覆透气层，制得吸附有益生菌的防臭抗菌垫。7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1)中的活化培养为将菌株接 种于活化培养基中，在37 °C活化培养28~32h; 上述活化培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖1~2.5%，蛋白胨0.1~0.5%，酵母粉0.5~1.0%，氯化钠0.1~0.3%，余量水， ρΗ6·7~7·2; 优选的，所述步骤(1)中的发酵培养，步骤如下： 将活化后的枯草芽孢杆菌接种于枯草芽孢杆菌发酵培养基，在37°C发酵培养30h，制得 枯草芽孢杆菌发酵液； 上述枯草芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖2%~5%，酵母粉0.1%~0.5%，玉米浆0.5%~1.0%，玉米粉0.5%~0.8%， 磷酸二氢钾〇 · 1 %~〇 · 3%，硫酸镁0 · 01 %~0 · 05 %，氯化钠0 · 1 %~0 · 3 %，硫酸锰0 · 01 %~ 0.03%，余量水4册.8~7.2。8. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的活化培养为将菌株接 种于活化培养基中，在37 °C活化培养28~32h; 上述活化培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖O · 5~2 · O，硫酸铵O · 1~O · 7%，酵母粉O · 1~O · 8%，硫酸镁O · Ol~O · 05%，玉米 浆0.1~1%，余量水，？册.5~7.3。9. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的发酵培养，步骤如下： 将活化后的短小芽孢杆菌接种于短小芽孢杆菌发酵培养基，在37°C发酵培养28h，制得 短小芽孢杆菌发酵液； 上述短小芽孢杆菌发酵培养基，组分如下，均为质量百分比： 葡萄糖0 · 5~2 % %、玉米淀粉1~2 %、蛋白胨0 · 5~1 · 5 %、硫酸铵0 · 3~0 · 7 %、KH2PO4 0.1 ~0.5%、MgS〇4 · 7H20 0.1 ~0.2%，余量水，ρΗ6·7~7.0。10. 权利要求1所述吸附有益生菌的防臭抗菌垫在制备防臭抗菌功能鞋垫或制备治疗 致病性真菌引起的脚气病的鞋垫中的应用。
【文档编号】B01D53/48GK105944130SQ201610352966
【公开日】2016年9月21日
【申请日】2016年5月24日
【发明人】楚杰, 刘可春, 韩利文, 何秋霞, 韩建, 陈锡强, 王荣春, 侯海荣, 陈维云
【申请人】山东省科学院生物研究所